半乳糖修飾苦參素脂質(zhì)體制備工藝研究

李艷輝　劉衛(wèi)平

摘 要 目的：考察半乳糖修飾苦參素脂質(zhì)體的處方和制備工藝。方法：采用逆相蒸發(fā)法制備半乳糖修飾苦參素脂質(zhì)體，以包封率為主要指標(biāo)，均勻設(shè)計(jì)法對(duì)不同制備條件進(jìn)行考察，確定最佳工藝。結(jié)果：逆相蒸發(fā)法最佳工藝制備的脂質(zhì)體在電鏡下呈類(lèi)圓形，粒徑分布均勻，藥物包封率為35.67%。

關(guān)鍵詞 苦參素 脂質(zhì)體 逆相蒸發(fā)法 包封率

中圖分類(lèi)號(hào)：R735.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

苦參素是從中藥苦參中提取，分離，純化制得的生物堿。它有多方面的藥理作用和功效，臨床上主要用于治療各種原因所致的急慢性肝損害等病癥。根據(jù)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞膜上存在能夠?qū)Ｒ恍宰R(shí)別含有半乳糖基或乳糖基化合物的去唾液糖蛋白受體，本研究采用逆相蒸發(fā)法制備半乳糖修飾苦參素脂質(zhì)體（LML），達(dá)到主動(dòng)靶向肝臟的目的。

1儀器與材料

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；8200HP型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；SHZ-3型循環(huán)水真空泵（河南省鞏義市英峪儀器廠）；82—5B型磁力加熱攪拌器（南通科學(xué)儀器廠）；

苦參素（OXY，寧夏紫荊花藥業(yè)公司生產(chǎn)）；自制乳糖酰磷脂酰乙醇胺（Lac-PE）；卵磷脂（進(jìn)口分裝，上海源聚生物科技有限公司）；膽固醇（上海源聚生物科技有限公司）；乙腈（色譜純），其它試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1 Lac-PE 的合成和純化

將磷脂酰乙醇50mg溶解于5ml2：1的氯仿-甲醇中，然后加入10ml0.2 mol/l、PH 9.0的碳酸氫鈉緩沖液，在40℃條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去有機(jī)溶劑，加入乳糖500mg及硼氫化鈉250mg徹底混勻，在25℃恒溫箱中溫400 h。將反應(yīng)液裝入透析袋，磁力攪拌下室溫透析3d。應(yīng)用硅酸柱純化，洗脫液為氯仿-甲醇的梯度配比液（9：1、7：3、5：5、3：7）最后用甲醇洗脫。收集3：7所得洗脫液，即為糖脂（Lac-PE）溶液，經(jīng)冰凍干燥得白色粉末，低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2逆相蒸發(fā)法制備LML

取卵磷脂和膽固醇（重量比為4：1）外加10%mol的 Lac-PE，用乙醚溶解，按有機(jī)溶媒：水相為4：1的比例加入藥液，水浴超聲得W/O型乳劑，減壓除去乙醚，達(dá)到膠態(tài)后加入適量緩沖液，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)直至形成均勻的混懸液，即得。

2.3均勻設(shè)計(jì)優(yōu)化制備工藝

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，以磷脂/膽固醇質(zhì)量比（X1）、乙醚與藥物溶液的體積比（X2）、超聲時(shí)間（X3）、超聲波功率（X4）和藥物量（X5）為主要考察因素，按均勻設(shè)計(jì)U13（1312）表試驗(yàn)。以包封率（Y）為評(píng)價(jià)指標(biāo)， 經(jīng)綜合考慮，確定制備氧化苦參堿脂質(zhì)體的最佳條件：X1=4：1，X2=16：4，X3=5min，X4=3（250W），X5=10mg/mL。

2.4優(yōu)化條件驗(yàn)證

2.4.1包封率測(cè)定

按優(yōu)化處方制備3批LML，測(cè)定包封率，結(jié)果平均包封率為35.67%，RSD為3.51%（n=3）。

2.4.2形態(tài)觀察

取優(yōu)化工藝條件下制備的脂質(zhì)體混懸液，稀釋一定倍數(shù)后滴至專(zhuān)用銅網(wǎng)上，用1.5%磷鎢酸染色，自然晾干，于透射電子顯微鏡下觀察到，氧化苦參堿脂質(zhì)體呈類(lèi)圓形，粒度分布窄，均勻圓整，分散性好。

2.4.3粒徑分布

將制備的脂質(zhì)體混懸液稀釋至適當(dāng)倍數(shù)，用激光粒度分布儀測(cè)定脂質(zhì)體的粒徑大小及分布，氧化苦參堿脂質(zhì)體的平均粒徑278.6nm，粒徑分布窄，粒徑范圍與肝靶向粒徑要求非常吻合。

2.4.4穩(wěn)定性考察

將制備的脂質(zhì)體分別于室溫（25℃左右）、冷藏條件（4℃左右）下放置4個(gè)月，觀察脂質(zhì)體外觀形態(tài)、分散性及包封率變化。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在冷藏條件時(shí)，脂質(zhì)體在2個(gè)月內(nèi)外觀無(wú)變化，在三個(gè)月時(shí)有分層現(xiàn)象發(fā)生，然而輕輕振搖就可基本恢復(fù)到初始膠體狀態(tài)；而在室溫條件下貯存時(shí)，脂質(zhì)體在2個(gè)月內(nèi)便出現(xiàn)不可逆性沉淀現(xiàn)象，顆粒變大，包封率變化結(jié)果見(jiàn)表1。

結(jié)果表明，在室溫條件下放置脂質(zhì)體不穩(wěn)定，出現(xiàn)沉淀，而在冷藏條件下，粒徑有所增加，但仍符合要求，說(shuō)明脂質(zhì)體需在冷藏條件下保存。

3討論

乳糖脂-磷脂比對(duì)脂質(zhì)體的包封率影響不大，而且對(duì)脂質(zhì)體的大小以及外觀、顏色、穩(wěn)定性等影響也不大，原因可能是乳糖脂作為兩親分子插入到脂質(zhì)體雙分子層之間的空隙，疏水性部分與脂質(zhì)體內(nèi)層疏水性部分結(jié)合，外部親水性頭部與脂質(zhì)體外部親水性部分結(jié)合，增加了脂質(zhì)體雙分子膜的穩(wěn)定性，同時(shí)使得脂質(zhì)體外膜具有更佳的親水性。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃贊松，周喜漢.苦參素藥理和抗腫瘤作用研究[J].醫(yī)學(xué)綜述，2009，15（11）： 1701.

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