益腎寧湯劑對慢性腎小球腎炎患者血清TGF-β1、MMP-9的影響※

公　敏　通訊作者：李　紅

(1.山西中醫(yī)學(xué)院，太原030024 2.山西中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院)

益腎寧湯劑對慢性腎小球腎炎患者血清TGF-β1、MMP-9的影響※

公敏1通訊作者：李紅2

(1.山西中醫(yī)學(xué)院，太原030024 2.山西中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院)

慢性腎小球腎炎(CGN)病情纏綿，反復(fù)發(fā)作，是發(fā)病率最高的慢性腎臟病。CGN是慢性腎衰竭的主要原發(fā)疾病，可明顯降低患者生活質(zhì)量[1]。西醫(yī)對本病的發(fā)病機(jī)制已較明確，但是無較好的治療方法，且副作用大，費(fèi)用較高。中醫(yī)對本病治療有一定優(yōu)勢，但微觀上作用機(jī)制并未明確。現(xiàn)代研究認(rèn)為，細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成和降解過程的動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)可導(dǎo)致ECM過度積聚，成為腎小球硬化的主要病理改變[2]。其中，TGF-β1、MMP-9是參與該過程的主要因子，促進(jìn)腎臟組織纖維化的形成。本文以ELISA檢測方法測定CGN患者治療前后TGF-β1、MMP-9變化情況，探討益腎寧湯劑對CGN的作用靶點(diǎn)，報(bào)道如下。

一般資料

以70例CGN患者為研究對象，均于2013年10月—2014年10月就診于我院腎內(nèi)科，中醫(yī)辨證屬于脾腎氣虛型。患者年齡25～60歲，平均(43.4±2.4)歲，男36例，女34例，同時(shí)伴高血壓者16例，伴糖尿病者12例，治療前病程3～10年，平均(6.5±2.8)年。納入標(biāo)準(zhǔn)[3]：臨床表現(xiàn)為起病緩慢，病程遷延，可輕可重，或時(shí)輕時(shí)重，隨病情發(fā)展，可有腎功能減退、貧血、電解質(zhì)紊亂等情況出現(xiàn)；可有蛋白尿和(或)水腫、高血壓、血尿及管型尿等表現(xiàn)中的一種或數(shù)種；24 h尿蛋白在0.15 g/L以上，但低于3.5 g/L、Cr低于133 μmol/L。排除標(biāo)準(zhǔn)：①腎功能不全失代償期以上的患者；②藥物過敏史者；③經(jīng)檢查證實(shí)為糖尿病腎病、高血壓腎損害、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、藥物性腎損害等繼發(fā)因素所致者；或者其他原因?qū)е耇GF-β1、MMP-9水平發(fā)生異常者；④伴有意識障礙、精神異常者、妊娠者。中醫(yī)辨證分型屬脾腎氣虛型，主癥：腰痛；疲倦乏力，或浮腫；納少或腹脹；次癥：大便溏，尿頻，或夜尿多，或遺尿；舌質(zhì)淡、有齒印，苔薄黃，脈細(xì)弱。符合主癥1項(xiàng)及次癥1項(xiàng)，或次癥2項(xiàng)可診斷為脾腎氣虛證。所有病例以入院病例號為編號，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表，將患者隨機(jī)分成兩組，每組35例。兩組患者一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

治療方法

對照組患者給予常規(guī)治療，并服用10 mg洛汀新(鹽酸貝那普利片，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20000292，生產(chǎn)企業(yè)：北京諾華制藥有限公司，規(guī)格5 mg×7片×2板/盒)，2次/d，早晚各1次。治療組同時(shí)服用益腎寧湯劑(黃芪30 g，黨參15 g，生地黃15 g，金櫻子15 g，當(dāng)歸15 g，川芎15 g，丹參30 g，青風(fēng)藤15 g，石韋30 g，白茅根30 g，白花蛇舌草30 g，砂仁6 g，鱉甲20 g，水蛭粉6 g)，1劑/d，采用全自動(dòng)入藥煎藥機(jī)煎煮，每劑2袋，每袋250 mL，每次1袋，早晚餐后半小時(shí)溫服。治療4周為1個(gè)療程，觀察療效。

觀察指標(biāo)：分別于治療前后監(jiān)測腎功指標(biāo)(BUN、Cr)，以ELISA檢測方法測定TGF-β1、MMP-9變化情況。

治療結(jié)果

療效觀察：參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[4]：①臨床控制：尿常規(guī)檢查蛋白轉(zhuǎn)陰，或24 h尿蛋白定量(UTP)正常，腎功能正常；②顯效：尿常規(guī)檢查蛋白減少2個(gè)“+”，或UTP減少≥40%，腎功能正常或基本正常；③有效：尿常規(guī)檢查蛋白減少1個(gè)“+”，或UTP減少<40%，腎功能正常或有改善；④無效：臨床表現(xiàn)與上述實(shí)驗(yàn)室檢查均無改善或加重者。

結(jié)果：治療后，治療組總有效率優(yōu)于對照組總有效率(P<0.05)，見表1。

表1　治療組與對照組患者臨床療效比較[例(%)]

注：與對照組比較，△P<0.05

腎功指標(biāo)變化：治療后，治療組BUN、Cr、UTP較治療前明顯改善(P<0.05)；并且優(yōu)于對照組治療后各指標(biāo)(P<0.05)，見表2。

表2　治療組與對照組患者腎功指標(biāo)變化比較±s)

注：與對照組比較，△P<0.05；與治療前比較，*P<0.05

組間TGF-β1、MMP-9水平變化：治療后，治療組TGF-β1、MMP-9水平較治療前明顯改善(P<0.05)，并且優(yōu)于對照組(P<0.05)，見表3。

表3　治療組與對照組患者TGF-β1、MMP-9水平比較

注：與對照組比較，△P<0.05；與治療前比較，*P<0.05

討論

CGN的中藥治療成為現(xiàn)代熱點(diǎn)研究課題，由于中藥治療的整體觀以及多靶點(diǎn)特征，使其在CGN等慢性疾病治療中具有突出優(yōu)勢，臨床應(yīng)用中相對副作用小，安全性高，可長期服用。

大量文獻(xiàn)資料顯示[5～7]，根據(jù)分型論治，中藥在CGN治療上臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)豐富，并且取得良好臨床效果。益腎寧為臨床治療CGN經(jīng)驗(yàn)方，可有效降低蛋白尿，改善臨床癥狀，但是關(guān)于益腎寧作用機(jī)制相關(guān)資料缺乏，故從分子生物學(xué)加以研究和分析。

現(xiàn)代研究表明[8，9]，CGN發(fā)病機(jī)制主要可歸結(jié)為細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)更新代謝的動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)，導(dǎo)致ECM進(jìn)行性積聚，促進(jìn)腎小球纖維化的形成。該過程機(jī)制十分復(fù)雜，有多種細(xì)胞因子參與，其中TGF-β1、MMP-9為主要相關(guān)因子。MMP-9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶類(MMPS)中的Ⅳ型膠原酶/明膠酶類，是調(diào)節(jié)ECM的主要降解酶。原因在于Ⅳ型膠原纖維構(gòu)成腎小球、腎小管基底膜，MMP-9對其降解功能具有專一性，可維持基底膜完整性[10]。MMP-9水平下調(diào)，可導(dǎo)致ECM過度積聚，腎小球逐漸硬化。所以檢測血液中MMP-9濃度對早期慢性腎小球疾病有一定診斷價(jià)值。TGF-β1可促進(jìn)炎癥反應(yīng)，是致纖維化作用最強(qiáng)的細(xì)胞因子。它通過直接刺激ECM分子合成，抑制T、B淋巴細(xì)胞分泌過程，抑制機(jī)體免疫功能。TGF-β1還可抑制MMPS的分泌，增強(qiáng)MMPs的內(nèi)源性特異性抑制因子(TIMPs)活性，從而阻斷ECM降解途徑，致使ECM沉積[11]。因此，TGF-β1、MMP-9在腎臟疾病發(fā)生發(fā)展中的變化作用備受重視，成為重要研究指標(biāo)。

本研究顯示，西醫(yī)治療基礎(chǔ)上聯(lián)合益腎寧治療CGN，可下調(diào)TGF-β1水平，上調(diào)MMP-9水平，可促進(jìn)ECM降解，可能是益腎寧達(dá)到臨床療效的機(jī)制所在，起到抗腎臟組織纖維化的作用。益腎寧以益氣健脾補(bǔ)腎、活血利濕清熱立法。中藥組成中，黃芪、黨參配伍共同補(bǔ)氣健脾，近代藥理研究發(fā)現(xiàn)兩藥合用可以調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，改善機(jī)體代謝，同時(shí)減少蛋白質(zhì)的流失[12]。生地黃養(yǎng)陰生津，補(bǔ)腎的同時(shí)理脾胃之傷，并且提高機(jī)體免疫能力。活血養(yǎng)血之品中當(dāng)歸、川芎、丹參聯(lián)合應(yīng)用，有效改善患者血液高凝狀態(tài)，促進(jìn)纖維蛋白的降解，同時(shí)配合多種清熱、利尿、通淋之品，發(fā)揮抗氧化作用，抑制炎癥反應(yīng)，對抗腎組織的損傷。

諸藥合用，形成多靶點(diǎn)的治療特色，從而發(fā)揮抗纖維化作用。

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(收稿日期2015-08-31)

※課題項(xiàng)目：2014年山西省衛(wèi)生廳科技攻關(guān)項(xiàng)目