2 638例細胞DNA定量分析法篩查宮頸癌的意義

劉國生　王曉亮　鄭建瓊　曾守逵　周維

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2 638例細胞DNA定量分析法篩查宮頸癌的意義

劉國生王曉亮鄭建瓊曾守逵周維

［摘要］目的通過DNA定量分析法篩查恩施地區社區婦女宮頸病變的發病情況，明確其在篩查及預防宮頸癌變的作用。方法對2013年12月至2014年11月在湖北民族學院附屬民大醫院自愿免費參加宮頸疾病普查的恩施州社區婦女，采用宮頸刮片采集宮頸脫落細胞樣本進行分析。結果2 638例普查者中，發現異倍體細胞和異倍體細胞峰以及細胞異常增生共131例，占4.97%，經病理確診為宮頸上皮內瘤樣病變（cervical intraepithelial neoplasias，CIN）45例，細胞DNA定量分析陽性患病率34.35%。結論采用細胞DNA定量分析法能及早發現宮頸癌前病變，通過婦女宮頸癌及癌前病變篩查可提高宮頸病變檢出率。

［關鍵詞］細胞DNA定量分析；篩查；宮頸病變

作者單位：湖北民族學院附屬民大醫院醫學檢驗科，湖北，恩施445000

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，發病率僅次于乳腺癌［1］。而在我國，其發生率和病死率明顯高于西方發達國家，究其原因，與缺乏對適齡婦女宮頸癌前病變的早期篩查和及時正確的進行醫學干預有著十分密切的關系。原位癌的高發年齡約為30歲～35歲，浸潤癌約為45歲～55歲，近年來宮頸癌發病有年輕化的趨勢［2］。大量的研究與實踐表明，嚴重危害婦女健康的宮頸癌，是唯一一種可采用醫學干預手段使其發病率和死亡率下降的人類惡性腫瘤［1-2］。隨著宮頸癌的細胞學檢測技術和方法不斷提高與發展，宮頸癌檢出率有明顯提高。DNA異倍體細胞的改變，是診斷宮頸癌及癌前病變的一個客觀、早期、敏感、特異性的指標［2］。伴隨著近些年來宮頸細胞學篩查的普遍使用，宮頸癌和癌前病變的二級預防早發現、早治療落實得越來越好，宮頸癌的發病率和死亡率已經明顯降低［3］。為探討細胞DNA含量及特征分析對篩查宮頸病變的價值，本研究選擇2 638例行宮頸癌篩查的受試者，行細胞DNA倍體分析，并對異常者進行病理學檢測，以期及早發現宮頸癌前病變，提高檢出率?，F將結果報告如下：

1　材料與方法

1.1一般資料

1.1.1研究對象

選擇恩施州2013年12月至2014年11月自愿免費來湖北民族學院附屬民大醫院參加宮頸疾病篩查的社區婦女2 638例，年齡20歲～83歲，平均年齡44歲。其中30歲以下169例，平均年齡28.5歲；31歲～40歲854例，平均年齡35.5歲；41歲～50歲918例，平均年齡46.5歲；51歲～60歲629例，平均年齡54歲；61歲及以上者68例，平均年齡63.5歲。

1.1.2儀器與試劑

武漢蘭丁醫學高科技有限公司提供的全自動細胞DNA定量分析儀（蘭丁細胞CT）、全自動細胞圖象分析系統、宮頸刷和配套試劑富爾根（Feul?gen）DNA染液。

1.2研究方法

1.2.1標本采集方法

采用宮頸刷采集宮頸脫落細胞樣本，將樣本浸泡在樣本收集瓶固定液內，旋緊瓶蓋后震蕩搖晃，貼上條碼標簽，于常溫及時送醫學實驗室。

1.2.2制片與染色

玻片經粘附劑處理，取沉渣加懸浮液震蕩混勻，混勻后滴片，制片后用富爾根（Feulgen）DNA染色，然后上機做細胞DNA定量分析診斷。

1.2.3細胞DNA定量分析

所有Feulgen染色片用武漢蘭丁全自動細胞圖像分析系統進行掃描處理，并由定量分析診斷軟件自行進行結果判定。

1.2.4病理學檢查

篩查中凡細胞DNA定量分析結果建議活檢的對象，均進行陰道鏡檢查并對可疑部分進行4點以上的組織取材，送重慶金域醫學檢驗公司進行病理學檢測。

2　結果

2.1宮頸上皮細胞DNA定量分析圖

經武漢蘭丁細胞DNA定量分析系統對2 638例患者標本進行檢測后，可生成3種不同的細胞DNA定量分析檢測圖：（1）未見異倍體細胞、異倍體細胞峰及異常細胞增生，大多數細胞DNA指數（DNA index，DI）DI=1，個別細胞DI=2，且沒有DI〉2.5的細胞，建議定期進行正常篩查（2～3年）（圖1A）。（2）可見個別DNA倍體異常細胞，即DI〉2.5，或可見少量細胞增殖比例在5%～10%，但不包括10%，大多數細胞DNA指數依然等于1，建議4～6個月進行復查，以明確原因（圖1B）。（3）可見 3個細胞DI〉2.5，或可見異常增生細胞 10%及細胞異倍體峰，建議行陰道鏡檢查并對可疑組織進行取材，行病理學檢查（圖1C）。

2.22 638例婦女宮頸脫落細胞DNA倍體篩查結果

本研究共篩查2 638例，正常結果2 236例，占84.76%；建議復查271例，占10.27%；建議活檢131例，占4.97%。具體結果見表1。

2.3131例婦女宮頸脫落細胞活檢后病理結果

在本組篩查數據中，共有131例經細胞DNA定量分析呈陽性者，行陰道鏡檢查并對可疑組織進行取材，經專家切片、病理學檢測，發現輕度異型增生（mild cervical intraepithelial neoplasias，CIN?Ⅰ）（圖2B）、中度異型增生（moderate cervical in?traepithelial neoplasias，CIN?Ⅱ）（圖2C）和重度異型增生（severe cervical intraepithelial neoplasias，CIN?Ⅲ）（圖2D）患者共45例，包括癌前病變者42例，鱗狀細胞癌或腺癌（圖2E）病變者3例，陽性檢出率為34.35%。結果見表2。

3　討論

表1　2 638例婦女宮頸脫落細胞DNA倍體篩查結果（n）Table 1 The DNA ploidy screening results of cervical exfoliated cells in the 2 638 cases（n）

表2　131例婦女宮頸脫落細胞活檢后病理結果（n）Table 2 The biopsy pathologic results of cervical exfoliated cells in the 131 cases（n）

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，主要是因持續感染人乳頭瘤狀病毒（human papilloma vi?rus，HPV）引起，最常感染的HPV亞型是HPV6、HPV11和HPV51［4］。宮頸癌是目前惟一病因明確、可以有效篩查阻止其發生的腫瘤。隨著社會的發展，人們對宮頸癌二級預防的意識不斷增強，自行宮頸癌篩查的受試者日益增多［5］。細胞形態學檢查雖是宮頸癌與宮頸上皮內瘤樣病變（cervi?cal intraepithelial neoplasias，CIN）篩查的主要方法之一，但因形態學檢查所具有的局限性，和長時間閱片導致的視覺疲勞問題，造成敏感性相對較低，重復性較差以及較多意義不明的判片結果［6］。細胞DNA定量分析檢測宮頸癌及癌前病變的診斷在國外有大量的文獻報道，國內使用細胞DNA定量分析檢測方法和診斷已在開展。DNA異倍體的出現，是染色體異常的表現，也是細胞癌變和癌前病變的特征指標［7-11］。細胞DNA定量分析檢測是在液基薄層制片的基礎上，進行Feulgen染色，通過全自動掃描系統進行細胞DNA定量分析，測定細胞DNA倍體是否異常。因細胞惡變過程中出現DNA含量的改變較形態學改變早，因此細胞DNA定量分析檢測不僅能識別宮頸脫落細胞中的DNA異倍體細胞，還能識別異常增生細胞。通過DNA定量分析來掌握腫瘤細胞遺傳基因變異過程，可作為一種評估癌前病變的指標［12］。這種方法的敏感性高，能早期檢測到宮頸癌及癌前病變，并且可以檢測到肉眼不能觀察到的細胞微小的改變，這種改變往往是癌前病變的表現，有利于早期治療。

多項研究和理論都證實，DNA倍體異常細胞的出現是細胞癌變的一個特征［7-11］。在宮頸癌的發生發展過程中，細胞核內染色體的異常要早于細胞形態上的異常改變，因此采用細胞核內DNA定量分析技術較常規細胞形態學檢測宮頸癌變更敏感［7-12］。本組篩查數據中共發現131例建議活檢者，經重慶金域醫學檢驗公司病理學專家確定為CIN 45例，建議活檢者陽性檢出率為34.35%，篩查后明顯地提高了病變檢出的針對性和有效率。由表2可見，41歲～50歲之間發病率最高，其次為31歲～40歲和51歲～60歲年齡段，這與郎景和等［13］研究的結果相一致。宮頸異倍體細胞和細胞異常增生的出現象征著細胞染色體結構和數量出現異常的變化，最終發展至浸潤性宮頸癌。目前普遍認為宮頸癌是逐漸形成的，從CINⅠ至CINⅡ至CINⅢ，而后進展為浸潤性癌，估計從CIN進展為癌大約需要10年以上的時間。傳統上認為：更多CINⅠ和CINⅡ會消退，大約10%的CINⅠ、20%的CINⅡ會進展為CINⅢ，12%的CINⅢ會進展為浸潤性癌［14］。因此，正確及時地進行醫學干預，有利于降低宮頸癌的發病率和死亡率［15-16］。根據郎景和［13］研究資料顯示，宮頸浸潤癌的好發年齡在50歲左右，符合從宮頸上皮內瘤變到宮頸癌大約10～20年的演變過程，這是一個可以采用醫學干預手段加以阻斷的最好時期，是癌瘤早期防治的重要階段。

本次篩查結果表明，利用細胞DNA定量分析的方法能及時發現宮頸癌前病變，對及時采用預防和治療措施、防止癌變發生可提供有益指導和方向。這種方法，可明確提高標本質量，提高癌變檢出率，與病理學診斷符合率高。黃衛彤等［17］報道，意義未明的不典型鱗狀細胞（atypicai squa?mous cells of unknown significance，ASCUS）在描述性診斷報告中很常見，其特點是檢查結果重復性差，即可是良性病變，也可是不同級別的CIN，甚至是早期浸潤癌，但宮頸浸潤癌檢出率低，病變轉歸差異明顯。細胞DNA倍體分析可輔助用于ASCUS的分流診斷，對ASCUS患者結合DNA定量分析進行有選擇性的活檢，可明顯提高CIN的檢出率、降低宮頸癌的漏診。陳志香等［18］報道，在宮頸癌的發生和發展過程中，病變細胞核內染色體的異常和DNA含量的改變要明顯早于細胞形態學的異常改變。所以，相比較常規細胞形態學檢測而言，DNA定量分析技術的敏感度更高，可有效地降低漏診率，提高檢測的陽性率。

綜上所述，通過對細胞DNA定量分析，進行有選擇性的活檢，既可以提高宮頸上皮細胞癌變和癌前病變的陽性檢出率，又可以避免漏診和資源的浪費。尤其是在湖北恩施州地區經濟發展相對落后的山區，使用細胞DNA定量分析檢測，不僅可以有效地解決經濟落后地區大規模婦女宮頸疾病的篩查，還可以有效地解決經濟落后地區病理學專家人力資源不足和工作壓力相對過大的局面。該方法敏感性高、成本相對較低、是宮頸疾病篩查和診斷的有效方法。

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論著

The significance of the DNA quantitative analysis in screening of 2 638 cervical cancer patients

LIU Guosheng，WANG Xiaoliang，ZHENG Jianqiong，ZENG Shoukui，ZHOU Wei
（Laboratory Medicine，Affiliated Hospital of Hubei University for Nationalities，Enshi，Hubei，China，445000）

［ABSTRACT］Objective To screen for the incidence of cervical lesions in women in Enshi by DNA quantitative cytology, and to investigateits effects in screening and preventing of cervical lesions. Methods DNA quantitative cytology and pathology were used in the medical examination of women who volunteered in the census of cervical disease in Affiliated Hospital of Hubei University for Nationalities from December, 2013 to November, 2014. Results A total of 131 cases of heteroploid cell, aneuploid peaks and abnormal proliferation were found, with an incidence of 4.97% in 2 638 cases. 45 cases of cervical intraepithelial neoplasias (CIN) were diagnosed by DNA quantitative cytology, with the positive prevalence rate of 34.35%. Conclusion DNA quantitative cytology is an effective way to detect CIN betimes, and cervical cancer and precancerous lesions screening may improve the detection rate of cervical lesions.

［KEY WORDS］DNA quantitative cytology；Screening；Cervical lesions

基金項目：湖北省恩施州農業與社會發展科技指導性計劃項目（恩州科業［2013］9號）

通訊作者：周維，E?mail：zw200811@163.com