自動電位滴定測定馬蹄提取物中多酚類化合物

湯亞芳，黃廣鳳（鎮江高等職業技術學校，江蘇鎮江212003）

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自動電位滴定測定馬蹄提取物中多酚類化合物

湯亞芳，黃廣鳳
（鎮江高等職業技術學校，江蘇鎮江212003）

摘要：建立電位滴定法測定馬蹄中多酚類化合物含量的定量分析方法。以高錳酸鉀為氧化劑，在強酸性介質中，以沒食子酸為參照，用二階微分法確定待測樣品試液的滴定終點電位，對馬蹄提取物中的多酚類化合物進行自動滴定，并與可見分光光度法進行對比。方法的RSD為1.29%（n=5），平均回收率為99.34%。結果表明，本方法體系可以完成對多酚類物質的快速測定。

關鍵詞：自動電位滴定；馬蹄；提取；多酚

目前對多酚類化合物含量的測定方法有很多，主要有分光光度法、一階導數吸光光度法、高效液相色譜法和自動電位滴定法等。分光光度法測量快速、靈敏度高，但同一樣品的測定，受樣品溶液的濃度影響較大［1］。一階導數吸光光度法可在不加掩蔽劑的情況下，有效地消除一種或多種干擾物的影響，但是計算干擾物質的光譜零交點繁瑣［2］。高效液相色譜法檢測分辨率和靈敏度高，分析速度快，重復性好，定量精度高，應用范圍廣，適用于分析大分子、強極性、熱穩定性差的化合物，但價格昂貴，要用各種填料柱，容量小，分析生物大分子和無機離子困難，流動相消耗大，分析成本高。而自動電位滴定法不易受樣品溶液濃度變化的干擾，重現性好、操作簡便、靈敏度高且不易受指示劑終點判斷誤差的影響。馬蹄，為莎草科荸薺屬多年水生草本植物荸薺的地下球莖。其可作水果鮮食，有“土中紅水果”之稱，藥用價值高，既能達到保健、治療的目的又是一味美食，正是當前的研究熱點［3］，國內外學者對馬蹄的研究頻頻報道［4-8］，但關于馬蹄多酚的含量的自動電位滴定還少見報道。本文建立二階微分法的自動電位滴定新方法，在最佳試驗條件下對沒食子酸標樣及馬蹄提取物多酚類化合物進行自動測定，并同可見分光光度法加以比較，建立了自動電位滴定的馬蹄多酚測試方法。

1　材料與方法

1.1馬蹄樣品溶液的制備

取一定量新鮮馬蹄，剔除腐爛者，洗凈后切碎置于60℃的烘箱中，干燥24小時，干燥后用粉碎機粉碎，過40目篩備用。稱取5.07 g的粉末，用60%的乙醇以1∶30（g/mL）的料液比在60℃的恒溫水浴中浸提4 h，經玻璃砂芯漏斗過濾，將濾液置于250 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，定容待用。

1.2終點電位的確定

準確量取高錳酸鉀標準溶液5 mL（V1）于50 mL潔凈燒杯中，分別加入10 mL蒸餾水、5 mL硫酸（3 mol/L），將鉑電極和甘汞電極插入液面下，在電磁攪拌下，立即用沒食子酸標準溶液（0.002 100 g/mL）做滴定劑進行電位滴定。記錄消耗滴定劑的體積V與電位值E，用二階微商法計算出滴定的終點電位。

1.3樣品溶液中多酚類化合物的測定

準確量取已準確標定的高錳酸鉀標準溶液5 mL 于50 mL潔凈燒杯中，分別加入10 mL蒸餾水、5 mL 3 mol/L硫酸，以樣品溶液為滴定劑，立即用已設置好終點電位的電位滴定儀進行自動滴定，并記錄消耗滴液的體積，計算樣品溶液中多酚類化合物的量。重復操作5次，同時做空白試驗。

3　結果與討論

3.1滴定終點的判定

取2個平行樣，按照試驗步驟操作，滴定速度設為1滴/s，并均在終點跳出后再用手動滴加幾滴。根據數據繪制E/V曲線，如圖1。

圖1　E-V曲線Fig.1 E-V curved shape

圖1可知，當滴入溶液體積為3.00 mL時，開始發生明顯的電位突躍，但E-V曲線法較平坦，突躍不明顯，而在遠離滴定終點處，滴定劑體積（V）的變化所引起的電池電動勢（E）變化很小，越接近滴定終點，所引起的變化越大，即在滴定終點前ΔE/ΔV逐漸增大，到滴定終點時，達最大值，過滴定終點又逐漸變小。最后制作ΔE2/ΔV2-V曲線法，如圖2。

圖2　二階微商曲線Fig.2 Second derivative Δ2E/ΔV2-V shape

結合圖2電位突躍值，選取滴定液體積為3.30 mL～3.40 mL時的數據進行計算，即可求出滴定終點的體積，對應的終點電位E為-6.67 mV。

3.2樣品準確度的測定

以樣品溶液作為滴定劑，滴定高錳酸鉀的標準溶液，重復操作5次，所用滴定劑體積為20.66 mL，由5次滴定試驗所得到的馬蹄樣品溶液中總多酚類化合物含量濃度的平均值為0.342 g/L，所得測定結果的RSD為1.29%，結果精密度滿意。

取濃度不同的沒食子酸標準溶液，用可見分光光度法測定標準液的吸光度，繪制標準曲線。

圖3　沒食子酸標準溶液的標準曲線Fig.3 Standard curve of gallic acid

測得樣品溶液的吸光度為0.105，根據標準曲線計算，得到樣品溶液濃度為1.62×10-2g/mL，與自動電位滴定法測得的1.61×10-2g/mL非常接近，說明本方法的準確性符合要求。

3.3回收率的測定

在已知多酚化合物含量的樣品液中分別加入0.010、0.015、0.020、0.025、0.030 g干燥的沒食子酸做回收率試驗，結果顯示，使用自動電位滴定儀測定還原糖含量的結果準確可靠，回收率在96.7%～100.3%之間，平均回收率為99.34%，說明該方法可以得到較好的分析結果。

4　結論

本文建立的自動電位滴定法，由于是以儀器記錄電位變化來確定終點，故不受樣品試液顏色的干擾，5次平行測定的RSD為1.29%，平均回收率為99.34%，具有很好的準確度和精密度，可有效地彌補高錳酸鉀滴定時難以用指示劑確定終點的缺陷；另外，在有沒食子酸標準溶液做參比的情況下，不需對高錳酸鉀進行標定，省去測定步驟，該方法簡便、靈敏、重現性好，可用于果蔬中多酚類化合物含量的測定。

參考文獻：

［1］孫宏，張澤.分光光度法測定天然多酚類化合物含量的研究進展［J］.生物質化學工程，2008，42（3）：55-58

［2］張美榮，王鵬，王林.一階導數吸光光度法直接測定水和食品中鈣［J］.理化檢驗-化學分冊，2004，40（6）：324-328

［3］朱寶鼎.水生蔬果-荸薺［J］.美食，2010，11（11）：52-53

［4］劉旭，周忠光，安柏松，等.荸薺藥理學研究進展［J］.中醫藥信，2010，27（6）：106-108

［5］潘麗，朱志賢，鄭露，等.荸薺主要病害的研究進展［J］.長江蔬菜，2010，27（14）：10-14

［6］郝淑賢，劉欣，黃卉，等.荸薺英提取物抑菌特性初探［J］.華南農業大學學報，2006，27（3）：115-117

［7］蔡佳燕，壽森炎.荸薺組織培養研究進展［J］.北方園藝，2008，32（6）：72-74

［8］林慶宇，張志，魏小平，等.自動電位滴定法測定馬蹄中的總還原糖［J］.安徽農業科學，2011，39（26）：16450-16451

Determination of Polyphenols in Chinese Water Chestnut Extraction by Automatic Potentiometric Titration

TANG Ya-fang，HUANG Guang-feng
（Zhenjiang Vocational Technical College，Zhenjiang 212003，Jiangsu，China）

Abstract：The automatically potentiometric titration was used to determine polyphenols in Chinese Water chestnut. The sample was tested used potassium permanganate as an oxidant in strong acid medium，gallic acid as reference，and the result was compared with the visible spectrophotometry. The RSD of method was 1.29% （n=5），and the average recovery was 99.34%. The results showed that the methodology can be completed on the rapid determination of polyphenols.

Key words：automatic potentiometric titration；Chinese Water Chestnut；extraction；polyphenols

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.09.039

作者簡介：湯亞芳（1974—），女（漢），講師，碩士，研究方向：光譜分析。

收稿日期：2015-01-30