重癥急性胰腺炎大鼠血清Apelin、C反應蛋白及腫瘤壞死因子-α水平變化及臨床意義

李　衛　周筱筠　盧先州　劉龍飛　徐志廣　陳詩怡

(南華大學附屬南華醫院肝膽外科，湖南　衡陽　421002)

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重癥急性胰腺炎大鼠血清Apelin、C反應蛋白及腫瘤壞死因子-α水平變化及臨床意義

李衛周筱筠盧先州劉龍飛徐志廣陳詩怡

(南華大學附屬南華醫院肝膽外科，湖南衡陽421002)

〔摘要〕目的探討重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠血清Apelin、C反應蛋白(CRP)及腫瘤壞死因子(TNF)-α水平的變化及臨床意義。方法將36只SD雄性大鼠按照隨機數字表法分為SAP組、假性手術組、對照組，每組12只，SAP組按照大鼠體重1 ml/kg劑量膽總管注入50 g/L牛磺膽酸鈉制備SAP模型，假性手術組行SAP組相同手術但不注射藥物，對照組正常飼養。采用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)法測定Apelin、CRP及TNF-α水平，光鏡觀察SAP胰腺組織變化并進行組織病理評分。結果SAP組胰腺組織嚴重水腫，組織細胞壞死、具有片狀出血斑并且胰腺出現局部皂化斑，假性手術組正常或者輕微水腫，無明顯異常，對照組組織正常，建模成功。SAP組血清CRP和TNF-α水平均高于假性手術組和對照組，Apelin明顯低于假性手術組和對照組(P<0.05)。SAP組胰腺組織病理學評分高于假性手術組和對照組(P<0.05)。SAP組血清Apelin水平與胰腺組織病理學評分呈負相關(r=-0.876,P<0.05)，CRP和TNF-α水平與胰腺組織病理學評分呈正相關(r=0.698、0.724,P<0.05)。結論血清Apelin、CRP及TNF-α水平變化與SAP發生、發展密切相關，可以作為疾病嚴重程度判斷和治療效果評價的重要指標。

〔關鍵詞〕重癥急性胰腺炎；血清Apelin；C反應蛋白；腫瘤壞死因子-α

目前認為重癥胰腺炎(SAP)發病機制主要是胰腺自身消化和炎癥細胞因子激活，尤其是炎癥因子相互作用和累計作用，導致血管滲漏、低血容量以及多系統器官衰竭等重癥發生〔1〕。Apelin是一種脂肪細胞因子，是血管緊張素受體樣蛋白J受體內源性配體，在肥胖、胰島素抵抗、心血管系統疾病以及炎癥反應中起重要作用〔2〕；C反應蛋白(CRP)和腫瘤壞死因子(TNF)-α均為機體受到感染或者損傷時釋放的敏感蛋白〔3〕。本文旨在研究SAP大鼠血清Apelin、CRP、TNF-α水平的變化及臨床意義。

1資料與方法

1.1動物和試劑動物：SD雄性大鼠36只購自本院動物中心，體重250～300 g，實驗前記號筆標記大鼠序號，按照隨機數字法分為SAP組、假性手術組、對照組，每組12只。試劑：Apelin、CRP及TNF-α酶聯免疫吸附實驗(ELISA)試劑盒均購自上海科敏生物科技有限公司；牛磺膽酸鈉購自南京凱夫醫藥科技有限公司。

1.2研究方法

1.2.1SAP模型制備大鼠建模前禁食12 h，可飲水，按照3 ml/kg給予大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥鈉溶液，麻醉后動物手術臺上固定大鼠，沿著腹壁正中線切開，打開腹腔，暴露胰腺，找到膽總管和十二指腸，仔細觀察胰管和膽管方向，在膽總管流向十二指腸端應用血管夾夾閉膽總管，沿著相反方向穿刺膽總管，按照大鼠體重1 ml/kg劑量注入50 g/L牛磺膽酸鈉，注射完畢后，縫合穿刺孔，等待1 min左右，取下血管夾，然后逐層關閉腹部，整個過程均為無菌操作，術后大鼠禁食，可適量飲水，12 h左右建模成功；假性手術組除了未注入牛磺膽酸鈉外，其他手術方式同SAP組，對照組正常飼養。

1.2.2Apelin、CRP及TNF-α檢測SAP組和假性手術組手術建模12 h后，對照組經過同樣時間，按照3 ml/kg大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥鈉溶液進行麻醉，開腹，抽取腹腔靜脈血5 ml于EP管中，按照5 000 r/min離心5 min，收集血清，-80℃保存備用，應用ELISA測定Apelin、CRP、TNF-α水平，分別應用相應試劑盒測定，嚴格按照試劑盒說明書要求。

1.2.3胰腺標本制定取胰腺組織，40 g/L甲醛固定，石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察組織水腫情況，并且進行胰腺組織病理學評分,從水腫、出血、壞死及炎癥細胞浸潤4個方面評分。

1.3研究指標比較三組Apelin、CRP、TNF-α水平及組織光鏡觀察結果；分析各指標與組織病理評分之間的相關性。

1.4統計學方法應用SPSS13.0軟件進行t檢驗、F檢驗和Pearson相關分析。

2結果

2.1三組血清Apelin、CRP、TNF-α水平以及光鏡觀察結果比較光鏡下觀察SAP組胰腺組織嚴重水腫，組織細胞壞死、具有片狀出血斑并且胰腺出現局部皂化斑；假性手術組正常或者輕微水腫，無明顯異常；對照組大鼠組織無明顯異常，說明建模成功。SAP組血清CRP和TNF-α水平均高于假性手術組和對照組，Apelin水平明顯低于假性手術組和對照組(P<0.05)，假性手術組和對照組Apelin 、CRP和TNF-α水平無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　三組Apelin、CRP、TNF-α水平

與SAP組相比：1)P<0.05

2.2血清Apelin 、CRP以及TNF-α水平與組織病理學評分相關關系分析SAP組胰腺組織病理學評分平均為(8.67±1.23)分，假性手術組為(1.32±0.78)分，對照組為(1.28±0.56)分，差異顯著(F=4.675，P=0.015)，其中SAP組評分高于假性手術組和對照組(P<0.05)，假性手術組和對照組無統計學意義(P>0.05)。SAP組血清Apelin水平與胰腺組織病理學評分呈負相關關系(r=-0.876,P=0.000),CRP和TNF-α水平與胰腺組織病理學評分呈正相關(r=0.698、0.724,P=0.000)。

3討論

近年來急性胰腺炎(AP)發病率呈現明顯的上升趨勢，并且由于對其發病機制尚未明確，缺乏特異性診斷或者評價指標，因此是現在臨床上研究重點和難點之一。目前認為AP是多種病因導致胰酶在胰腺內被激活后引起胰腺組織自身消化、水腫、出血甚至壞死的炎癥反應，病變輕者以胰腺水腫為主，重者出現胰腺出血壞死，并且可以誘發感染、腹膜炎和休克等，病死率高〔4〕。研究證明〔5〕，AP病損的胰腺組織作為抗原或炎癥刺激物，激活了巨噬細胞而釋放出炎癥介質，造成細胞因子網絡和免疫功能紊亂。Cox等〔6〕研究發現CRP在大鼠SAP評估和疾病轉歸中具有重要意義，并且膿毒敗血癥的病人血漿Apelin水平發生明顯變化，因此檢測血液中相關細胞因子濃度，對于判斷胰腺病變嚴重程度、病情發展和預后至關重要。

Apelin因子〔7〕是孤兒G蛋白耦聯受體，是近來發現具有重要生物學活性的心血管多肽性因子，是腎素-血管緊張素新的組成部分，具有擴張血管、降低血壓、調整生物節律等多種生物學功能。目前主要以大鼠為載體來發現胃腸系統和胰腺部位中Apelin-mRNA的表達，并且在胃腺上皮組織發現大量的Apelin分泌細胞，依賴絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)途徑刺激胰腺分泌膽囊收縮素等，因此Apelin因子在SAP等消化系統疾病的發生發展中起著重要的作用。CRP主要是機體受到嚴重損傷等炎癥刺激后肝細胞合成的急性相關蛋白，研究發現〔8〕AP通常在最初24 h引起CRP升高，若無并發癥，此值在第1周末下降。如果入院時CRP>100 mg/L，很可能已形成并發癥，CRP>110 mg/L，可能是出血性胰腺炎，并且CRP診斷靈敏度較高。TNF-α可以促進T細胞產生各種炎癥因子,進而促進炎癥反應的發生。

本研究說明SAP對大鼠胰腺組織產生嚴重損害，與胰腺組織光鏡觀察結果一致。相關性分析顯示隨著胰腺病理組織評分升高，血清Apelin表達水平逐漸降低，可能原因為SAP發生時導致全身性炎癥反應，大量炎癥因子對心肌細胞造成一定的損傷，因Apelin因子為內源性心肌收縮因子，心肌細胞損傷失去了需要Apelin因子的機會，因此Apelin因子表達會降低。本研究說明CRP和TNF-α因子在SAP的發生、發展以及預后中起著重要作用。此外，可以通過檢測CRP、TNF-α表達水平變化來推斷SAP病情變化、嚴重程度或治療效果，這與相關研究結果類似〔9〕。但是本文研究對象為大鼠，上述論斷僅可作為人類研究的參考依據，臨床應用還需要在SAP患者上做更深層次研究。

4參考文獻

1余永芬.C反應蛋白檢測在急性胰腺炎嚴重程度及胰腺壞死評估中的意義〔J〕.國際檢驗醫學雜志,2015;36(3):407-9.

2Sato T,Kameyama T,Noto T,etal.Enhanced expression of hemoglobin scavenger receptor CD163 in accumulated macrophages within filtered debris between acute coronary syndromes and stable angina pectoris〔J〕.Int Heart J,2015;56(2):150-6.

3辛憲磊,馮健,陳永亮,等.重癥急性胰腺炎大鼠血清Chemerin水平變化的實驗研究〔J〕.解放軍醫學院學報,2013;34(6):632-5.

4李春燕,廖東平,李仕強,等.丙氨酰-谷氨酰胺對重癥急性胰腺炎患者IL-6、TNF-α、D-二聚體的影響及臨床意義〔J〕.胃腸病學和肝病雜志學,2015;24(3):351-4.

5王治偉,遲瓊.急性胰腺炎患者血清TNF-α、IL-6及hs-CRP水平變化及臨床意義〔J〕.白求恩軍醫學院學報,2012;10(2):85-7.

6Cox N,Pilling D,Gomer RH.DC-SIGN activation mediates the differential effects of SAP and CRP on the innate immune system and inhibits fibrosis in mice〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2015;112(27):8385-90.

7任麗楠,郭曉鐘,李宏宇,等.C-反應蛋白在重癥急性胰腺炎評估與轉歸中的臨床意義〔J〕.臨床肝膽病雜志,2015;31(5):691-4.

8Wang Y,Liu W,Liu X,etal.Role of liver in modulating the release of inflammatory cytokines involved in lung and multiple organ dysfunction in severe acute pancreatitis〔J〕.Cell Biochem Biophys,2015;71(2):765-76.

9Cui HX,Xu JY,Li MQ.Efficacy of continuous renal replacement therapy in the treatment of severe acute pancreatitis associated acute respiratory distress syndrome〔J〕.Eur Rev Med Pharmacol Sci,2014;18(17):2523-6.

〔2015-07-11修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

第一作者：李衛(1979-)，男，碩士，副教授，副主任醫師，主要從事肝、膽、胰腺疾病方面的研究。

〔中圖分類號〕R657.5+1

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)09-2080-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.09.014