細胞DNA定量分析聯合液基細胞學在宮頸癌篩查中的臨床應用研究?

譚景浪， 陳 瓊， 喬莎莎， 覃勤英， 鄧娟榮， 李美良， 陸厚良(廣西壯族自治區來賓市人民醫院病理科， 廣西 來賓 524000)

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細胞DNA定量分析聯合液基細胞學在宮頸癌
篩查中的臨床應用研究?

譚景浪， 陳 瓊， 喬莎莎， 覃勤英， 鄧娟榮， 李美良， 陸厚良
(廣西壯族自治區來賓市人民醫院病理科， 廣西 來賓 524000)

摘 要:目的:研究細胞DNA定量分析聯合液基細胞學在宮頸癌篩查中的臨床應用。方法:從2013年10月至2014年10月，選取實施宮頸癌篩查并且有活檢結果的病例1496例。所有病例均是使用宮頸刷進行取材，行液基方式制片兩張，一張實施巴氏染色，用來進行常規的細胞學TBS診斷。另外一張進行Feu1gen染色處理，用來進行細胞DNA定量分析診斷。結果:本文一共篩查檢測1496例適齡的婦女，活檢結果顯示癌5例，CIN1共40例，CIN2共6例，CIN3共5例。其中6例的CIN2病例中，實施細胞DNA定量分析檢測后結果顯示為陽性。有5例CIN1實施細胞DNA定量分析后結果顯示為可疑，進而使得活檢被延遲。僅僅使用常規的細胞學進行診斷，有4例CIN2病例被診斷是ASCUS，或會由于被建議進行復查進而導致活檢被延遲，使得病情被貽誤，特別是有2例宮頸癌也被診斷有ASCUS。有12例CIN1被診斷表現為陰性，30例CIN1診斷表現為ASCUS。在對較高級別的宮頸癌前的相關病變進行檢測時，細胞DNA定量分析方式的敏感性明顯大于常規的細胞學檢測。一旦使用聯合方式診斷，其敏感性明顯得到提升。然而和常規的細胞學進行對比，細胞DNA定量分析檢測方式的特異性較低。在聯合使用情況下，特異性和常規的細胞學進行對比，盡管特異性降低，但是敏感性進一步得到提升。結論:DNA定量細胞學和常規的液基細胞學進行對比，能有效提高陽性細胞的檢出率和高級別病變檢出的敏感性。兩者聯合使用，敏感性進一步得到提升，能夠有效提升細胞學檢測的質量，對宮頸癌篩查起到較為積極的作用。

關鍵詞:細胞DNA定量； 液基細胞學； 宮頸癌； 篩 查

本文特此研究細胞DNA定量分析聯合液基細胞學在宮頸癌篩查中的臨床應用，進行技術對比和討論，旨在探索有效提升細胞學檢測質量。現報道如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料:從2013年10月至2014年10月，選取我院進行宮頸癌篩查并且有活檢結果的病例共1496例，年齡24～65歲。標本的收集均由婦科醫師來操作完成:將宮頸刷伸入到檢測者的宮頸口處，旋轉3～5周，刷取宮頸部位的移行區的脫落細胞；將宮頸刷刷頭取下，放入細胞保存液中，貼好標簽之后，送至病理科由病理醫師實施檢測(所有檢測試劑由麥克奧迪醫療診斷有限公司提供)。

1.2研究方法:首先對制片進行染色處理:將標本進行震蕩離心處理后，棄去上清液，留下細胞的沉淀物，再將其進行稀釋到細胞懸液之后，加入細胞的分散劑。最后，將細胞懸液制作成為2張薄層的細胞玻片，一張進行巴氏染色，用來進行常規的細胞學TBS診斷。另外一張進行Feu1gen染色處理，用來進行細胞DNA定量分析檢測。①細胞DNA定量分析檢測:經過Feu1-gen染色處理之后的玻片，使用MotiCytometer的全自動細胞像分析系統(來自麥克奧迪醫療診斷系統有限公司，廈門，中國)實施掃描處理，并且取8000左右的細胞核。每一個細胞核均產生100多個參數的特征值。通過這些特征值，系統能夠自動的對這些細胞核進行分類處理。細胞DNA定量分析標準:陰性:是以正常的二倍體細胞作為主，未見到倍體異常細胞，即DNA指數(DI)＜2.5，并且增生細胞占到檢測細胞總數量的百分之五以下，建議其定期進行篩查。可疑:存在1～2個DI≥2.5的倍體異常細胞或者是增生細胞占到檢測細胞總數量的百分之五到百分之十，建議4～6個月進行復查。陽性:存在3個及以上的DI≥2.5的倍體異常細胞或者是增生細胞占到檢測細胞總數量的百分之十以上，建議進行陰道鏡檢查或者床臨活檢。②常規的細胞學檢測:根據2001年國際癌癥協會推薦使用的TBS分類標準為:正常范圍，未見上皮內病變或惡性病變(NILM)；意義不明的不典型鱗狀上皮細胞(ASCUS)；不典型鱗狀上皮細胞不除外高度病變(ASC -H)；低度鱗狀上皮內病變(LSIL)；高度鱗狀上皮內病變(HSIL)；鱗狀細胞癌(SCC)以及非典型腺細胞等。

1.3觀察指標:常規細胞學和聯合檢測陽性準確率；以≥CIN1以及≥CIN2作為陽性診斷標準及常規細胞學和DNA定量分析檢測標準性。

1.4統計學方法:采用SPSS13.0統計軟件分析，數據比較采用x2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結 果

2.1兩種細胞學篩查方式和活檢的對照:一共篩查檢測1496例適齡的婦女，年齡24～65歲。活檢結果顯示癌5例，CIN1共40例，CIN2共6例，CIN3共5例。其中6例的CIN2病例中，實施細胞DNA定量分析檢測后結果顯示為陽性。有5例CIN1實施細胞DNA定量分析后結果顯示為可疑，進而使得活檢被延遲，僅僅使用常規的細胞學進行診斷。有4例CIN2病例被診斷是ASCUS，或許會由于被建議進行復查進而導致活檢被延遲，使得病情被貽誤，特別是有2例宮頸癌也被診斷有ASCUS。有12例CIN1被診斷表現為陰性，30 例CIN1診斷表現為ASCUS。見表1。

表1　兩種細胞學篩查方式和活檢的對照n(%)

2.2常規細胞學和聯合檢測陽性準確率對比:常規細胞學和聯合檢測陽性準確率對比，差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2　常規細胞學和聯合檢測準確率比較

表3　以≥CIN1作為陽性診斷標準時常規細胞學和DNA定量分析靈敏度特異度及預防值

表4　以≥CIN2作為陽性診斷標準時常規細胞學和DNA定量分析檢測標準性對比n(%)

2.3以≥CIN1或≥CIN2作為陽性診斷標準時常規細胞學和DNA定量分析檢測標準性對比:在對較高級別的宮頸癌前病變進行檢測時，細胞DNA定量分析方式的敏感性明顯大于常規的細胞學檢測。一旦使用聯合方式診斷，其敏感性明顯得到提高。然而和常規的細胞學進行對比，細胞DNA定量分析檢測方式的特異性較低。在聯合診斷實施的情況下，特異性和常規的細胞學進行對比，盡管特異性降低，但是敏感性進一步得到提高。見表3、4。

3　討 論

宮頸癌作為危害廣大婦女身心健康的最為多見的惡性腫瘤之一，實施定期篩查是對宮頸癌進行預防的有效方式[1]。從宮頸的癌前病變逐步發展到宮頸癌，大約要花費5～15年的時間，因而讓宮頸癌得以及早發現及早治療創造了有利時機。如今，在許多較為發達的國家進行常規的宮頸癌篩查，已被證實可以有效地降低宮頸癌的發病率和死亡率。然而細胞學檢測作為形態學診斷，要保證技術人員具有較為豐富的操作經驗，否則可能導致敏感性降低、假陰性和假陽性發生率增高。近年來，雖然液基薄層細胞學技術極大程度上解決了取材制片上的局限性，但是由于閱片醫師水平的局限性和細胞形態學的改變缺乏較為客觀的判斷標準，使得細胞學診斷的結果可重復性不佳，對宮頸癌篩查結果造成了一定的影響。

本文研究發現，在對較高級別的宮頸癌前病變進行檢測時，細胞DNA定量分析檢測的敏感性明顯大于常規的細胞學檢測。一旦使用聯合方式檢測，其敏感性明顯得到提高。然而和常規的細胞學進行對比，細胞DNA定量分析檢測方式的特異性較低。在聯合診斷實施的情況下，特異性和常規的細胞學進行對比，盡管特異性降低，但是敏感性進一步得到提高。液基薄層細胞學的相關檢測作為近幾年來逐步發展起來的一項全新的檢測方式，有效提高了找到宮頸上皮內瘤變(CIN)的敏感度[2]。DNA定量分析方式是通過對體內的DNA水平進行測定，進而掌握以及了解患者腫瘤細胞的相關遺傳基因不斷變異的過程。在許多宮頸鱗狀細胞癌以及較高級別的HSIL病例中，均能夠找到DNA倍體的異常細胞[3]。在我國，特別是一些基層的地區，具有一定資歷的細胞學的醫師較為匱乏，80%以上的宮頸癌患者就是來源于這些地區。所以本文研究中，除了液基薄層細胞學之外，輔助使用全自動的細胞DNA定量分析技術操作，以此評估該技術在一些基層地區開展宮頸癌篩查的使用價值。全自動細胞DNA定量分析技術的操作簡單，對掌握技術要求的門檻較低，可以通過短期的培訓之后，技術員即可進行操作，相對于常規細胞學的診斷來說，更適合用于臨床篩查。

參考文獻:

[1] 萬曉晨，陳肖波，范芳華，等.宮頸癌患者手術前后血清TK1檢測的臨床意義[J].腫瘤學雜志，2012，18(4)：286～289.

[2] 劉會芳，趙元華，何榮霞，等.葉黃素對人宮頸癌HeLa細胞增殖和凋亡的影響[J].中華婦幼臨床醫學雜志(電子版)，2015，11(1)：14～17.

[3] 楊玉濤，張帆，鐘美，等.細胞DNA定量分析聯合液基細胞學對宮頸病變篩查的應用價值[J].貴陽中醫學院學報，2014，36(3)：5～8.

Clinical Application of DNA Quantitative Analysis Combined with Liquid
Based Cytology in Cervical Cancer Screening

TAN Jinglang， CHEN Qiong， QIAO Shasha， et al
(The People's Hospital of Laibin，Guangxi Laibin 524000，China)

Abstract:Objective:To study the c1inica1 app1ication of DNA quantitative ana1ysis combined with 1iquid based cyto1ogy in cervica1 cancer screening. Method: From October 2013 to October 2014，1496 cases of cervica1 cancer screening and biopsy resu1ts were se1ected in our hospita1. In a11 cases，two pieces were prepared by using the cervica1 brush，and the 1iquid based method was used to carry out the PAP staining，which was used for routine TBS diagnosis. In addition，a Feu1gen staining was used for quantitative ana1ysis of DNA ce11s. Result: A tota1 of 1496 cases of DNA were detected，Biopsy resu1ts showed 5 cases of carcinoma，40 cases of CIN1，6 cases of CIN2，5 cases of CIN3. Among them 6 cases of CIN2，and 6 cases of CIN2were detected. The resu1ts showed that the ce11s were positive after quantitative ana1ysis. The resu1ts of 5 cases of CIN1 imp1ementation after the DNA quantitative ana1ysis showed suspicious，and then the biopsy was de1ayed. Using on1y conventiona1 cyto1ogic diagnosis，4 cases of CIN2 were diagnosed as ascus，biopsy was de1ayed perhaps for being recommended for reviewing and then condition was de1ayed，especia11y two cases of cervica1 cancer were diagnosed with ASCUS. 12 cases of CIN1 were diagnosed as negative，30 cases of CIN1 were disignosed as ASCUS. The sensitivity of DNA quantitative ana1ysis method was significant1y higher than that of conventiona1 cyto1ogy in the detection of high grade cervica1 precancerous 1esions. Once used in combination，the sensitivity was significant1y improved. However，compared with the conventiona1 cyto1ogy，the specificity of DNA quantitative ana1ysis method was 1ower than that of conventiona1 cyto1ogy. In the combined use of cases，specificity and conventiona1 cyto1ogy were compared，a1though the specificity decreased，the sensitivity was further improved. Conclusion: DNA quantitative cyto1ogy and conventiona1 1iquid based cyto1-ogy can effective1y improve the detection rate of positive ce11s and the sensitivity of the detection of highgrade 1esions. In combination of the two methods，the sensitivity was further improved，which can effective1y improve the qua1ity of cyto1ogy test and p1ays a more positive ro1e in cervica1 cancer screening.

Key words:DNA quantitative； Liquid based cyto1ogy； Cervica1 cancer； Screening； App1ication

文獻標識碼:B

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.02.031

文章編號:1006-6233(2016)02-0261-04

基金項目：?廣西壯族自治區科學研究與技術開發計劃項目，(編號：0993003B-29)