火炭母乙醇提取物的抗氧化活性及其穩定性研究

王呈文，余文森

(1.汕頭職業技術學院自然科學系，廣東汕頭 515078；2.華港集裝箱分公司，廣東汕頭 515078)

火炭母乙醇提取物的抗氧化活性及其穩定性研究

王呈文1，余文森2

(1.汕頭職業技術學院自然科學系，廣東汕頭 515078；2.華港集裝箱分公司，廣東汕頭 515078)

摘要[目的]研究火炭母95%乙醇提取物的抗氧化活性及其穩定性。[方法]采用室溫浸提法對火炭母中有效成分進行提取，考察其對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)、羥基自由基(OH·)、總抗氧化能力(ABTS法)、超氧陰離子(O2-·)的清除作用，并與VC進行比較，以評價其抗氧化活性以及pH和溫度對提取物穩定性的影響。 [結果]火炭母95%乙醇提取物對DPPH·的清除率可達92.5%。提取物對DPPH·、OH·、ABTS+·、O2-·的半數抑制濃度(IC50)分別為32.8、90.8、110.8、277.1 μg/mL，清除能力均比VC強，且提取物還具有較好的耐熱性和耐弱酸弱堿性。[結論]火炭母95%乙醇提取物具有較強的抗氧化活性及良好的穩定性。

關鍵詞火炭母；抗氧化；穩定性；乙醇提取物

火炭母是蓼科蓼屬植物火炭母(Polygonum ChinenseLinn.)全草，別名翅地利、火炭星、火炭藤、白飯藤等，廣泛分布于我國南方地區。火炭母是常用的中草藥之一，也廣泛應用在藥膳中[1-2]。由于火炭母應用的廣泛性，越來越多國內外學者對火炭母的化學成分和藥理作用進行研究[3-6]。火炭母的主要化學成分之一是黃酮類，這類化合物具有很好的抗氧化性[3-6]。為了增加人們對火炭母的認識，開發其潛在的醫療保健功能，進一步更有效地利用火炭母，該研究采用室溫浸提法對火炭母中有效成分進行提取，考察其對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)、羥基自由基(OH·)、總抗氧化能力(ABTS法)、超氧陰離子(O2-·)的清除作用，并與VC進行比較，評價火炭母乙醇提取物的抗氧化活性以及pH和溫度對提取物抗氧化穩定性的影響。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器。BSA224S-CW型電子天平(北京賽多利斯有限公司)；TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計(普析通用儀器)；旋轉蒸發儀(N-1100型，東京理化器械株式會社)。

1.1.2試劑與藥品。DPPH(美國Sigma-Aldrich公司)；總抗氧化能力檢測試劑盒(ABTS法)(碧云天生物技術)；試驗中所需的化學試劑均為分析純。

1.1.3樣品。火炭母全草購買于廣東省汕頭市藥材市場。晾曬，備用。

1.2方法

1.2.1抗氧化性測定。

1.2.1.1 抗氧化物質的提取。稱取火炭母粉末100.0g，用95%乙醇室溫下浸泡7d，在60 ℃減壓濃縮至棕色浸膏，減壓真空干燥，用無水乙醇溶解1.00g提取物，配制成100mg/mL溶液，待用。

1.2.1.2DPPH·清除率測定。參照文獻[7-8]的方法，分別配制濃度為20、40、60、80、100、150、200μg/mL火炭母乙醇提取液，在518nm的最大吸收波長處測定其吸光度，考察其對DPPH·的清除作用。

1.2.1.3OH·清除率測定。參照文獻[9-10]的方法，分別配制濃度為20、40、60、80、100、150、200μg/mL火炭母乙醇提取液，在538nm的吸收波長處測定其吸光度，考察其對OH·清除作用。

1.2.1.4ABTS+·測定。參照文獻[11-12]的方法以及產品說明書，分別配制濃度為20、40、60、80、100、150、200μg/mL火炭母乙醇提取液，在734nm的吸收波長處測定其吸光度，考察其對ABTS+·清除作用。

1.2.1.5O2-·清除率測定。參照文獻[13-14]的方法，配制濃度為20、40、60、80、100、150、200、300μg/mL火炭母乙醇提取液，在320nm的特征吸收波長處，每隔30s(3min內)測定一次，計算得出O2-·的清除率。

1.2.2抗氧化穩定性測定。

1.2.2.1pH對火炭母乙醇提取物的抗氧化穩定性影響。分別取濃度為40μg/mL的火炭母乙醇提取液，用稀NaOH溶液和稀HCl溶液將提取液的pH分別調節為2.0、4.0、6.0、8.0、10.0，室溫下靜置4h，用“1.2.1.2”的方法對其進行測定[15-16]，以考察pH對火炭母乙醇提取物的抗氧化穩定性影響。1.2.2.2溫度對火炭母乙醇提取物的抗氧化穩定性影響。分別取濃度為40μg/mL的火炭母乙醇提取液，分別放置在溫度為-15、0、20、35、50、80 ℃的恒溫條件下靜置4h，用“1.2.1.2”的方法對其進行測定[15-16]，以考察溫度對火炭母乙醇提取物的抗氧化穩定性影響。

2結果與分析

2.1抗氧化活性

2.1.1火炭母乙醇提取物對DPPH·的清除能力。由表1可知，火炭母乙醇提取物對清除DPPH·有一定的量效關系，其IC50=32.8μg/mL，同時用VC作為陽性對比，VC的IC50=108.4μg/mL，可見火炭母乙醇提取物對DPPH·有較好的清除作用，其清除率達92.5%。

2.1.2火炭母乙醇提取物對OH·的清除能力。由表1可知，火炭母乙醇提取物對清除OH·有一定的量效關系，其IC50=90.8μg/mL，同時用VC作為陽性對比，VC的IC50=189.1μg/mL，可見火炭母乙醇提取物對OH·有較好的清除作用。

表1火炭母乙醇提取物清除DPPH·、OH·、ABTS+·、O2-·的能力

Table1ScavengingactivitiesofethanolextractsfromP. chinensetoDPPH·,OH·,ABTS+·andO2-·

%

2.1.3火炭母乙醇提取物對ABTS+·的清除能力。由表1見可知，火炭母乙醇提取物對清除ABTS+·有一定的量效關系，其IC50=110.8μg/mL，同時用VC作為陽性對比，VC的IC50=183.9μg/mL，可見火炭母乙醇提取物對ABTS+·有較好的清除作用。

2.1.4火炭母乙醇提取物對O2-·的清除能力。從表1可看出，火炭母乙醇提取物對清除O2-·有一定的量效關系，其IC50=277.1μg/mL，同時用VC作為陽性對比，VC的IC50=273.2μg/mL，可見火炭母乙醇提取物對O2-·有一定的清除作用。

2.2抗氧化穩定性

2.2.1pH對火炭母乙醇提取物抗氧化穩定性的影響。由表2可知，火炭母乙醇提取物在弱酸弱堿性條件下活性保持率較高。

2.2.2溫度對火炭母乙醇提取物抗氧化穩定性的影響。由表3可知，當溫度為-15～80 ℃時，火炭母乙醇提取物在不同的溫度條件下活性保持率較高，抗氧化活性成分較穩定。當體系溫度上升至80 ℃時，提取物清除DPPH·的能力下降，活性保持率為88.95%，由此可知，火炭母乙醇提取物有較好的耐熱性。

表2pH對火炭母乙醇提取物清除DPPH·自由基的影響

Table2EffectsofpHonscavengingrateofethanolextractsfromP. chinensetoDPPH·

pH清除率Scavengingrate∥%活性保持率Activityretentionrate∥%2.042.872.794.049.283.676.056.796.437.4(原液Stocksolution)58.8100.008.057.197.1110.053.390.65

表3溫度對火炭母乙醇提取物清除DPPH·自由基的影響

Table3EffectsoftemperatureonscavengingrateofethanolextractsfromP. chinensetoDPPH·

溫度Temperature℃清除率Scavengingrate∥%活性保持率Activityretentionrate∥%-1558.499.32058.399.152058.499.3225(原液Stocksolution)58.8100.003558.399.155058.098.648052.388.95

3結論

該研究采用室溫浸提法對火炭母中有效成分進行提取，考察其對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)、羥基自由基(OH·)、總抗氧化能力(ABTS法)、超氧陰離子(O2-·)的清除作用，并與VC進行比較，評價火炭母乙醇提取物的抗氧化活性以及pH和溫度對提取物抗氧化穩定性的影響。結果表明，火炭母乙醇提取物在200μg/mL時對DPPH·的清除率可達92.50%，提取物對DPPH·、OH·、ABTS+·、O2-·的半數抑制濃度(IC50)分別為32.8、90.8、110.8、277.1μg/mL，清除能力均比VC強，說明火炭母乙醇提取物有較強的抗氧化活性；且火炭母乙醇提取物在pH為4～10和溫度在-15～80 ℃時，活性保持率在80%以上，表明火炭母乙醇提取物具有較好的熱穩定性和耐弱酸弱堿性。

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AntioxidantActivityandStabilityofEthanolExtractsfromPolygonum chinenseLinn.

WANGCheng-wen,YUWen-sen2

(DepartmentofNaturalSciences,ShantouPolytechnic,Shantou,Guangdong515078; 2.HuagangContainerBranchCompany,Shantou,Guangdong515078)

Abstract[Objective] To research the antioxidant activity and stability of 95% ethanol extracts from Polygonum chinense Linn. [Method] The effective components were extracted from P. chinense at room temperature by extraction method. Its scavenging effects on DPPH·,OH·,ABTS method and O2-· were researched. Vc was compared in order to evaluate the antioxidant activity. Effects of pH and temperature on the extracts stability were studied. [Result] Scavenging rate of 95% ethanol extracts to DPPH· reached 92.5%. The IC50of extracts to DPPH·,OH·,ABTS+· and O2-· were 32.8,90.8,110.8 and 277.1 μg/mL,respectively. Their scavenging abilities were all stronger than VC; and extracts had relatively better heat resistance,weak acid and alkali resistance. [Conclusion] 95% ethanol extracts from P. chinense have relatively strong antioxidant activity and good stability.

Key wordsPolygonum chinense Linn.; Antioxidant; Stability; Ethanol extracts

基金項目汕頭職業技術學院科研課題(SZK2014Y22)。

作者簡介王呈文(1984- )，女，福建福州人，助理實驗師，碩士，從事天然產物化學研究。

收稿日期2016-04-04

中圖分類號S 567

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)12-139-02