芪桂益脈靈對(duì)急性心肌缺血再灌注損傷大鼠模型環(huán)氧化酶-2的影響

徐京育，趙　龍，張超越

芪桂益脈靈對(duì)急性心肌缺血再灌注損傷大鼠模型環(huán)氧化酶-2的影響

徐京育1，趙龍2，張超越2

1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)( 哈爾濱 150040)；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)研究生

摘要：目的探討芪桂益脈靈(QGYML)對(duì)心肌缺血再灌注大鼠心肌組織環(huán)氧化酶-2(COX-2)的影響。方法取SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組，空白組(10只)灌服生理鹽水后不做任何處理，假手術(shù)組(10只)灌服生理鹽水后，開胸暴露左冠狀動(dòng)脈，穿線但不作結(jié)扎，其余30只大鼠分別分成單純?nèi)毖俟嘧⒔M、芪桂益脈靈低劑量組和芪桂益脈靈高劑量組。并且結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支造成急性心肌梗死(AMI)模型，造模成功后，分別給生理鹽水、QGYML大小劑量(即1.2 g/kg和0.6 g/kg)，每日清晨空腹灌胃給藥一次，連續(xù)灌服7 d。腹主動(dòng)脈采血5 mL，離心后取上層血清，采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫測(cè)定COX-2的表達(dá)。結(jié)果單純?nèi)毖俟嘧⒔MCOX-2水平明顯高于空白組和假手術(shù)組(P<0.05)，芪桂益脈靈組與單純?nèi)毖俟嘧⒔M相比，大鼠血清中COX-2表達(dá)減少，其中高劑量組的效果更加顯著。 結(jié)論COX-2 在心肌急性缺血再灌注中均有高水平表達(dá)，提示炎癥參與了急性心肌缺血再灌注，芪桂益脈靈可降低 COX-2 的蛋白表達(dá)水平，減輕缺血再灌注心肌炎癥反應(yīng)，對(duì)心肌起保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：心肌缺血再灌注；芪桂益脈靈；環(huán)氧合酶-2；心肌炎癥；大鼠

近年來有研究表明，急性心肌梗死時(shí)通過抑制環(huán)氧化酶-2(COX-2)，可以抑制炎癥反應(yīng)，保護(hù)心肌，改善心功能；環(huán)氧化酶-2是花生四烯酸代謝的最主要限速酶，又被成為炎癥誘導(dǎo)酶[1]。COX-2抑制劑能夠增加冠脈血流量，改善心肌供血，預(yù)防心肌細(xì)胞凋亡，減緩心室重構(gòu)等，具有保護(hù)心肌作用[2-3]。本實(shí)驗(yàn)探討急性心肌缺血再灌注大鼠模型血清中COX-2含量的變化，探討芪桂益脈靈對(duì)心肌缺血再灌注損傷心肌的保護(hù)作用和作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1動(dòng)物與分組健康雄性SD大鼠50只，體重200 g～250 g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為5組，每組10只，最終每組入組8只。空白組(每天清晨空腹灌服生理鹽水2 mL)、假手術(shù)組(每天清晨空腹灌服生理鹽水2 mL)、單純?nèi)毖俟嘧?IR)組(每天清晨空腹灌服生理鹽水2 mL)、芪桂益脈靈低劑量組(每天清晨空腹灌服芪桂益脈靈0.6 g/kg 2 mL)、芪桂益脈靈高劑量組(每天清晨空腹灌服芪桂益脈靈1.2 g/kg 2 mL)。

1.2主要試劑大鼠環(huán)氧化酶-2酶聯(lián)免疫分析試劑盒，北京誠(chéng)林生物科技有限公司。

1.3主要設(shè)備及儀器心電機(jī)(ECG-1150型，上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司)；小動(dòng)物呼吸機(jī)(DH-150浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠生產(chǎn))；電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；洗板機(jī)(318型，上海三科儀器有限公司)；電熱恒溫水槽(DK-8B型)上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(ELX808，美國(guó)蒙特州威諾斯基市高地園區(qū)Tigan街100號(hào))；低溫冰箱(日本三洋公司)；低溫離心機(jī)(日本三洋公司)。

1.4模型制備大鼠用20%烏拉坦(1 g/kg)腹腔麻醉。麻醉后心電監(jiān)測(cè)，氣管切開，行人工呼吸。暴露左頸總動(dòng)脈，插動(dòng)脈套管以檢測(cè)血壓。于胸骨左緣3、4肋間打開胸腔及心包膜，暴露心臟；在肺動(dòng)脈圓錐與左心耳下緣之間，經(jīng)左冠狀動(dòng)脈下淺層心肌穿一絲線，線的兩端穿進(jìn)一條直徑2 cm的聚乙烯塑料管，其末端用一小動(dòng)脈夾固定。通過打開和夾緊動(dòng)脈夾造成冠狀動(dòng)脈的阻斷與再通。連續(xù)記錄冠狀動(dòng)脈結(jié)扎前后及再通后Ⅱ?qū)碾妶D。觀察室速(VT)、室顫(VF)的起始時(shí)間和持續(xù)時(shí)間。空白組(開胸，不穿線，不結(jié)扎)；假手術(shù)組(開胸、只穿線但不結(jié)扎)；單純?nèi)毖俟嘧⒔M末次灌藥后1 h行左主冠狀動(dòng)脈結(jié)扎60 min，再灌注180 min；芪桂益脈靈高、低劑量組同單純?nèi)毖俟嘧⒔M。模型成功標(biāo)準(zhǔn)：心電示S-T段呈近似單線曲線拱背向上抬高； 并見反復(fù)灌注后出現(xiàn)心律失常。

1.5COX-2的檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，腹主動(dòng)脈采血5 mL，離心后取上層血清按照試劑盒說明測(cè)定指標(biāo)。

2結(jié)果

假手術(shù)組與空白組相比，大鼠血清COX-2含量有輕度增加 (P<0.05)，開胸穿線會(huì)造成血清中COX-2的輕度升高；冠脈結(jié)扎組與空白組對(duì)比，大鼠血清中的COX-2顯著升高(P<0.05)，心肌缺血再灌注損傷可使COX-2表達(dá)增加，也表明建模成功。冠脈結(jié)扎組與假手術(shù)組相比，血清中COX-2含量增加(P<0.05)，冠脈結(jié)扎能夠引起心肌組織中炎癥因子的釋放。灌藥組與單純?nèi)毖俟嘧⒔M相比，血清中COX-2的含量明顯降低(P<0.05 )，表明芪桂益脈靈能夠降低損傷心肌COX-2含量，對(duì)損傷心肌有保護(hù)作用。芪桂益脈靈高劑量組與低劑量組比較，血清中COX-2含量明顯下降(P<0.05)，高劑量組更能降低受損心肌COX-2的表達(dá)，對(duì)其保護(hù)作用更佳。詳見表1。

表1　芪桂益脈靈對(duì)急性心肌缺血再灌注

3討論

正常情況下，環(huán)氧化酶-2在大多數(shù)組織并不表達(dá)，主要在缺氧、NO、TNF、內(nèi)毒素等誘導(dǎo)下表達(dá)活躍[4-6]。有報(bào)道指出，COX-2參與了動(dòng)脈粥樣硬化病變的炎癥過程。釋放的細(xì)胞因子可以誘導(dǎo)COX-2，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的增強(qiáng)[7]。心肌缺血再灌注損傷可導(dǎo)致心肌細(xì)胞的壞死、心肌的炎癥以及心功能下降等病理改變，在缺血再灌注損傷時(shí)環(huán)氧化酶-2表達(dá)增加[8]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，假手術(shù)組COX-2與空白組有輕度升高，說明開胸穿線會(huì)造成血清中COX-2的輕度升高，但不結(jié)扎不能引起COX-2的明顯改變；冠脈結(jié)扎組能明顯引起血清COX-2的升高，造成心肌中炎癥因子的釋放，說明造模成功；芪桂益脈靈組COX-2的表達(dá)明顯降低，且高劑量組比低劑量組效果更加顯著。由此表明，芪桂益脈靈具有抑制急性心肌缺血再灌注損傷的作用，有效降低大鼠心肌細(xì)胞中炎癥因子COX-2的含量，保護(hù)損傷心肌，減輕炎癥反應(yīng)，這對(duì)于臨床上急性心肌缺血及心梗的發(fā)現(xiàn)與治療具有重要的指導(dǎo)意義。

芪桂益脈靈由黃芪、桂枝、三七、黨參等藥物組成，方中黃芪益氣補(bǔ)心，桂枝溫陽(yáng)通經(jīng)，二藥配合補(bǔ)心氣通心脈為主藥，黨參助黃芪補(bǔ)氣養(yǎng)心行氣活血作用，三七有活血化瘀養(yǎng)血行血通脈之功，該方通補(bǔ)兼施，標(biāo)本兼顧，恰中心肌缺血再灌注損傷的病機(jī)。

芪桂益脈靈能夠降低心肌缺血再灌注后大鼠血清中COX-2的含量，有效減輕炎癥，芪桂益脈靈在急性心肌缺血中具有心肌保護(hù)作用。

參考文獻(xiàn)：

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(本文編輯王雅潔)

Effect of Qigui Yimailing Decoction on Cox-2 in Rat Model with Acute Myocardial Ischemia-reperfusion Injury

Xu Jingyu，Zhao Long，Zhang Chaoyue

Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine，Harbin 150040，Heilongjiang，China

Abstract：Objective To explore the effect Qigui Yimailing decoction(QYD) on Cox-2 in rat myocardial tissue with acute myocardial ischemia reperfusion.MethodsFifty SD male rats were randomly divided into 5 groups and blank control group(n=10) after 7 days physiological saline irrigation，don’t do any processingthe sham operation group(n=10) after 7 days physiological saline irrigationtake the thoracotomy to exposeleft coronary artery of the rats，threading but do not make ligation，the rest of 30 rats were divided into pure ischemia reperfusion group，QYD low dose group and QYD high dose group，and acute myocardial infarction (AMI) models were caused by ligation of the left anterior descending branch of the coronary artery，after the success of the building，to the physiological saline，QYD (high and small dose，1.2 g/kg and 0.6 g/kg) respectively，whose irrigation served 7 days in a row during the morning.Abdominal aorta in pursuance of 5 mL，after centrifugation，get the upper serum，with double antibody sandwich method enzyme-linked immunoassay to determine the expression of cox-2.ResultsThe cox-2 of the pure ischemia reperfusion group were significantly higher than the blank control group’s and the sham operation group’s(P<0.05).Compared with pure ischemia reperfusion group，cox-2 overflow of QYD group significantly reduced in rats serum，and the effect of high dose group was more significant.Conclusion Cox-2 has a high level expression in acute myocardial ischemia reperfusion，which prompted inflammation is involved in acute myocardial ischemia reperfusion，QYD can decrease the cox-2 protein expression level and reduce the pure ischemia reperfusion group (I/R) myocardial inflammation，to protect myocardium.

Key words：myocardial ischemia-reperfusion；Qigui Yimailing decoction；COX-2；myocardial inflammation；rat

基金項(xiàng)目：黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.H201326)

通訊作者：張超越，E-mail：2834027714@qq.com

中圖分類號(hào)：R285.5R542.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2016.10.008

文章編號(hào)：1672-1349(2016)10-1083-03

Corresponding Author：Zhang Chaoyue

(收稿日期：2015-08-03)