血清mindin檢測在2型糖尿病腎病早期診斷的意義

趙倩 陳袁 徐臺林 藍雅琳

血清mindin檢測在2型糖尿病腎病早期診斷的意義

趙倩 陳袁 徐臺林 藍雅琳

目的 通過檢測血清中mindin的水平，分析血清mindin與糖尿病腎損傷的關系。方法 選取2型糖尿病（T2DM）住院患者96例，根據24小時尿微量白蛋白（urinary albumin，UALB）分為正常白蛋白尿組（A組，24 h UALB＜30 mg）48例，微量白蛋白尿組（B組，30 mg≤24 h UALB＜300 mg）25例，大量白蛋白尿組（C組，24 h UALB≥300 mg）23例，正常對照組（N組）20例為體檢中心健康人群。檢測糖化血紅蛋白、肌酐、血清胱抑素C、24 h UALB；酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定血清mindin水平。所有統計分析結果均使用SPSS 17.0統計學分析軟件進行。結果 （1）N組血清mindin水平顯著低于

A組、B組、C組（P＜0.05）；C組血清mindin水平明顯高于A組和B組，A組、B組、C組、N組分別為（162.87±17.29）pg/mL、（347.19±1 6.01）pg/mL、（453.65±20.86）pg/mL、（89.87±10.20）pg/mL，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（2）Pearson相關分析示，血清mindin水平與24 h尿微量白蛋白、血清胱抑素C、尿素氮、肌酐等呈正相關（r=0.788、0.887、0.715、0.512，P＜0.05）；與糖化血紅蛋白無相關性（r=0.112，P＞0.05）。結論 血清mindin可能反映糖尿病早期腎損傷，并可能與腎功能損傷程度相關。

mindin；2型糖尿病；糖尿病腎病

糖尿病（diabetes mellitus,DM）是由遺傳和環境因素共同引起的一組以糖代謝紊亂為主要表現的臨床綜合征，目前DM在全世界的患病率正在迅速增加。mindin是一種分泌型細胞外基質蛋白，由spon2基因編碼，它最初于1992年在斑馬魚基底層發現，隨后證明其參與海馬神經元的生長[1]。mindin在多個器官臟器中均有表達。近年來很多研究顯示了mindin是免疫反應的重要因子，是細胞外基質的獨特的模式識別分子[2]，在啟動先天免疫反應對抗病原入侵過程中發揮著重要作用。本研究擬通過測定T2DM患者及DN患者血清mindin的水平并且與臨床常規腎病檢查項目比較，初步探討人血清mindin與T2DM患者DN的相關性，以期為早期DN的臨床診療提供新視點。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年6月～2014年3月在遵義市第一人民醫院內分泌科住院的2型糖尿病患者共96例，均符合1999年WHO制定的2型糖尿病診斷標準。根據24 h尿微量白蛋白水平，分為3組，正常白蛋白尿組（A組）：T2DM且24 h尿微量白蛋白＜30 mg，48例，其中男23例，女25例，平均年齡（54.69±10.69）歲；微量白蛋白尿組（B組）：T2DM且30 mg≤24 h尿微量白蛋白＜300 mg，其中男12例，女13例，平均年齡（62.90±12.70）歲；大量白蛋白尿組（C組）：T2DM且24 h尿微量白蛋白≥300 mg，其中男11例，女12例，平均年齡（62.61±10.24）歲；正常對照組（N組）：在本院體檢中心選取20例健康體檢者作為正常對照組，性別和年齡均與2型糖尿病組患者相匹配。其中包括男9例，女11例，年齡（53.75±9.67）歲。研究對象排除1型及繼發性糖尿病，去除合并糖尿病急性并發癥（如高血糖高滲狀態、酮癥酸中毒），明顯缺氧、心肺肝功能不全、處于應激狀態的患者（嚴重創傷、手術、消耗性疾病、心腦血管事件等）；急慢性感染；合并其他腎臟疾病，如腎病綜合征，急性腎小球腎炎，慢性腎小球腎炎、泌尿系感染等；其他系統性、活動性疾病：如急性心梗、腦梗塞、結締組織病等；使用對實驗造成影響的藥物。4組間性別構成、年齡、身高、體質量、BMI、血壓等一般臨床資料和HbA1c無統計學差異，具有可比性。見表1。

1.2 檢測方法 糖化血紅蛋白采用高壓液相色譜法（HPLC），血清胱抑素C、尿素氮、肌酐采用Olympas（AU2700）全自動生化分析儀檢測，24小時尿白蛋白排泄率（UAER）采用免疫比濁法測定。

1.3 mindin水平的測定 使用美國R＆D公司的人mindin ELISA試劑盒。

1.4 統計學方法 本實驗所有統計分析結果均使用SPSS 17.0統計學分析軟件進行。符合正態分布的計量資料使用“x±s”表示；不符合正態分布的計量資料使用中位數（四分位間距）表示；組間比較使用單因素方差分析及q檢驗進行統計分析；兩變量間的相關性，使用Pearson相關分析，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

表1 4組臨床資料比較（x±s）

2 結果

2.1 血清miindin在各組間的比較 與N組比較，其余3組血清mindin水平增高，差異均有統計學意義（P＜0.05）；與A組比較，B組及C組mindin水平較高，差異有統計學意義（P＜0.05）；C組血清mindin水平高于B組，差異有統計學意義（P＜0.05），隨著24 h尿微量白蛋白的升高，血清mindin水平呈升高趨勢。見表2。

表2 4組血清mindin水平的比較（x±s）

2.2 相關性分析 將尿微量白蛋白、血清胱抑素C、糖化血紅蛋白、尿素氮、肌酐與血清mindin進行相關分析，血清mindin與尿微量白蛋白呈正相關（r=0.788，P＜0.05）；血清mindin與血清胱抑素C呈正相關（r=0.887，P＜0.05）；血清mindin與肌酐呈正相關（r=0.512，P＜0.05）；血清mindin與尿素氮呈正相關（r=0.715，P＜0.05）；糖化血紅蛋白與尿微量白蛋白（r=0.241）、肌酐（r=0.201）、尿素氮（r=0.286）存在正相關性（P＜0.05）；而糖化血紅蛋白與血清mindin（r=0.112）及血清胱抑素C（r=0.199）無明顯相關性。

3 討論

目前糖尿病腎病的診斷多采用尿液檢測為主，但是由于尿液收集不方便，且容易受多種因素（如放置時間過長、尿液留置方式不對等）的影響而導致影響檢測結果。探索簡單、準確的糖尿病腎病早期診斷方法，為糖尿病患者臨床診療提供依據，具有極其重要的意義。

足突細胞是構成腎小球濾過屏障外層的終末分化上皮細胞，在維持腎小球濾過屏障的完整性和防止蛋白尿的出現方面很重要[3]。M Murakoshi等[4]的研究證實了mindin主要在腎臟的足突細胞上表達，由損傷的足突細胞合成，并且證明了mindin的表達早于蛋白/肌酐比，說明mindin是足突細胞損傷的早期生物學標志，也是糖尿病腎損傷的實時指示器[4]。

mindin在細胞外基質蛋白中是啟動先天免疫反應的一個重要的模式識別分子[5]，而自身免疫反應機制可能是糖尿病腎病發生和進展的重要因素[6]。在糖尿病腎病患者中，自身免疫損傷與高血糖、基底膜非酶促糖化是進行性加重的[7]。

另外，有研究[8]發現人類mindin可介導整合素的結合。同時，整合素也參與了足突細胞的損傷，是足突細胞損傷的一個關鍵分子。足突細胞主要通過α3β1整合素以及α-/β-蛋白聚糖固定在基底膜[9]，而且α3β1整合素則主要是通過足突細胞整合表達。而mindin的功能是作為病原微生物和整合素配體聚集炎癥細胞的模式識別分子[10]，因此，mindin作為足突細胞損傷的標志，在糖尿病腎病的發生發展中很重要，并且可以成為糖尿病腎病的新型標記物。

尿微量白蛋白的出現提示糖尿病腎臟疾病的早期損壞及全身內皮的廣泛損傷，是目前診斷糖尿病腎病的較敏感而且可靠的指標[11]。本實驗通過相關分析證實，尿微量白蛋白與血清mindin存在相關性，呈正相關，隨著24 h尿微量白蛋白的升高，血清mindin也升高，每組血清mindin含量差異具有統計學意義（P＜0.05），且消除年齡、性別等差異后，仍具有統計學意義，說明血清mindin可能反映糖尿病腎病早期的損害，并且可能與糖尿病腎病的進展有關。

綜上所述，血清mindin可能早期反映糖尿病患者的腎損傷，并可能在早期診斷、病情觀察等方面有很好的應用價值。

[1] Zisman S,Marom K,Avraham O,et al.Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule[J]. Journal of Cell Biology，2007，178(7)：1237-1249．

[2] M Murakoshi，T Gohda，M Tanimoto，et al.Role of Mindin in Diabetic Nephropathy[J].Experimental Diabetes Research，2011,2011(1):59-61．

[3] Welsh GI，Coward RJ.Podocytes，glucose and insulin[J].Curr Opin Nephrol Hypertens，2010，19（4）：379-384.

[4] M Murakoshi，M Tanimoto，T Gohda，et al.Mindin:a novel market for podocyte injury in diabetic nephropathy[J].Mephrol Dial Transplant，2011，26(7):2153-2160．

[5] Surendar J，Anuradha S，Ashley B，et a1．Cystatin C and cystatin glomerular filtration rate as markers of early renal disease in Asian Indian subjects with glucose intolerance(CURES-32)[J]．Metab Syndr Relat Disord，2009，7(5)：419-425．

[6] A Rivero，C Mora，M Muros，et al.Pathogenic perspectives for the role of inflammation in diabetic nephropathy[J].Clinical science，2009，116:479-492．

[7] Sanchez AP，Sharma K.Transcription factors in the pathogenesis of diabetic nephropathy[J].Expert Rev Mol Med，2009，28(1)：11-13．

[8] YW He,H Li,J Zhang，et al.The extracellular matrix protein mindin is a pattern-recognition molecule for microbial pathogens[J].Nature Immunology,2004,5（1）:88-97．

[9] Asanuma K，Mundel P.The role of podocytes in glomerulus pethobiology[J]. Clin Exp Nephrol，2003，7（4）:255-259．

[10] Jia W,Li H,He YW.The extracellular matrix protein mindin serves as an integrin ligand and is critical for inflammatory cell recruitment[J].Blood，2005，106(12):3854-3859．

[11] Lane JT．Microalbuminuria as a marker of cardiovascular and renal risk in type2 diabetes mellitus：a temporal perspective[J]．Am J of Physiology Renal Physiology，2004，286(3)：F442-F450．

Objective To evaluate the signif i cance of serum mindin in the diagnosis of early diabetic nephropathy. Methods 96 patients with type 2 diabetes mullitus were devided to A group (n=48, normoalbuminuria, urinary albumin<30mg/24h), B group (n=25, microalbuminuria, 30mg≤24h urinary albumin<300mg), C group (n=23, macroalbuminuria, urinary albumin≥300mg/24h), and N group (n=20,normal control group) were enrolled. The glycated hemoglobin, creatinine, cystainC, urinary albumin were measured by conventional methods. The levels of serum mindin were measured by using ELISA kits. The statisical analysis were made with the SPSS17.0 software. Results The level of serum mindin in the healthy physical individuals were signif i cantly lower than in the patients of all 3 groups. Serum mindin in the patients of C group were signif i cantly higher than in other 2 group. The level of serum mindin in petients with normoalbuminuria, microalbuminuria, macroalbuminuria and normal controls were (162.87±17.29) pg/mL, (347.19±16.01) pg/mL, (453.65±20.86) pg/mL, (89.87±10.2) pg/mL. The level of serum mindin were positively correlated with 24 h-urinary albumin (r=0.788, P<0.05), cystatin C (r=0.887, P<0.05), Urea nitrogen (r=0.715, P<0.05), creatinine (r=0.512, P<0.05). The level of serum mindin were no correlated with HbAlc (r=0.112, P>0.05). Conclusion This study indicates that serum mindin might be closely ralated to diabetic nephropathy and participate in the progress of diabetic nephropathy. Serum mindin may probably ref l ect the early course of renal injury and be associated with renal function.

Mindin; Type 2 diabetes mellitus; Diabetic nephropathy

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.20.001

貴州 563003 貴州省遵義市第一人民醫院內分泌科 （趙倩陳袁 徐臺林 藍雅琳）