金蕎麥藥酒對膠原誘導關節炎模型大鼠 IL—22、IL—18及TNF—α的影響

萬進軍　潘朝旺

【摘要】目的：觀察金蕎麥藥酒對膠原誘導關節炎大鼠模型血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響。方法：將Wistar大鼠隨機分成6組，空白組、模型對照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組，建立Ⅱ型膠原誘導關節炎大鼠模型，檢測血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α的含量。結果：與空白組比較，模型對照組血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α明顯升高；與模型組比較，各給藥組的上述指標均得到改善。結論：金蕎麥藥酒治療類風濕關節炎的機制可能與降低IL-22、IL-18、TNF-α有關。

【關鍵詞】金蕎麥藥酒；膠原誘導關節炎；白細胞介素-22；白細胞介素-18；腫瘤壞死因子-α

【中圖分類號】R2855【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）10-0016-02

Abstract：Objective To observe the influence of fagopyrum dibotrys medicinal liquor on IL-22，IL-18 and TNF-αof collagen-induced arthritis model rats.Methods 60 wistar rats were divided into 6 groups at random：blank group， model group，high dose fagopyrum dibotrys group， low dose fagopyrum dibotrys group，and glucosidorum tripterygll totorum group. The rat model of Ⅱ collagen-induced arthritis （CIA） was established. The IL-22，IL-18，TNF-α of the serum and synoviocytes were determined. Results The serum and synoviocytes IL-22，IL-18，TNF-α were increased，compared with blank group. The above index were ameliorated in treatment groups.Conclusion The mechanism of fagopyrum dibotrys medicinal liquor for rheumatoid arthritis maybe related to adjust IL-22，IL-18，TNF-α.

Keywords：fagopyrum dibotrys medicinal liquor；collagen-induced arthritis；IL-22；IL-18；TNF-α

金蕎麥別名苦蕎麥、蕎麥當歸、蕎麥三七、金鎖銀開、賊骨頭、鐵拳頭、土茯苓等；其性涼，味辛、苦，具有清熱解毒、活血化瘀、健脾利濕的作用。金蕎麥藥酒在民間用于治療類風濕關節炎（RA）效果明顯，課題組前期研究也證明金蕎麥藥酒具有明顯的鎮痛抗炎作用[1]，但尚未見關于抗RA作用的研究。實驗旨在研究金蕎麥藥酒對Ⅱ型膠原誘導關節炎模型（CIA）大鼠血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響，探討其抗RA免疫作用機制，為金蕎麥應用于RA提供理論依據。

1儀器與材料

11藥物雷公藤多苷片（批號：20131114，浙江得恩德制藥有限公司）；金蕎麥藥酒，以金蕎麥根莖及塊根計，每毫升藥酒相當于04g原藥材，本院自制。

12動物Wistar大鼠60只，體重（200±20）g，SPF級，雌雄各半，合格證號：SCXK（鄂）2011-0012，由三峽大學實驗動物中心提供。

13試劑完全弗氏佐劑（FCA）、雞Ⅱ型膠原（CⅡ）由sigma 公司提供；白細胞介素-22（IL-22）、白細胞介素-18（IL-18）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）測定試劑盒由上海酶聯生物科技有限公司提供。

14儀器UV754紫外可見分光光度計（上海佑科儀器儀表有限公司）；臺式冷凍離心機（上海安亭科學儀器公司）。

2方法

21動物造模及分組給藥隨機抽取10只大鼠，為空白組，其余50只建立Ⅱ型膠原誘導關節炎模型[2-3]。用02%醋酸將CⅡ溶解，使其濃度為2mg/ml，放置過夜（4℃條件下），與FCA按1∶1比例混合，在冰浴中乳化，得到CⅡ乳劑，對每只大鼠右后肢足趾、背部及尾根部3點皮內共注射04ml，在相同部位3點對空白組注射生理鹽水01ml。所有造模大鼠7d后加強免疫1次，即按原方法注射CⅡ乳劑02ml。將造模大鼠隨機分為5組，即模型對照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組。空白組，模型對照組于造模后給予生理鹽水15ml/（kg·d），雷公藤多苷組給予雷公藤多苷片003g/（kg·d），金蕎麥高、中、低劑量組分別給予金蕎麥藥酒540、270、135ml /（kg·d），相當于原生藥216、108、054g/（kg·d），連續給藥21d。

22血清TNF-α、IL-22、IL-18的測定末次給藥2h后，將大鼠用3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，固定，腹總動脈取血，離心，制備血清，按試劑盒說明測定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。

23滑膜細胞TNF-α、IL-22、IL-18的測定取大鼠后肢右膝關節，分離出滑膜，剪碎，用生理鹽水1∶20勻漿，按試劑盒說明測定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。

24統計學處理數據采用SPSS 170軟件進行統計處理，數據采用均數±標準差（x±s）表示，采用用t檢驗，P<005表示差異有統計學意義。

3結果

31對血清TNF-α、IL-22、IL-18的影響與空白組比較，模型對照組小鼠血清TNF-α、IL-22、IL-18含量升高，差異有統計學意義（P<001）；雷公藤多苷組和金蕎麥藥酒各劑量組與模型組相比，血清TNF-α、IL-22、IL-18含量降低，除低劑量組IL-22無明顯差異外，其他組別和指標差異有統計學意義（P<005或P<001）。見表1。

3討論

RA是一種以關節滑膜炎癥為主要表現的自身免疫性疾病。研究表明，NK細胞在RA發病過程中發揮重要作用[4]，NK-22細胞是不同表型的NK細胞之一，RA患者血液和滑液中NK-22細胞明顯高于正常人[5]。IL-22是NK-22細胞分泌的細胞因子之一，能促進類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞增殖，是促成纖維樣滑膜細胞增生的細胞因子[6]，在RA的病理過程中發揮重要作用。IL-18作為一種新型IL家族促炎細胞因子，主要與IL-18受體結合發揮效應。實驗表明，RA患者血清IL-18明顯升高，其水平與病情呈正相關[7]，提示IL-18參與RA病情的活動，其作用與促進T細胞增殖和NK細胞的細胞毒作用，誘導以Th1細胞為主的細胞免疫反應，使病變組織 Th1/Th2比例失衡有關[8]。TNF-α是一種免疫調節和前炎性因子，在病變關節中可促進前列腺素E2（PGE2）等多種炎癥介質釋放，引起關節軟骨的吸收破壞，促進成纖維細胞的增生；且TNF-α常與IL-1β一起合成與釋放，是致病機制中一對重要的促炎癥細胞因子，參與了RA發生、發展的全過程。

在RA患者病變關節滑膜內，巨噬細胞數量明顯增多，其不僅與關節疼痛數、壓痛數、血沉、C 反應蛋白等反應RA病情程度的指標呈明顯的正相關，還與X線關節破壞的侵蝕積分和狹窄積分呈明顯的正相關[9]，可能與其釋放IL-22、IL-18、TNF-α等炎性因子有關。

本實驗研究表明，金蕎麥藥酒對CIA大鼠免疫功能有明顯影響，可降低血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α含量，這些可能是其治RA的作用機制之一。

參考文獻

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（收稿日期：20160327）