盆腔炎后遺癥動物模型的研究進展

王亞男　師偉　呂姝菡　劉好宇　劉金星

【摘要】盆腔炎性疾病后遺癥動物模型作為盆腔炎后遺癥發病機制、預防、治療、開發新藥的重要載體，在盆腔炎性疾病后遺癥的研究中發揮著極為重要的作用。筆者通過對目前SPID動物造模方法進行總結，從手術及非手術方面對其建立的方法進行綜述。

【關鍵詞】盆腔炎性后遺癥；動物模型；研究進展；綜述

【中圖分類號】R71133【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）10-0042-02

盆腔炎性疾病后遺癥[1]（sequelae of pelvic inflammatory disease，SPID）SPID）是盆腔炎性疾病未得到及時正確的診斷治療，而發生的女性上生殖道及周圍組織破壞、粘連、增生、瘢痕、積水及腫物形成等一系列的后遺癥，既往稱慢性盆腔炎。可引起不孕、異位妊娠、慢性盆腔痛，常反復發作，從而嚴重影響婦女的生殖健康及生活質量。動物模型對于全面深入系統的研究SPID 具有重要意義，隨著科研技術的不斷進步發展，SPID 的造模方法也在逐漸完善，現總結如下。

1手術法

11異物置入誘發的模型將異物置入子宮體內，可引發局部炎性反應及機體的免疫反應。吳虓飛等[2]將大鼠麻醉后做背部縱切口，暴露右側子宮，在卵巢下1cm處作一切口，將消毒后的塑料管放入子宮內，并與子宮切口縫合固定，觀察子宮明顯紅腫，子宮壁增厚，較左側的子宮明顯變粗，子宮明顯腫脹，即完成造模。

12化學性燒傷誘發的模型目前通常采用苯酚膠漿法，因該法操作簡單，造模成功率高，因而在SPID大鼠模型中應用較廣泛，通過苯酚對局部組織的化學性燒傷而達致炎目的，建立慢性盆腔炎動物模型。研究中常用苯酚膠漿（ 苯酚、西黃芪膠、甘油加水制成或由液化苯酚、蒸餾水以及羧甲基纖維素鈉配置而成）。馬云等[3]采用一側子宮注入，麻醉大鼠后，于下腹部正中切口2cm，暴露子宮，用注射器，于子宮分岔處進針入子宮腔內，朝右側方向緩慢推注苯酚膠漿，術畢，逐層關腹，造模完成。呂曉軍等[4]亦采取開腹單側注入苯酚膠漿法，使子宮內膜腔壁結構改變，上皮細胞增生、變性及壞死，慢性炎癥細胞浸潤，造模成功。劉慶等[5]采用鹽酸致炎法，麻醉大鼠后，行剖腹術，暴露子宮，向雙側宮腔注入03mol/L鹽酸，以管腔充盈為度，關腹。鏡下可見管壁變薄，部分上皮變性、脫落，黏膜下層充血、水腫，炎細胞浸潤，造模成功。

13器械損傷聯合細菌感染誘發的模型機械損傷和慢性刺激也是誘發盆腔炎的主要原因之一。流行病學研究指出[6]，使用宮內節育器者較不使用者患盆腔炎的危險提高，有宮腔操作史的患盆腔炎的危險率明顯增高。臨床研究者在細菌感染致炎造模方法基礎上加入了機械損傷這一操作，造模成功率高，故被越來越多的采納運用。而手術法與細菌法相結合方便了模型的建立，臨床上常采用單一細菌聯合機械損傷法盆腔炎模型和混合細菌聯合機械損傷法盆腔炎模型兩種。

131單一細菌聯合機械損傷法盆腔炎模型目前臨床[7-9]多采用大腸桿菌所致大鼠慢性盆腔炎模型，造模方法是開腹后暴露并固定右側子宮，用注射器抽取大腸桿菌懸液，用機械損傷子宮內膜組織后注入菌液，按照病理觀察指標及積分標準評判，實驗組與空白組指標差異性顯著提高，造模成功。

132混合細菌聯合機械損傷法盆腔炎模型法楊林波等[10]將大鼠子宮暴露后，將混合細菌懸液（按大腸桿菌與金黃色葡萄球菌2∶1的比例）在注射器機械損傷子宮內膜組織后注入宮腔，肉眼觀察到模型組盆腔充血，纖維組織粘連明顯，即成功制備動物模型。孫晶等[11]用烏拉坦進行腹腔麻醉，麻醉滿意后，動物取俯臥位，固定頭和四肢于操作臺上。背部碘伏消毒，分別取雙側子宮、輸卵管、卵巢體表投射區切口，長約1cm，用眼科手術器械找出子宮，用注射器抽取混合細菌懸液（按大腸桿菌、乙型溶血性鏈球菌和金黃色葡萄球菌2∶1∶1比例），沿輸卵管-卵巢方向于宮腔內緩慢注射，每側注入01ml菌液，縫合切口處肌肉組織及皮膚，局部組織充血、水腫，提示造模成功。師偉等[12]亦使用混合菌加機械損傷造模法造模成功。

2非手術法

因臨床多數盆腔炎患者是由病原體從外生殖器上行感染所致，主要包括外源性病原體（沙眼衣原體、淋病奈瑟菌和支原體等）和內源性病原體（需氧菌和厭氧菌），當女性生殖道的自然防御功能遭破壞，或機體免疫功能降低、內分泌發生變化時，下生殖道的病原體上行，或外源性病原體侵入，均可導致盆腔炎發生，因而非手術即病原體下行感染所誘發的動物模型更接近人類盆腔炎。

21沙眼衣原體感染小鼠模型陳木開等[13]通過對小鼠陰道內接種小鼠肺炎沙眼衣原體，21d內輸卵管發生急性炎癥，21d后輸卵管出現扭曲、積水等慢性炎癥，提示造模成功。Jalal H等[14]在沙眼衣原體接種前，將小鼠皮下注射醋酸甲羥孕酮 25mg，實驗組分別于陰道內接種30μl E型Ct懸液（ 約25×107IFU/ml） ，對照組接種 30μl SPG，空白組不做任何處理。35d后實驗組小鼠雙側子宮增粗，呈氣球樣腫脹，質硬，宮腔內積膿積液，證明造模成功。韓建德等[15]通過對小鼠陰道內接種肺炎沙眼衣原體，3周后輸卵管出現扭曲、阻塞、積水等慢性炎癥，提示造模成功。

22解脲支原體感染模型因人是支原體的唯一宿主，Taylor Robinson 等[16]發現用雌激素將小鼠預處理的方法，可以成功的建立生殖道解脲支原體的感染模型，而沒有經過雌激素預處理過的小鼠，無法在生殖道完成定植。這種造模方法一直在解脲支原體研究中廣泛的借鑒、應用。Zhu GX等[17]將小鼠用E2預處理后，在陰道注射解脲支原體懸液，3周后肉眼可見子宮及輸卵管一定程度的水腫，光鏡下觀察間質中性粒細胞不同程度的浸潤，腺體擴張增生，提示造模成功。Shkarupeta 等[18]參照 Taylor Robinson 的造模方法，用 BALB /c 小鼠建立了人型支原體感染的模型。劉弘等[19]采用雌性小鼠制模，造模前小鼠陰道分泌物解脲支原體培養均為陰性，然后將小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液，每周1次，共4次。第二次注射后在陰道接種解脲支原體感染液，待液體被陰道載膜完全吸收后放回籠內，分籠喂養。每天接種1次，連續3次。1周后再加強接種感染液1次。造模結束后1周取小鼠陰道分泌物進行解脲支原體液體培養。模型組肉眼可見輸卵管水腫，光鏡下觀察載膜層及間質中性粒細胞的不同程度的浸潤，腺體擴張或增生，間質疏松水腫，提示造模成功。

23解脲脲原體感染小鼠模型鄭冰潔[20]在研究解脲脲原體14血清型BALB/C小鼠感染模型中發現，將小鼠經雌激素預處理后經陰道接種無菌Uu液體培養基及顏色改變單位濃度為1×107CCU/ml的各型標準菌液，21d后送病理，1/3/11/8以慢性炎癥為主，表現為漿細胞、嗜酸性粒細胞浸潤，宮腔腺體擴張粘連等。為進一步準確建立盆腔炎性疾病后遺癥動物模型做了準備。

24淋病奈瑟菌感染大鼠模型淋病奈瑟菌的唯一宿主是人類，淋病研究一直為缺乏有效的動物模型所困擾。人類細胞膜上存在多種參與淋病奈瑟菌黏附定植的特異性受體，如菌毛受體hCD46、Opa蛋白受體hCEACAM1等。因此，表達hCD46和hCEACAM1的轉基因小鼠可望成為淋病研究的理想動物模型。Jerse[21]將雌二醇緩釋藥丸植入小鼠的真皮內，同時再注射抗生素，取淋病奈瑟菌混懸液接種于小鼠陰道內，成功建立了較好的淋病奈瑟菌小鼠感染模型，并利用該模型進行了疫苗研究方面的深入探討。劉海鵬等[22]利用 17-β-雌二醇將小鼠預處理后，取淋病奈瑟菌混懸液用加樣槍接種于小鼠陰道內，動態監測小鼠陰道分泌物，發現小鼠感染時間并不是很長，需進一步研究。

25非手術化學燒傷法誘發的模型付桂香等[23]用錐形靜脈切開針，進入陰道深部注入苯酚膠漿，模型組左側子宮內膜腺上皮明顯增生增厚，上皮層次明顯增多，核分裂相較多見，上皮細胞有變性壞死，呈扁平狀，上皮下增生的淋巴細胞較多，成功制作了大鼠陰道及宮頸炎模型。

3小結

隨著對盆腔炎后遺癥發病機制的不斷深入研究和探討，動物實驗模型亦在不斷地演變。只有選擇與人類盆腔炎相近的感染源、感染途徑、病變特點的動物實驗模型，才能提高動物模型與臨床疾病的一致性，進一步較客觀地評價出藥物的療效。臨床上，盆腔炎性疾病后遺癥多是有盆腔炎性疾病未得到及時正確的診斷或治療引發的，屬于一個慢性遷延的過程，而目前，國內絕大多數盆腔炎性后遺癥動物模型所采用的造模方法為手術聯合細菌感染或單純化學燒傷的方法，國外多采用支原體與衣原體感染所致的陰道上行感染動物模型，所復制的模型大多是在急性感染階段，并不符合盆腔炎性疾病后遺癥的病變特點。而下生殖道長期上行感染病原菌及手術急性感染期后的慢性遷延期，較符合臨床發病情況與診段。國內盆腔炎性疾病后遺癥主要通過陰道上行感染需氧菌，如大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，支原體、衣原體而致的疾病，建議應進一步開展不同感染源陰道上行感染致炎模型的研究，如能造模成功，其藥物療效就更有針對性，治療盆腔炎后遺癥的中藥新藥的藥效學評價體系將更科學、規范和完善。

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（收稿日期：20160324）