HPLC法測定糠酸莫米松乳膏中的有關物質

曹玉明

(安徽新和成皖南藥業有限公司，安徽 宣城　242000)

HPLC法測定糠酸莫米松乳膏中的有關物質

曹玉明

(安徽新和成皖南藥業有限公司，安徽 宣城242000)

摘要：目的建立糠酸莫米松乳膏(艾洛松)中有關物質的檢測方法。方法采用HPLC法對艾洛松中的有關物質進行測定。以Amethyst C18-P(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱為固定相；乙腈-水(53∶47)為流動相；流速為1 mL·min-1；檢測波長為254 nm；進樣量為20 μL。結果各單個雜質不超過1.0%,總雜質不超過2.0%。該方法對5個批次糠酸莫米松乳膏中的有關物質進行了測定，其限度均為單個雜質不超過1.0%,總雜質不超過2.0%。結論該方法準確可靠，可作為糠酸莫米松乳膏(艾洛松)中有關物質的測定方法。

關鍵詞：糠酸莫米松;色譜法,高壓液相

糠酸莫米松(商品名：艾洛松 )是美國MERCK SHARP & DOHME公司開發的一種高效糖皮質激素藥，該藥于1987年5月6日獲得美國FDA批準上市，劑型為乳膏劑，規格0.1%，用于濕疹、神經性皮炎、異位性皮炎及皮膚瘙癢癥[1-7]。糠酸莫米松乳膏于2007年4月26日經國家食品藥品監督管理局批準進口。目前在國內有7家藥企仿制生產上市，其執行標準[8]為國家藥品標準WS1-(X-025)-2004Z，該標準未規定有關物質檢查項。歐洲藥典7.0版收載的該藥物原料藥中含有結構類似丙酸倍氯米松的九種有關物質[9](主要是工藝雜質、氧化降解或水解雜質)，并規定了限度范圍，美國藥典34版Mometasone Furoate Cream中規定了上述六種有關物質限度范圍[10]。因此，通過對糠酸莫米松乳膏中有關物質測定方法的研究[11-12],完善其質量標準，有效控制該仿制藥生產工藝過程所引入的工藝雜質或降解產物，保證該仿制藥與原研藥的質量一致性，提高其臨床療效。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1100高效液相色譜儀，UV檢測器，Chemstation色譜工作站；METTLER TOLEDO電子天平。

1.2試藥糠酸莫米松對照品(美國藥典委，批號:H0E009)，丙酸倍氯米松對照品(中國食品藥品檢定研究院 批號∶100119-200603)；糠酸莫米松乳膏(共5批，批號：121101、121102、121103、11CNGFA046、11CNGFA042)；輔料：丙二醇(由南京威爾化工有限公司提供，批號：121002)單、雙硬脂酸甘油酯(由湖南爾康制藥有限公司提供，批號：120905)；乙腈為色譜純；水由Milli-Q系統制備。

2方法與結果

2.1色譜條件與系統適用性試驗采用Amethyst C18-P(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱；流動相：乙腈-水(53∶47)；流速：1 mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長為254 nm；進樣量為20 μL。糠酸莫米松保留時間為(17±1.0)min、丙酸倍氯米松保留時間為(22±1.0)min，糠酸莫米松峰與丙酸倍氯米松峰之間分離度應不小于6；理論板數按糠酸莫米松對照品色譜峰計算不低于1 000。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液取糠酸莫米松對照品與丙酸倍氯米松對照品適量，精密稱定，用乙腈溶解并定容，制成每1 mL中含0.2 mg的糠酸莫米松和0.6 mg的丙酸倍氯米松對照品儲備液。再取上述儲備液適量，加乙腈稀釋成含糠酸莫米松0.05 mg和丙酸倍氯米松0.015 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液取艾洛松樣品，精密稱定，置10 mL量瓶中，加乙腈適量，置80 ℃水浴加熱使融化，強力振搖2 min，放冷，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，置冰浴冷卻1 h，離心，取上清液作為供試品溶液。

2.2.3對照溶液精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

2.2.4陰性對照溶液取其他輔料，按處方制備不含糠酸莫米松的陰性樣品，依“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液，作陰性干擾性試驗和專屬性考察。

2.3測定法精密量取對照品溶液與供試品溶液、對照溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。對照品溶液糠酸莫米松保留時間為(17±1.0)min、丙酸倍氯米松保留時間為(22±1.0)min，糠酸莫米松峰與丙酸倍氯米松峰之間分離度應不小于6，否則調整流動相乙腈濃度。供試品溶液、對照溶液色譜圖至主峰保留時間2倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，扣除輔料峰，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面積的2倍(2.0%)。低于對照峰面積0.1倍的峰忽略不計。供試品溶液、對照溶液圖譜見圖1。各雜質峰相對保留時間見表1。

2.4方法學考察

2.4.1專屬性考察取供試品溶液、對照溶液以及陰性對照溶液，按下列條件進行破壞性試驗后進樣測定，記錄峰面積，結果見表2。各條件適度破壞后，主峰與雜質峰分離度均達基線分離，各雜質峰在此條件下均有一定的響應值。各陰性按相同方式破壞后，各降解產物峰在主峰位置上無任何雜質峰。說明本法的專屬性良好。

壞條件：干熱:置200℃油浴鍋放置5 min；強酸:加稀鹽酸0.4 mL，置沸水浴放置4 h后，加氫氧化鈉試液0.8 mL中和；強堿:加氫氧化鈉試液0.4 mL，置沸水浴放置2 min后，加稀鹽酸0.2 mL中和；氧化:加30%過氧化氫0.4 mL，置沸水浴放置2 h；金屬:加新制0.1 mol·L-1氯化亞鐵中性混懸液(氫氧化鈉試液調pH值至7.0)0.4 mL，置116 ℃熱壓4 h；光照:貼于40 W冷光燈管(照度5萬Lx)10 d；濕熱:加水5 mL，置116 ℃熱壓4 h。

2.4.2檢測限試驗取供試品溶液，用乙腈定量稀釋100倍，再逐級稀釋制成不同濃度的溶液。取最低濃度的溶液，按照“2.1”項下色譜條件，進樣分析，記錄基線最大噪音峰面積與主峰面積。以信噪比3∶1的供試品溶液濃度作為儀器檢測限，測定其檢測限為0.36 ng。

2.4.3定量限試驗取供試品溶液，用乙腈定量稀釋100倍，再逐級稀釋制成不同濃度的溶液，取最低濃度的溶液，按照“2.1”項下色譜條件，進樣分析，記錄基線最大噪音峰面積與主峰面積。以信噪比10∶1的供試品溶液濃度作為儀器定量限，測定其定量限為1.44 ng。

2.4.4重復性試驗取艾洛松(批號：121101)，按照“2.2.2”項下方法制備6份供試品溶液，精密量取供試品溶液適量，按照“2.2.3”項下方法制成對照溶液。按照“2.1”項下色譜條件，進樣分析，計算RSD值，結果見表3。試驗結果說明該方法重復性良好。

A對照品溶液

B供試品溶液

C對照溶液

圖1　各溶液HPLC圖

注：各雜質名稱和結構參考歐洲藥典7.0版糠酸莫米松原料藥標準收載項以及各雜質對照品溶液、樣品強制降解試驗研究結果確定，目的進行本品的雜質定量分析，而不作定性考察。以樣品中各雜質峰的相應響應值作對比研究。

表2　專屬性試驗結果

表3　重復性試驗結果/%

注：單個雜質= 單個雜質峰面積÷對照峰面積×1%；總雜質=(總峰面積—主峰面積)÷對照峰面積×1%。

2.4.5溶液穩定性試驗取同一份供試品溶液和對照溶液，室溫自然光條件下放置，在0～24 h內，按照“2.1”項下色譜條件，分別于0、1、2、4、8、24 h進樣測定，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。計算RSD值，結果見表4。結果表明，供試品溶液在24 h時內不穩定，最好臨用新制。

表4　溶液穩定性試驗結果

2.4.6耐用性試驗取同一份供試品溶液和對照溶液，按照“2.1”項下色譜條件，分別在三根不同型號、品牌色譜柱上進樣分析。色譜圖見圖2。結果表明，本法測定糠酸莫米松乳膏有關物質適合用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(柱長250 mm，內徑4.6 mm，填料粒徑5 μm)。

2.4.7陰性干擾性試驗取糠酸莫米松原料、供試品溶液、對照溶液以及陰性對照溶液，按照“2.1”項下色譜條件，進樣分析，色譜圖見圖3。在陰性對照溶液色譜圖中與糠酸莫米松原料及供試品溶液相應保留時間上無任何色譜峰，結果表明，該方法檢測本處方樣品陰性無干擾。

2.5樣品測定取艾洛松樣品，按“2.2.2和2.2.3”項下方法制備供試品液和對照液，照“2.1”項下的色譜條件檢測，結果見表5。

Amethyst C18-P Agilent zorbax ODS Amethyst C18-H

圖2不同型號、品牌HPLC色譜圖

陰性對照溶液 原料 供試品溶液

圖3　陰性干擾性試驗HPLC圖

3討論

本文中所制的乳膏樣品原料藥均為國產原料(浙江仙琚制藥公司生產)且國內仿制制劑生產廠家也大多采用此原料藥。由于糠酸莫米松原料自身所含有的工藝雜質或氧化降解雜質較多以及在制劑生產工藝過程中不可避免地引入其他降解產物，如乳膏劑大多是W/O型，溶解度較小的原料大多采用二甲基亞砜、丙二醇水浴助溶，以提高原料在制劑中的分散均勻度。水溶一般在80～85℃之間，糠酸莫米松對熱、濕均較不穩定，有降解產物H產生。同時藥物強制降解破壞性試驗結果也表明有降解產物，且在濕熱條件下出現了相對主峰保留時間相同的水解產物H。因此，有必要對糠酸莫米松乳膏中九種有關物質的測定法進行研究，以控制制劑中相關物質限度，保證其安全有效。

歐洲藥典7.0版收載的該原料藥和美國藥典34版糠酸莫米松乳膏中有關物質的限度測定均采用高效液相色譜法，色譜條件相似，均以乙腈-水(50∶50)為流動相，以十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)為固定相，檢測波長為254 nm，不同的是校正因子的內標物質不同，分別是丙酸倍氯米松與鄰苯二甲酸二乙酯。本文結合制劑工藝采用乙腈-水(53∶47)為流動相，以丙酸倍氯米松為內標物，可以有效提高糠酸莫米松溶解性能，使有關物質與主峰有效分離，并進行柱效評價。

參考文獻

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Determination of the related substances in Mometasone Furoate Cream by HPLC

Cao Yu-ming

(AnhuiNHUPharmaceuticalCom.,Ltd,Xuancheng,Anhui242000,China)

Abstract:ObjectiveTo develop a method for the related substances in mometasone furoate cream(Eloson).MethodsHPLC was adopted for the limits determination of the related substances.An Amethyst C18-P column(250 mm × 4.6 mm,5 μm)was used as the stationary phase,with a mobile phase of acetonitrile-water solution(53∶47),the flow rate was 1 mL·min-1,the detection wavelength was 254 nm and the injection volume was 20 μL.ResultsFor each impurity was not more than 1.0%,the total was not more than 2.0%.Five batches of Eloson were analyzed under the established method,all of results were that for each impurity was not more than 1.0% and the total was not more than 2.0%.ConclusionThe developed method is accurate and reliable,which could be used for the limit control of the related substances in Eloson.

Key words:Mometasone Furoate Cream;Chromatography,High Pressure Liquid

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.05.015

(收稿日期：2016-01-26，修回日期：2016-03-11)