針刺“心俞穴”對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠CK、LDH實(shí)驗(yàn)研究

付嘉明，宋春華，馬瑩瑩，付 豪，李 響

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150000）

針刺“心俞穴”對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠CK、LDH實(shí)驗(yàn)研究

付嘉明，宋春華，馬瑩瑩，付 豪，李 響

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150000）

目的 通過(guò)針刺大鼠“心俞穴”對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠CK、LDH實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)比觀察治療療效從而探討針刺預(yù)處理對(duì)心肌的保護(hù)機(jī)制為臨床治療該病證提供科學(xué)的可靠的方法。方法 將40只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表分成對(duì)照組、模型組、針刺心俞穴組、缺血預(yù)處理組。采用活體大鼠左心冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎方法復(fù)制心肌缺血及在灌注損傷模型。檢測(cè)血清CK、血清LDH含量。結(jié)果 1.模型組血清檢測(cè)值顯著升高（P＜0.01）。2.與模型組比較缺血預(yù)處理組血清CK、LDH明顯減低（P＜0.05）。3.四組對(duì)比可以看出針刺心俞穴可以明顯降低心肌缺血再灌注損傷模型大鼠血液中血清CK、LDH含量從而達(dá)到治療效果。結(jié)論 1.針刺預(yù)處理可以增加心肌對(duì)缺血的耐受性， 從而使心肌得到保護(hù)作用。2.針刺心俞穴對(duì)心肌缺血再灌注損傷具有臨床治療與防護(hù)作用。

心俞穴；心肌缺血再灌注損傷；血清CK、LDH；中醫(yī)針刺

急性心肌梗死即因持久而嚴(yán)重的心肌缺血而致部分心肌急性壞死，其死亡率和發(fā)病率率非常高，目前為最心血管疾病之首，威脅人類健康的因素之一[1]。如何有效控制并減少缺血性心臟病的發(fā)生，減輕心肌缺血再灌注損傷和控制缺血性心臟病的發(fā)生，降低病人的死亡率，已經(jīng)成為心血管疾病研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題[2]。本課題根據(jù)大鼠血清中CK、LDH含量觀察針刺對(duì)心肌缺血再灌注損傷的影響，以期探討針刺預(yù)處理的心肌保護(hù)作用以及機(jī)制，為針刺治療服務(wù)于臨床心血管疾病提供理論依據(jù)和科學(xué)基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本課題選用雄性wistar大鼠96只，由青島派特福德白鼠養(yǎng)殖專業(yè)合作社提供。飼養(yǎng)室溫20～25℃，濕度50%～70%，體重200 g～220 g。實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)一周適應(yīng)環(huán)境。

1.2 方法

隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備

1.3.1 動(dòng)物分組

雄性wistar大鼠40只，每組10只大鼠，術(shù)前禁食12h，自由飲水。按隨機(jī)數(shù)字表分成對(duì)照組、模型組、針刺心俞穴組、缺血預(yù)處理組。采用大鼠左心冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎方法復(fù)制心肌缺血及缺血預(yù)處理模型。對(duì)照組：造模前與針刺組同固定大鼠30分鐘，1次/d、共15日；造模時(shí)于冠狀動(dòng)脈處穿線但不結(jié)扎，整個(gè)觀察過(guò)程不施加任何因素。模型組：造模前與針刺組相同；心肌缺血造模成功后整個(gè)觀察過(guò)程不施加任何因素。針刺預(yù)處理組：造膜前15日開始，1次/d，30 min/次，共針刺15日。缺血預(yù)處理對(duì)照組：造模前與空白組相同；造模時(shí)在進(jìn)行冠狀動(dòng)脈結(jié)扎前先進(jìn)行阻斷血流5 min，再灌流5 min，如此連續(xù)反復(fù)3次，共30 min的缺血預(yù)處理。取穴參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜在雙側(cè)心俞穴直刺0.3～0.4 cm，連接G6805-Ⅱ電針儀，電針參數(shù)為：頻率20 Hz，電壓均為3 V，連續(xù)波。給予連續(xù)15天電針刺激，強(qiáng)度以大鼠出現(xiàn)與電針頻率相一致的輕微顫動(dòng)為宜。

1.3.2 心肌缺血模型制備[3]：仰臥位固定大鼠，除毛，碘酒和75%乙醇消毒術(shù)區(qū)，沿左胸骨外約10～20 mm處切斷第3、4肋骨，用無(wú)菌醫(yī)用線牽拉兩側(cè)剪斷的肋骨，依次分離胸壁肌肉，然后打開胸腔，撕破心包，暴露心臟，在冠狀動(dòng)脈左前降支上中約1/3處穿一根0號(hào)醫(yī)用縫合線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，以左室前壁發(fā)紫并向外脹起為缺血標(biāo)志，同時(shí)間心電圖顯示在心肌缺血時(shí)表現(xiàn)出ST段抬高并變寬，再灌注時(shí)暫時(shí)心電圖恢復(fù)正常。結(jié)扎成功的判斷結(jié)扎后肉眼能觀察到結(jié)扎遠(yuǎn)端局部心臟表面變白，同時(shí)在動(dòng)物心電圖機(jī)上可以看到有st段的抬高及一些心律失常的出現(xiàn)如室速，室顫等。實(shí)驗(yàn)期間實(shí)時(shí)、準(zhǔn)確檢測(cè)大鼠心律頻率、呼吸頻率、血壓改變并維持于正常范圍，其間視環(huán)境溫度采取相應(yīng)的保暖急救措施。

1.4 觀察指標(biāo)及測(cè)定方法

檢測(cè)血清中CK、LDH含量：預(yù)處理結(jié)束后摘取大鼠眼球用負(fù)壓采血針在大鼠一側(cè)眼瞼與頭平面呈60°左右的夾角進(jìn)針采血離心，取上清，采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的CK、LDH試劑盒測(cè)定血清中CK、LDH含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 for windows統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，各檢測(cè)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均以“±s”表示。所有數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，滿足正態(tài)性時(shí)，采用單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 分析性結(jié)果

針刺預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠血清中CK、LDH含量的影響，見表1。

表1 各組大鼠血清肌酸激酶（CK）及乳酸脫氫酶（LDH）含量的比較（±s，U/L）

表1 各組大鼠血清肌酸激酶（CK）及乳酸脫氫酶（LDH）含量的比較（±s，U/L）

組別 n CK LDH對(duì)照組 10 310.56±52.05 155.56±23.15模型組 10 1463.15±56.31 1766.15±86.31針灸預(yù)處理組 10 858.26±44.95 928.26±48.15缺血預(yù)處理組 10 944.47±57.91 944.27±47.81

2.2 描述性結(jié)果

對(duì) 照 組 大 鼠 血 清 中 C K 、 L D H 含 量 顯 著 高 于 模型 組 （ P ＜ 0.0 1 ） ， 模 型 組 顯 著 高 于 缺 血 預(yù) 處 理 組組 （ P ＜ 0.0 5 ） ， 針 刺 預(yù) 處 理 組 顯 著 低 于 其 他 各 組（P＜0.05），針刺預(yù)處理組和I缺血與處理組組中CK、LDH含量無(wú)顯著性差別（P＜0.05），說(shuō)明針刺預(yù)處理可以降低大鼠血清中CK、LDH含量。以上說(shuō)明電針預(yù)處理可明顯減低心肌缺血在灌注損傷大鼠心肌缺血抑制其心肌細(xì)胞的死亡。

3 討 論

1960年等Jennings等[3]就第一次提出了心肌缺血再灌注損傷的概念，心肌梗死的動(dòng)物研究結(jié)果表明，心肌缺血再灌注損傷有明顯的缺陷在心臟疾病治療方面，調(diào)查顯示40～50%的壞死心肌為缺血再灌注損傷所引起，怎樣減輕防治再灌注損傷越來(lái)越引起人們的關(guān)注。在臨床實(shí)踐中常用心肌酶的釋放量作為重要的指標(biāo)來(lái)檢測(cè)缺血心血管疾病的損害程度，心肌缺血再灌注損傷主要表現(xiàn)之一就是心肌酶的漏出，故心肌受損的主要酶學(xué)標(biāo)志物CK及LDH升高有重要意義[4]。血清中CK、LDH活力升高是公認(rèn)的確定診斷急性心肌梗死和辨別有無(wú)心肌壞死的重要指標(biāo)，尤其在臨床常見的心電圖無(wú)Q波不典型表現(xiàn)的急性心肌梗死和再發(fā)性心肌梗死，血清中CK、LDH升高具有決定診斷旳作用[5-6]。本實(shí)驗(yàn)中依據(jù)針刺可以降低血清中CK、LDH含量大膽推測(cè)，針灸預(yù)處理可以用于臨床治療缺血性心臟疾病的治療。

[1] 何華干.細(xì)胞治療缺血性心臟病的臨床研究進(jìn)展[J]心血管病學(xué)進(jìn)展,2012,33(2):181-184.

[2] 許 榮,王 寧,王曉明.自噬在心肌缺血再灌注損傷中的研究進(jìn)展[J]中華老年心腦血管病雜志,2015,12(12):1327-1328.

[3] Jennings RB,Sommers HM,Smyth GA,etal.Myocardial necrosis induced by temporary occlusion of a coronary artery in the dog[J]. Arch Patho,1960,70:68-78.

[4] 呂圭源,陳素紅,李立文,等.黃芪生脈飲有效部位對(duì)心肌缺血大鼠血清CK、LDH、AST的影響[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2006,30(2):208-210.

[5] 李勝志,柴劍波,于 海,殷 越,等.桂枝甘草湯及其各組分對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠血清中LDH、CK及心肌Ca2+含量的影響[J].陜西中醫(yī).2011,32(5):625-627.

[6] 王 靈 ,呂 宏 迪 ,郝 少 君 ,等 .心 腦 寧 片 對(duì) 大 鼠 心 肌 缺 血 模型ATP酶、LDH 及CK活性的影響 [J].中國(guó)現(xiàn) 代應(yīng) 用藥學(xué).2015,30(2):248-250.

本文編輯：劉欣悅

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ISSN.2095-6681.2016.33.155.02