半乳糖修飾苦參素脂質體制備工藝研究

李艷輝　劉衛平

摘 要 目的：考察半乳糖修飾苦參素脂質體的處方和制備工藝。方法：采用逆相蒸發法制備半乳糖修飾苦參素脂質體，以包封率為主要指標，均勻設計法對不同制備條件進行考察，確定最佳工藝。結果：逆相蒸發法最佳工藝制備的脂質體在電鏡下呈類圓形，粒徑分布均勻，藥物包封率為35.67%。

關鍵詞 苦參素 脂質體 逆相蒸發法 包封率

中圖分類號：R735.7 文獻標識碼：A

苦參素是從中藥苦參中提取，分離，純化制得的生物堿。它有多方面的藥理作用和功效，臨床上主要用于治療各種原因所致的急慢性肝損害等病癥。根據肝實質細胞膜上存在能夠專一性識別含有半乳糖基或乳糖基化合物的去唾液糖蛋白受體，本研究采用逆相蒸發法制備半乳糖修飾苦參素脂質體（LML），達到主動靶向肝臟的目的。

1儀器與材料

旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；8200HP型超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）；SHZ-3型循環水真空泵（河南省鞏義市英峪儀器廠）；82—5B型磁力加熱攪拌器（南通科學儀器廠）；

苦參素（OXY，寧夏紫荊花藥業公司生產）；自制乳糖酰磷脂酰乙醇胺（Lac-PE）；卵磷脂（進口分裝，上海源聚生物科技有限公司）；膽固醇（上海源聚生物科技有限公司）；乙腈（色譜純），其它試劑為分析純。

2方法與結果

2.1 Lac-PE 的合成和純化

將磷脂酰乙醇50mg溶解于5ml2：1的氯仿-甲醇中，然后加入10ml0.2 mol/l、PH 9.0的碳酸氫鈉緩沖液，在40℃條件下用旋轉蒸發器除去有機溶劑，加入乳糖500mg及硼氫化鈉250mg徹底混勻，在25℃恒溫箱中溫400 h。將反應液裝入透析袋，磁力攪拌下室溫透析3d。應用硅酸柱純化，洗脫液為氯仿-甲醇的梯度配比液（9：1、7：3、5：5、3：7）最后用甲醇洗脫。收集3：7所得洗脫液，即為糖脂（Lac-PE）溶液，經冰凍干燥得白色粉末，低溫冰箱保存備用。

2.2逆相蒸發法制備LML

取卵磷脂和膽固醇（重量比為4：1）外加10%mol的 Lac-PE，用乙醚溶解，按有機溶媒：水相為4：1的比例加入藥液，水浴超聲得W/O型乳劑，減壓除去乙醚，達到膠態后加入適量緩沖液，繼續旋轉直至形成均勻的混懸液，即得。

2.3均勻設計優化制備工藝

根據預試驗結果，以磷脂/膽固醇質量比（X1）、乙醚與藥物溶液的體積比（X2）、超聲時間（X3）、超聲波功率（X4）和藥物量（X5）為主要考察因素，按均勻設計U13（1312）表試驗。以包封率（Y）為評價指標， 經綜合考慮，確定制備氧化苦參堿脂質體的最佳條件：X1=4：1，X2=16：4，X3=5min，X4=3（250W），X5=10mg/mL。

2.4優化條件驗證

2.4.1包封率測定

按優化處方制備3批LML，測定包封率，結果平均包封率為35.67%，RSD為3.51%（n=3）。

2.4.2形態觀察

取優化工藝條件下制備的脂質體混懸液，稀釋一定倍數后滴至專用銅網上，用1.5%磷鎢酸染色，自然晾干，于透射電子顯微鏡下觀察到，氧化苦參堿脂質體呈類圓形，粒度分布窄，均勻圓整，分散性好。

2.4.3粒徑分布

將制備的脂質體混懸液稀釋至適當倍數，用激光粒度分布儀測定脂質體的粒徑大小及分布，氧化苦參堿脂質體的平均粒徑278.6nm，粒徑分布窄，粒徑范圍與肝靶向粒徑要求非常吻合。

2.4.4穩定性考察

將制備的脂質體分別于室溫（25℃左右）、冷藏條件（4℃左右）下放置4個月，觀察脂質體外觀形態、分散性及包封率變化。

結果發現，在冷藏條件時，脂質體在2個月內外觀無變化，在三個月時有分層現象發生，然而輕輕振搖就可基本恢復到初始膠體狀態；而在室溫條件下貯存時，脂質體在2個月內便出現不可逆性沉淀現象，顆粒變大，包封率變化結果見表1。

結果表明，在室溫條件下放置脂質體不穩定，出現沉淀，而在冷藏條件下，粒徑有所增加，但仍符合要求，說明脂質體需在冷藏條件下保存。

3討論

乳糖脂-磷脂比對脂質體的包封率影響不大，而且對脂質體的大小以及外觀、顏色、穩定性等影響也不大，原因可能是乳糖脂作為兩親分子插入到脂質體雙分子層之間的空隙，疏水性部分與脂質體內層疏水性部分結合，外部親水性頭部與脂質體外部親水性部分結合，增加了脂質體雙分子膜的穩定性，同時使得脂質體外膜具有更佳的親水性。

參考文獻

[1] 黃贊松，周喜漢.苦參素藥理和抗腫瘤作用研究[J].醫學綜述，2009，15（11）： 1701.

[2] Hisashi Yoshioka，Teesushi Ohmura，Mariko Hasegawa，et al.Synthesis of Galactose Derivatives That Render Lectin-induced Ag-glutinating Ability to Liposomes.Journal of Pharmaceutical Sci-ences，1993，82（3）：273-275.