多巴胺受體在食管反流患者括約肌中的表達(dá)及對迷走神經(jīng)通路的影響分析

劉健鵬， 方 爽， 昌國華， 朱寶宇

1.吉林省吉林市65331部隊(duì),吉林 132002； 2.解放軍二二二醫(yī)院； 3.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院

其他論著

多巴胺受體在食管反流患者括約肌中的表達(dá)及對迷走神經(jīng)通路的影響分析

劉健鵬1， 方 爽2， 昌國華2， 朱寶宇3

1.吉林省吉林市65331部隊(duì),吉林 132002； 2.解放軍二二二醫(yī)院； 3.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院

目的 探討多巴胺受體在食管反流患者括約肌中的表達(dá)及對迷走神經(jīng)通路的影響。方法 選擇吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院2014年1月-2015年3月接診的進(jìn)行食管大部切除術(shù)的30例患者為觀察組，觀察多巴胺受體亞型的mRNA和蛋白在人食管下括約肌的表達(dá)，并選擇同期來吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院進(jìn)行體檢的30名健康者為對照組，比較兩組人員胃肌電活動(dòng)水平。結(jié)果 觀察組3種多巴胺受體亞型mRNA表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中D1R水平最高，鉤狀纖維(0.73±0.04)、套索纖維(0.76±0.05)、食管(0.74±0.05)、胃底環(huán)形肌(0.77±0.04)，同一個(gè)多巴胺受體亞型mRNA在不同肌條之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；3種多巴胺受體亞型蛋白表達(dá)在人食管下括約肌中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，同一多巴胺受體亞型蛋白在不同肌條之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組胃電主頻(4.43±0.15)cpm/min明顯低于對照組(4.82±0.10)cpm/min，正常胃電百分率(68.00±3.50)%也低于對照組(90.00±2.00)%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 多巴胺受體在食管反流患者括約肌中發(fā)揮著重要的作用，并對迷走神經(jīng)通路有一定影響，為臨床治療提供了理論依據(jù)。

多巴胺受體；食管下括約肌；迷走神經(jīng)通路

食管反流是一種常見的消化道疾病，這類疾病會(huì)引起患者持久、反復(fù)、大量的反食情況，還會(huì)產(chǎn)生食管炎等并發(fā)癥，極大地危害著人們的生活。近年來關(guān)于這類疾病發(fā)病機(jī)制的研究有較大的進(jìn)展，其中人食管下括約肌是連接食管和胃之間的一條環(huán)形肌，研究[1]表示，在食管反流患者中，多巴胺受體會(huì)在括約肌中有所表達(dá)，且與迷走神經(jīng)通路有一定關(guān)聯(lián)。人食管下括約肌由鉤狀纖維及套索纖維構(gòu)成，這兩種纖維可以維系一種收縮狀態(tài)，防止食物在胃中反流入食管，在我們進(jìn)行吞咽食物的過程中，食管擴(kuò)張，迷走神經(jīng)通路對這種行為也會(huì)產(chǎn)生一定的作用。我們將研究多巴胺受體在食管反流患者括約肌中的表達(dá)及對神經(jīng)通路的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2014年1月-2015年3月吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院接診的進(jìn)行食管大部切除術(shù)的30例患者作為觀察組，男24例，女6例，平均年齡(60.06±12.55)歲，納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：(1)術(shù)后有食管反流癥狀的患者；(2)迷走神經(jīng)被切斷的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)無食管下括約肌功能障礙病史；(2)術(shù)前有反酸、燒心等癥狀的患者。并隨機(jī)選取同期來吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院進(jìn)行體檢的30名健康者作為對照組，男23例，女7例，平均年齡(58.07±11.56)歲。本次研究均在患者知情同意下進(jìn)行，且通過我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，兩組人員一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法首先采集觀察組食管和胃底的胃食管交界部(esophagogastric junction，EGJ)標(biāo)本，置于4 ℃TBS的燒杯里，銳性剝掉胃底部的黏膜和食管下段，制取鉤狀纖維、套索纖維、食管以及胃底環(huán)形肌的肌條，肌條大小為(2～4)mm×(8～12)mm，制取時(shí)注意不能有食管縱行肌。再提取核糖核酸(Ribonucleic Acid，RNA)組織，測定其濃度和完整性，之后再檢測信使核糖核酸(Messenger RNA，mRNA)在4種肌條中的表達(dá)，檢測軟件采用Gel Pro，計(jì)算多巴胺受體亞型在mRNA中的相對含量。再提取組織蛋白，使用考馬斯亮藍(lán)G-250制取，并將組織蛋白調(diào)整到相同的濃度，分離出多巴胺受體各亞型中相應(yīng)的組織蛋白含量。然后比較觀察組和對照組胃肌電活動(dòng)，兩組人員分別在清晨空腹的情況下連接胃腸電記錄儀和漿膜電極。

1.3 儀器DYY-2C型1%瓊脂糖凝膠電泳，北京六一儀器廠；U-2000型紫外分光光度計(jì)，日本日立公司；考馬斯亮藍(lán)G-250，南京建成生物研究所；胃腸電圖檢測儀，上海馨迪環(huán)保科技有限公司提供。

1.4 觀察指標(biāo)觀察觀察組患者多巴胺受體亞型mRNA在人食管下括約肌的表達(dá)、多巴胺受體亞型蛋白在人食管下括約肌的表達(dá)以及兩組人員胃肌電的活動(dòng)水平比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用SPSS 18.0軟件包進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 多巴胺受體亞型mRNA及蛋白在人食管下括約肌的表達(dá)三種多巴胺受體亞型mRNA及蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，同一個(gè)多巴胺受體亞型mRNA及蛋白表達(dá)在不同肌條之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表1)。

表1 多巴胺受體亞型mRNA及蛋白在人食管下括約肌的表達(dá)±s)

注：D1R，D2R，D5R三組間相比，P<0.05；不同肌條間相比，P>0.05。

2.2 兩組間胃肌電活動(dòng)水平比較觀察組胃電主頻明顯低于對照組，正常胃電百分率也低于對照組，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表2)。

表2 兩組間胃肌電活動(dòng)水平比較±s)

注：與對照組相比，*P<0.05。

3 討論

食管反流是一種典型的消化道疾病，臨床上表現(xiàn)出咽部發(fā)緊、胸悶痛及反食等癥狀，并可導(dǎo)致食管外組織損傷或食管炎等并發(fā)癥。位于胃食管交界上方的食管下括約肌是一種生理性括約肌，由胃小彎側(cè)半環(huán)形的鉤狀纖維和大彎側(cè)呈斜狀分布的套索纖維共同構(gòu)成，這兩種纖維聯(lián)通神經(jīng)源性及肌源性的多種因素保持持續(xù)性的收縮狀態(tài)，從而在人體的胃部中形成了高壓帶，構(gòu)成一種反流屏障。在我們吞咽食物的過程中，食管會(huì)進(jìn)行原發(fā)性蠕動(dòng)，因此食管下括約肌對食管有保護(hù)作用。食管下括約肌在一般情況下保持收縮的狀態(tài)，維持高壓帶的運(yùn)作，防止食物反流。有研究[3-4]顯示食管反流和食管下括約肌的異常運(yùn)動(dòng)有關(guān)。如胡桃夾食管、彌漫性食管痙攣等食管運(yùn)動(dòng)功能的障礙都是由于食管下括約肌的異常運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的。食管括約肌舒張和收縮之間的調(diào)節(jié)機(jī)制十分復(fù)雜，國外的研究主要是將胃泌素、一氧化氮、膽囊收縮等神經(jīng)遞質(zhì)和其間的相關(guān)受體進(jìn)行研究[5]。而食管下括約肌的運(yùn)作涉及了身體機(jī)能中包括各種受體間的影響及神經(jīng)遞質(zhì)等。而此次我們研究了多巴胺受體在食管反流患者括約肌中的表達(dá)及對迷走神經(jīng)通路的影響。

多巴胺在調(diào)節(jié)人體內(nèi)的認(rèn)知、自動(dòng)運(yùn)動(dòng)、胃腸運(yùn)動(dòng)、情感及激素等功能中起重要作用，還參與了外周神經(jīng)系統(tǒng)的免疫功能、血管功能、交感神經(jīng)等機(jī)能的調(diào)節(jié)。多巴胺受體在體內(nèi)的運(yùn)動(dòng)可使胃內(nèi)壓降低，進(jìn)一步使胃體平滑肌變得松弛。這種受體在哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)有廣泛分布，而近年來有研究[6-7]證明在人類的胃腸道中也有分布。多巴胺受體有5種受體亞型，為D1R～D5R。按照分子的藥理學(xué)性質(zhì)和分子之間的結(jié)構(gòu)情況可以分為D1樣受體和D2樣受體，D1樣受體為D1R和D5R，D2樣受體為D2R、D3R和D4R。現(xiàn)有研究[8-9]中，目前主要是集中在心血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)方面，在人食管下括約肌中的研究還較匱乏。有人通過試驗(yàn)證明多巴胺受體對人體的消化道發(fā)揮著重要作用，且廣泛分布在消化道各處。本研究更加深入地研究人下食管括約肌中多巴胺受體的分布情況。研究證明多巴胺受體有3種亞型分布在人食管下括約肌中，分別為D1R、D2R、D5R。之前有研究也提出了人食管下括約肌中有D1R和D5R的存在，與本研究結(jié)果一致[11]。我們還深入研究了各種亞型的分布情況，為以后的臨床奠定理論基礎(chǔ)。D1R在肌條中的水平最高，在多巴胺的5種受體亞型中，D1R的分布主要體現(xiàn)在嗅球、丘腦以及紋狀體部位，都是在腦組織中，所以得到的表達(dá)結(jié)果最高。過往研究顯示D3R的分布主要在嗅球、伏核等的邊緣部位，而D4R則分布在下丘腦、海馬體、額前皮質(zhì)等部位，位置相對較局限[12-13]。

隨著對食管功能障礙方面疾病的研究，我們發(fā)現(xiàn)發(fā)病機(jī)制與食管下括約肌的舒張和收縮有很大關(guān)系，例如括約肌不能良好地進(jìn)行松弛或持續(xù)性的收縮等異常行為[14]。括約肌的舒張和伸縮主要由中樞神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)和支配，并與神經(jīng)遞質(zhì)、多種激素及自身的肌源性因素共同完成。一般我們認(rèn)識(shí)括約肌肌腸層腸道運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和迷走神經(jīng)輸入神經(jīng)末梢相互形成了一種明顯的突觸聯(lián)系，共同構(gòu)成了抑制性迷走神經(jīng)通路和調(diào)節(jié)括約肌舒張和伸縮的興奮性迷走神經(jīng)通路。迷走神經(jīng)中含有傳入和傳出兩種纖維，傳出纖維可以將中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的信息傳入胃里，從而對胃的分泌和運(yùn)動(dòng)等功能產(chǎn)生影響。胃肌電活動(dòng)是胃功能最基礎(chǔ)的電活動(dòng)，這種活動(dòng)決定著胃運(yùn)動(dòng)的方向、節(jié)奏、律動(dòng)。進(jìn)行過食管大部切除術(shù)的患者中，迷走神經(jīng)通路會(huì)出現(xiàn)紊亂的情況，使患者胃體不能進(jìn)行良好的收縮，胃功能下降，從而引起了胃排空的延遲以及食管反流等情況的產(chǎn)生。之前有研究證明，在某些患有惡性腫瘤或者經(jīng)歷過胃功能方面手術(shù)的患者中，由于迷走神經(jīng)通路紊亂，不能良好地控制自身胃功能的松弛情況，出現(xiàn)一定程度的適應(yīng)性松弛障礙，導(dǎo)致進(jìn)食后胃擴(kuò)張，即便是少量的食物，也會(huì)感到有飽漲的感覺，因此會(huì)出現(xiàn)反食的情況[15-16]。本研究顯示，在患有食管反流的患者中胃肌電的頻率明顯低于健康者，進(jìn)一步證明在食管反流患者中，迷走神經(jīng)通路對患者有一定程度的影響。

筆者認(rèn)為在食管反流患者中加重對多巴胺受體的研究有重要作用，由于迷走神經(jīng)通路對此類型的患者有影響，在手術(shù)過程中應(yīng)對迷走神經(jīng)通路進(jìn)行良好的保護(hù)，以免發(fā)生紊亂，降低對胃功能的傷害，加強(qiáng)患者術(shù)后的恢復(fù)情況。綜上所述，多巴胺受體的mRNA及相應(yīng)的蛋白在食管反流患者括約肌中有著明顯的表達(dá)，也對迷走神經(jīng)通路有一定的影響，此研究為食管運(yùn)動(dòng)功能障礙類型的疾病提供了良好的理論依據(jù)，對今后的臨床治療有所幫助。

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(責(zé)任編輯：馬 軍)

Expression of dopamine receptor in mousculi sphincter in patients with esophageal reflux and effect on vagus nerve pathway

LIU Jianpeng1, FANG Shuang2, CHANG Guohua2, ZHU Baoyu3

1. Jilin 5331 Troops, Jilin 132002； 2. No.222 Hospital of PLA; 3. The Fellowship Hospital of Jilin University, China

Objective To investigate the expression of dopamine receptor in musculi sphincter in patients with esophageal reflux and effect on vagus nerve pathway.Methods Thirty cases of esophageal resection patients in the Fellowship Hospital of Jilin University from Jan. 2014 to Mar. 2015 were as observation group. The expression of dopamine receptor subtypes mRNA and protein in the lower esophageal sphincter were detected. In the same period, 30 healthy persons were as the control group. The level of gastric myoelectrical activity was compared between two groups. Results There was significant difference in the expression of 3 kinds of dopamine receptor subtypes mRNA (P<0.05), the level of D1R was the highest, clasp fibers was (0.73±0.04), sling fibers was (0.76±0.05), esophagus was (0.74±0.05), gastric circular muscle was (0.77±0.04), there was no significant difference in the mRNA of the same dopamine receptor subtypes among different muscle strips (P>0.05); three types of dopamine receptor subtypes in human esophageal sphincter had statistically significant difference (P<0.05), there was no statistical significance in a dopamine receptor subtype protein among different muscle strips (P>0.05); the main frequency of stomach in observation group was significantly lower than that in control group, the percentage of normal gastric electric was lower in observation than that in the control group, there was statistically significant (P<0.05). Conclusion Dopamine receptors play an important role in musculi sphincter in patients with esophageal reflux, and have certain effect on the vagus nerve pathway, it provides a theoretical basis for clinical treatment.

Dopamine receptor; Lower esophageal sphincter; Vagus nerve pathway

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.06.020

劉健鵬，本科，研究方向：胃腸病學(xué)。E-mail： 410512985@qq.com

朱寶寧，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：胃腸病學(xué)。E-mail：1185357051@qq.com

R571

A

1006-5709(2016)06-0672-04

2015-09-17