黃芩藥材中黃芩苷的提取純化工藝優(yōu)化?

張 琳， 周化更， 劉 沛， 劉喜綱， 常金花， 劉翠哲(河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所， 河北 承德 067000)

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實驗研究

黃芩藥材中黃芩苷的提取純化工藝優(yōu)化?

張 琳， 周化更， 劉 沛， 劉喜綱， 常金花， 劉翠哲??
(河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所， 河北 承德 067000)

摘 要:目的:優(yōu)選黃芩苷的非酸堿提取純化工藝。方法:采用大孔吸附樹脂提取純化黃芩苷，以HPLC法測定黃芩苷的含量；以黃芩苷的含量為考察指標，采用水和50%乙醇作為提取溶劑，用AB -8型大孔吸附樹脂純化，用不同濃度的乙醇洗脫，逐步考察黃芩苷在提取、吸附、洗脫時的轉(zhuǎn)移率。結(jié)果:優(yōu)選的提取純化工藝為50%乙醇提取，提取液回收乙醇，經(jīng)過AB-8型大孔吸附樹脂吸附，以70%乙醇洗脫。結(jié)論:本實驗優(yōu)選非酸堿方法提取純化黃芩藥材中的黃芩苷，減少黃芩苷的破壞，減少酸堿對環(huán)境的污染，適于工業(yè)化生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞:黃 芩； 黃芩苷； HPLC； 大孔吸附樹脂

??通訊作者E-mai1：1iucuizhexy＠163.com

1　引 言

黃芩是唇形科植物黃芩Scute11aria baica1ensis Georgi的干燥根[1]，性寒味苦，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效，其有效成分包括黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素等黃酮類化合物，黃芩苷為含量最高的有效成分。具有解熱、保肝利膽、抗炎、抗菌、抗病毒、抗過敏、抗血小板聚集、抗自由基氧化、降血壓降血脂等廣泛的藥理作用。2010年版《中國藥典》收載的黃芩提取物的方法為水提堿溶酸沉法[1]，但是黃芩苷在堿溶液中不穩(wěn)定，容易破壞[2]。并且酸堿易對環(huán)境造成污染，選擇其他提取純化黃芩苷的方法尤為重要。大孔吸附樹脂在中草藥有效成分的提取分離中得到了廣泛的應(yīng)用，其優(yōu)點在于吸附容量大、再生簡單、效果可靠，尤其適用于苷類、黃酮類、皂苷類的成分。已有文獻報道AB-8大孔吸附樹脂純化黃酮類的效果較好[3]。本實驗采用水提取和50%乙醇提取作比較，通過AB-8型大孔吸附樹脂進行純化，優(yōu)選出提取純化黃芩苷的最佳方法，為開發(fā)以黃芩苷為主要成分的中藥提供依據(jù)。

2　儀器與試藥

2.1儀器:高效液相色譜儀(Agi1ent 1260 Infinity，DAD檢測器，美國安捷倫公司)；YP1200電子天平(北京精科天平)；JA2003電子天平(北京精科天平)；AG245電子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO)；TG16-WS臺式高速離心機；GL-20B冷凍離心機(上海安亭)；EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海EYELA)；SHZ-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(保定高新區(qū)陽光科教儀器廠)；HF881-2型熱風(fēng)循環(huán)干燥箱；電子調(diào)溫電熱套(98-1-B型)；KQ-300型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

2.2試藥:對照品:黃芩苷(中國藥品生物制品檢定所，批號:110749-201115)；黃芩(購自北京同仁堂，經(jīng)趙春穎老師鑒定為藥用大黃，并存放于承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所)；AB-8型大孔吸附樹脂(滄州寶恩吸附材料科技有限公司)；甲醇(色譜純，美國邁瑞達)；磷酸(分析純，天津市佳興化工玻璃儀器有限公司)；95%乙醇(分析純)；娃哈哈純凈水。

3　方法與結(jié)果

3.1黃芩苷的含量測定方法

3.1.1色譜條件:色譜柱Hypersi1 ODS C18(4.6mm× 250mm，5μm)；甲醇-0.1%磷酸(60:40，v/ v)為流動相，流速為0. 5mL/ min；檢測波長為278nm；柱溫: 25℃；進樣量:20μL。黃芩苷對照品與水提取液、醇提取液色譜圖見圖1～3。由色譜圖可知，黃芩苷峰分離良好，無干擾，此色譜條件適于黃芩苷的測定。

圖1　對照品色譜圖

圖2　水提取液色譜圖

圖3　醇提取液色譜圖

3.1.2對照品溶液的制備:精密稱取黃芩對照品5. 30mg，置于25mL容量瓶中，用70%甲醇超聲溶解，放冷后定容至刻度。精密量取1mL置于10mL容量瓶中，定容到刻度，即得對照品溶液。

3.1.3供試品溶液的制備:分別精密量取水提液和50%乙醇提取液各1mL，置于25mL容量瓶中，用70%乙醇定容到刻度，精密量取1mL置于10mL容量瓶中，定容至刻度，即得供試品溶液。取供試品溶液離心，上清液備用。

3.2黃芩苷的提取工藝考察

3.2.1提取溶劑的選擇:取20g黃芩藥材加10倍量水，浸泡過夜，煎煮3次，時間分別為1. 5h、1h、40min[4]，合并煎液，離心，上清液，備用。用相同的方法制備50%乙醇的提取液，備用[5]。分別測定水提取液和50%乙醇提取液中黃芩苷的含量，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，50%乙醇提取黃芩苷的效果優(yōu)于水提取，提取溶劑選擇50%乙醇。

表1　不同提取方式獲取黃芩苷的量

3.2.2上樣方式的考察:取5根樹脂柱，加入經(jīng)預(yù)處理的AB-8大孔吸附樹脂，將50%乙醇提取的溶液500mL平均分為兩份，每份250mL。其中一份均分為5份直接上柱，測定吸附率。另一份減壓回收乙醇后加蒸餾水調(diào)成原濃度再均分為5份上柱，二者流速相同，測定吸附率。結(jié)果見表2。結(jié)果表明，回收乙醇后上柱的吸附效果明顯大于醇提取液直接上柱，因此上樣液選擇回收乙醇上柱。

表2　不同方式上柱的吸附率

3.2.3洗脫劑的選擇:將上述回收乙醇上柱后的5根樹脂柱，水洗至流出液無色，分別在5個樹脂柱中加入10%、30%、50%、70%、95%各50mL的乙醇進行洗脫，測定解析率，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，70%乙醇的解析效果最好，因此解析溶劑選擇70%乙醇。

表3　不同濃度乙醇洗脫時的解析率

3.2.4泄漏曲線的繪制:取12g(濕重)經(jīng)過預(yù)處理的AB-8型大孔吸附樹脂裝入樹脂柱，按藥材/樹脂＝1:1(重量比)，取12g黃芩藥材加10倍量50%乙醇用確定的工藝加熱回流提取3次，得到溶液180mL。上柱，流速1mL/ min，收集流出液，每25mL為一份，共接7份，測定黃芩苷的泄漏曲線。見圖4。由圖可知，第3份開始泄漏，第4份泄漏約15%，第5份為25%，第7 份35%，可能流速稍快，放慢流速后會吸附效果更好。

3.2.5洗脫劑用量的選擇:依次用相當于5倍藥材量的70%乙醇進行洗脫，流速為1mL/ min，平行3份，測定每份洗脫液中黃芩苷的含量。結(jié)果得5倍量的洗脫劑即可洗脫相當于提取液中96%的黃芩苷，因此洗脫劑用量選擇5倍的藥材量。

3.2.6放大后工藝優(yōu)化及驗證:取160g經(jīng)過預(yù)處理的AB-8型大孔吸附樹脂裝柱，徑高比1∶6。按藥材/樹脂＝1.5∶1(重量比)，取240g黃芩藥材加10倍量的50%乙醇加熱回流提取三次，分別為1.5h、1h、40min，得提取液6500mL，回收乙醇，得到溶液1260mL，測定總提取液中黃芩苷的含量。上柱，流速為1mL/ min，當加入溶液量相當于藥材/樹脂＝1∶1時(840mL)，收集流出液記為流出液1，加入剩余溶液量相當于藥材/樹脂＝0.5∶1時(余下的420mL)，收集流出液記為流出液2。上柱完成后用蒸餾水洗，記為水洗液。然后依次用相當于藥材量的2.5倍、2.5倍、1.25倍的70%乙醇600mL、600mL、300mL進行洗脫，流速:1mL/ min，接洗脫液分別記為洗脫液1、洗脫液2、洗脫液3，分別測定各溶液中黃芩苷的量，結(jié)果見表4。

表4　工藝驗證結(jié)果

由表4可得，240g黃芩藥材經(jīng)提取得到黃芩苷24.472g，樹脂吸附量為(24.472-1.044-7.625)＝15. 803g，洗脫量為(9.097＋0.682＋0.037)＝9.8156g，吸附率＝15.803/24.472×100%＝64.57%，解吸率＝9.816/ (15.803～5.638)＝96.57%。

圖4　黃芩苷的泄漏曲線

4　討 論

黃芩苷對照品在稱量前應(yīng)減壓60℃干燥4h，否則實驗誤差大。裝柱子時棉花不宜過多，否則容易堵。往柱子內(nèi)加溶液時樹脂易被沖起，應(yīng)加棉花或紗布覆蓋，防止對實驗造成影響。提取液上柱后，水洗會導(dǎo)致黃芩苷損失嚴重，但不水洗直接用醇洗脫，提取物的雜質(zhì)多，因此要兼顧兩者而選擇最佳方法。同時，提取液上柱后何時接流出液，洗脫劑加入后何時接洗脫液有待進一步確定。回收乙醇時，有不溶于水的物質(zhì)粘在燒瓶壁上，其是否為有效成分有待考察。

該實驗下一步需要對不同濃度乙醇提取黃芩苷的效果進行比較；并對不同型號的樹脂進行篩選；對黃芩苷的產(chǎn)地、粒度、浸泡時間、提取溶劑用量、提取溫度、提取時間等因素對提取率的影響進行考察。應(yīng)對黃芩乙醇提取液得到的干燥物中黃芩苷含量與用大孔樹脂純化后得到的干燥物中黃芩苷含量作比較，確定黃芩苷的提取純化方法。

參考文獻:

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.282，391，457～458.

[2] 王春民，劉剛，費艷，趙卉，等.大孔吸附樹脂法純化黃芩總黃酮工藝的研究[J].中草藥，2010，1(41)：58～60.

[3] 于波濤，張志榮，劉文勝，等.黃芩苷穩(wěn)定性研究[J].中草藥，2002，33(3)：218～220.

[4] 李升林，張東向，張巖.提取溶劑對黃芩苷提取率影響的研究[J].林區(qū)教學(xué)，2012，1：5.

[5] 王軼晶，于洪儒，洪新，等.黃芩苷提取與純化工藝的比較研究[J].中國新藥雜志，2007，16(14)：1101～1104.

The Optimization of Extraction and Purification Process of the Baicalin in Scutellaria Baicalensis

ZHANG Lin，ZHOU Huageng，LIU Pei，et al
(Hebei Province Key Laboratory of Research and Development for Chinese Medicine/ Chengde Medical College，Hebei Chengde 067000，China)

Abstract:Objective:To optimize the extraction and purification methods of baica1in from scute11aria baica1ensis without using acid and a1ka1i. Method: The content of banica1in were determined by HPLC. The content of banica1in was regarded as investigation target，disti11ed water and 50%ethano1 were used as extracting so1ution，the banica1in was purified by AB-8 macroporous adsorption resin and then e1uted with different concentrations of ethano1. The transfer rate was investigated.Result: The optima1 extraction and purification process: extracted by 50%ethano1，recouered by ethano1，e1uted by 70%ethano1. Conclusion: The extraction and purification methods of baica1in from Scute11aria baica1ensis without using acid and a1ka1i reduce the damage of baica1in and environmenta1 po11ution by acid and a1ka1i，which is suitab1e for industria1-ized production.

Key words:Scute11aria baica1ensis； Baica1in； HPLC； Macroporous adsorption resin

文獻標識碼:B

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.02.001

文章編號:1006-6233(2016)02-0177-04

基金項目：?國家自然基金，(No.81341143)；河北省高校重點學(xué)科建設(shè)項目資助。河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究青年基金項目，(QN20131020)