吉林省白山市2013
—2015年初治、復治結核病患者藥敏檢測結果對比分析

張立秀吉林省白山市傳染病醫院檢驗科，吉林白山　134300

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吉林省白山市2013
—2015年初治、復治結核病患者藥敏檢測結果對比分析

張立秀
吉林省白山市傳染病醫院檢驗科，吉林白山134300

［摘要］目的通過對比分析吉林省白山地區痰抗酸染色陽性的初、復治肺結核病人（含初治失敗轉為復治的病人）及涂陰培陽病人對抗結核藥物的耐藥性，指導臨床結核病患者的合理用藥。方法選取2013年1月—2015年12月在白山市傳染病醫院住院及門診的就診，年齡在16～60歲患者394例痰培養陽性患者，其中男性287例，女性107例。用珠海貝索生物技術有限公司生產的中性及藥物培養基，對白山地區394株有藥物敏感性試驗（簡稱藥敏試驗）結核菌的耐藥情況進行結果對比分析。結果394例患者中，初治患者對一線藥耐藥的占8.05%，復治患者對一線藥耐藥的占20.25%；初治患者多耐藥的占2.54%、復治患者多耐藥的占10.13%；初治患者耐多藥的占5.51%、復治患者耐多藥的占13.29%。結論復治患者耐藥比例明顯高于初治患者，目前臨床常用的異煙肼（INH），利福平（RFP），乙胺丁醇（EMB），鏈霉素（SM）、氧氟沙星5種抗結核菌的藥物均存在一定的耐藥性，臨床應給予重視，依據藥敏實驗結果制定更為合理的化療方案。

［關鍵詞］白山市；結核桿菌；耐藥性；結果分析

結核病是嚴重危害人類健康和生命安全的疾病，自20世紀90年代以來，抗結核化療藥物的應用使得大部分肺結核患者可以被治愈，然而近年來耐藥結核分枝桿菌的流行加上抗結核新藥和疫苗研發的滯后，使得結核病控制面臨嚴峻挑戰。全球結核病疫情回升，其中耐多藥結核病MADR TB是疫情回升主要原因之一［1］。2012年，全球肺結核發病860萬例，其中45萬例為耐多藥結核病［2］，因此該地區自2013年對初復治肺結核病人（含初治失敗轉為復治的病人），進行結核菌培養，對2013年1月—2015年12月，培養陽性的394例患者分離出的結核菌進行了抗菌藥物敏感性測定，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

白山結防所代管城區（包括渾江區、江源區、靖宇縣、臨江市、長白縣共5個區），結核病診治工作分離自2013年1月—2015年12月住院及門診的就診者患者，年齡16～60歲其中男性287例，女性107例，共394例痰培養陽性患者

1.2結核分枝桿菌的分離培養

痰涂片鏡檢后，將陽性標本進行分離培養。

（1）標本選取：三涂兩培［3］：①3份痰標本均為陽性：選取陽性級別高的2份痰標本進行培養。②3份痰標本2份陽性：選取2份陽性痰標本進行培養。③3份痰標本1份陽性：選取陽性標本和1份質量好的陰性標本進行培養。

（2）培養基的保存和準備：培養基應在4℃下密封避光保存。試驗前從冰箱取出所需的培養基恢復至室溫，在斜面的背面用記號筆標注進行培養的痰標本號、病人姓名、接種日期，待用。

（3）前處理：吸取1～2 mL痰標本至前處理管中，視樣本性狀，加入1～2倍體積4%氫氧化鈉前處理液，置渦旋振蕩器上振蕩30～60 s至標本充分混勻，室溫放置15 min。

（4）接種：前處理完成后，以無菌吸管吸取前處理液0.1 mL，均勻接種在2支酸性羅氏培養基斜面上。保持斜面水平向上37℃培養24 h后，直立放置37℃繼續培養。

（5）觀察和結果報告：接種后第3和7日觀察培養情況，此后每周觀察1次，并按下列標準報告陽性結果（見表1）。

表1　觀察和結果報告

所有陽性培養物應保存4℃冰箱內，在藥敏實驗前不得打開培養管。

（6）培養后應將痰標本放置于-20℃冰箱暫時保存，以備發生污染的培養管重新培養用。

1.3藥物敏感性測定［4］

（1）首先進行涂片抗酸染色，確定為抗酸菌者應作抗結核藥物敏感性測定。（2）藥物敏感性測定采取比例法，檢測的藥物有：異煙肼（INH），利福平（RFP），乙胺丁醇（EMB），鏈霉素（SM）、氧氟沙星。每種藥物在培養基中的終濃度（見表2）。（3）含藥培養基制備：水溶性藥物以滅菌蒸餾水溶解，脂溶性藥物經少量二甲基甲酰胺溶解，以滅菌蒸餾水定容至所需的工作液濃度。準確吸取1 mL工作液加入到100 mL制備好的無淀粉改良羅氏培養液中，混勻后分裝試管，經培養基蒸汽凝固滅菌箱85 ℃50 min凝固滅菌。4℃保存，1個月內使用。（4）菌液制備：新鮮菌落制成1.0 mg/mL菌懸液，依次稀釋至10-2mg/mL和10-4mg/mL。（5）接種：分別取10-2mg/mL和10-4mg/mL菌液各0.01 mL接種至對照及含藥培養基斜面上，最終接種量為10-4和10-6mg。（6）培養：37℃培養4周。（7）結果的判讀、解釋和報告：計算耐藥百分比，即含藥培養基上菌落數與無藥培養基上菌落數相比的百分比。小于1%報告敏感，大于或等于1%報告耐藥。（8）注意事項，所有操作均在生物安全柜中操作，分離培養陽性的痰標本以及發生污染的培養管應經過高壓滅菌后處理［5］。

表2　每種藥物終濃度

2　結果

394株結核菌對5種抗菌藥物的耐藥情況，見表3。

表3　394株結核菌對5種抗結核菌藥物不同耐藥類型的統計分析

3　討論

結核病是古老的傳染性疾病，疫情在引入有效化療藥物的化療時代得到了有效控制。但是，近十幾年來，由于耐藥，尤其是多藥耐藥性結核病的發生和迅速傳播等原因，全球結核病疫情急劇惡化。人類進入21世紀后的今天，結核病仍然是嚴重威脅人民生命和健康的重要公共衛生問題，耐藥、耐多藥結核病的控制是其中的重要挑戰和核心課題之一。我國是全球結核病高負擔國家之一，結核病耐藥疫情也十分嚴重［6］，我國2000年流調結果顯示，初始耐藥率和獲得性耐藥率分別為18.6%和46.5%［7］；初始耐多藥率和獲得性耐多藥率分別為7.6%和17.1%。近年來耐藥結核桿菌的流行加上抗結核新藥和疫苗研發的滯后，使得結核病控制面臨嚴峻挑戰。隨著TB藥物的廣泛使用，它的耐藥率仍在不斷升高，開展藥敏試驗，選擇最敏感的抗生素治療，是臨床治療TB病的重要方法。全世界2/3的結核病患者處于發生MDRTB的危險之中，MDRTB呈增加趨勢，MDRTB的治療是廣大結核病防治工作者面臨的最為棘手的難題之一，各國學者正致力于尋找對其進行治療的良策，其中新藥的研制和應用是重要的一環，開發一種新的抗結核藥物既需要財力和時間還要評估在體外、體內和臨床的效果，并非易事，可謂任重而道遠。但抗結核藥物的發展前景比幾十年前大大開闊，我們或許能從中得到點啟示，致力于其中，在眾多研究者的不斷積極探索中，會有新的發現，以最終達到控制結核病的目的。但實現真正的新藥上市，最早可能也要到21世紀的20年代。化療仍是治療MDRTB的主要手段，所以這段時間的對耐藥、耐多藥結核病的治療是在現有的抗結核藥物中選擇，力求完善DOTS，適當輔以免疫治療，介入治療等方法。

［參考文獻］

［1］張國欽，商健，張玉華，等.天津市城區肺結核患者對吡嗪酰胺耐藥的現狀及特征［J］.中國防癆雜志，2015（5）：508-513.

［2］Word Health Organization.Global TB report，2013.Gebeva：Word Health Organization［Z］.2013.

［3］趙雁林，逄宇，等.分枝桿菌分離培養標準化操作程序，結核病實驗室檢驗規程［Z］.2015.

［4］王宇，趙雁林，王黎霞，等結核分枝桿菌藥物敏感性試驗標準化操作程序及質量保證手冊［Z］.

［5］王宇，趙雁林，王黎霞，等.結核分枝桿菌分離培養標準化操作程序及質量保證手冊［Z］.

［6］趙明剛，王宇，肖東樓，等.中國結核病防治規劃實施工作指南［Z］.

［7］丁北川，萬康林，成詩明，等.中國結核病防治規劃痰涂片鏡檢質量保證手冊［Z］.

Comparison and Analysis of Drug Sensitivity Test Results of 2013—2015 and TB Patients in Baishan City，Jilin Province，in the Beginning of the Year

ZHANG Li-xiu
Hospital of Infectious Diseases in Jilin of Baishan City Province，Baishan，Jilin Province，134300 China

［Abstract］Objective Through the comparative analysis in Baishan region，Jilin Province sputum acid fast staining positive initial and retreatment pulmonary tuberculosis patients（with initial treatment failure turn for retreatment of patients）and smear negative and culture positive patients anti tuberculosis drug resistance to guide rational use of drugs in clinical TB patients.Methods In December 2015 January 2013 in Baishan City infectious disease hospital inpatient and outpatient clinic patients，aged 60 to 16 years old 394 cases of sputum culture positive patients，including male 287 cases，female 107 cases.Take proportion method and medium with Zhuhai beisuo Biological Technology Co.，Ltd.is the production of neutral and drug，of Baishan region of 394 strains have drug sensitivity test（referred to as drug sensitivity test）of Mycobacterium tuberculosis drug resistance were analyzed.Results 394 patients naive patients on first-line drug resistance 8.05%.Retreatment of patients on first-line drug resistance（20.25%for initial treatment of patients with multi drug resistant （2.54%and retreatment patients with multi drug resistant（10.13%patients with newly diagnosed resistance multidrug accounted for 5.51%，retreatment patients resistant to many drugs accounted for 13.29%.Conclusion Analysis results show that the retreatment of the proportion of resistant cases were significantly higher than those in untreated patients，at present the clinical commonly used isoniazid（INH），rifampicin（RFP），ethambutol（EMB），streptomycin（SM），ofloxacin 5 kinds of anti TB drugs there are certain antibiotic resistance，clinical should pay more attention to，according to drug susceptibility test results to develop a more reasonable chemotherapy.

［Key words］Baishan City；Mycobacterium tuberculosis；Drug resistance

［中圖分類號］R7

［文獻標識碼］A

［文章編號］1672-5654（2016）04（a）-0113-03

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.10.113

［作者簡介］張立秀（1973.11-），女，本科，主管檢驗師，主要從事臨床醫學檢驗工作。

收稿日期：（2016-01-07）