DNA拓撲異構酶Ⅱα在乳腺癌中的表達*

楊良權, 周東光, 婁歡歡, 毛大華

(1.秦皇島市婦幼保健院 乳腺科, 河北 秦皇島　066000； 2.秦皇島市開發區醫院 外科, 河北 秦皇島　066004； 3.貴州醫科大學附院， 貴州 貴陽　550004)

DNA拓撲異構酶Ⅱα在乳腺癌中的表達*

楊良權1, 周東光1, 婁歡歡2, 毛大華3

(1.秦皇島市婦幼保健院 乳腺科, 河北 秦皇島066000； 2.秦皇島市開發區醫院 外科, 河北 秦皇島066004； 3.貴州醫科大學附院， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 分析DNA拓撲異構酶Ⅱα(TOPⅡα)在乳腺癌中的表達。方法： 收集141例病理確診的乳腺癌組織，采用免疫組織化學的方法檢測癌組織中TOPⅡα的表達，分析TOPⅡα表達與乳腺癌患者年齡、家族史、月經狀況、腫瘤大小、有無淋巴結轉移及病理分級的關系，觀察TOPⅡα在不同分子分型(Luminal A型、B樣型、B-like型，HER2表達型及三陰性)乳腺癌中的表達。結果： TopⅡα表達水平與乳腺癌患者的年齡、家族史、月經狀況、腫瘤大小及是否有淋巴結轉移無關(P>0.05)，與乳腺癌病理分級有關(P<0.05)，隨腫瘤組織學分級越高，TopⅡα表達水平越高；TopⅡα在Luminal B-like型、HER2表達型和三陰性乳腺癌患者中明顯高表達，在Luminal A型和B樣型中低表達。結論： TopⅡα表達水平與乳腺癌病理分級及分子分型有關。

[關鍵詞]乳腺腫瘤； DNA拓撲異構酶Ⅱα； 基因表達； 免疫組織化學

近年來，乳腺癌在我國的發病率迅速升高，在部分發達城市已成為女性惡性腫瘤的第一大疾病。乳腺癌治療以手術、化療、放療、內分泌治療及基因靶向治療為主,其中化療是控制復發轉移的主要手段，多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)是影響乳腺癌輔助化療療效的重要原因，MDR產生的機制是多基因及多步驟綜合作用的結果[1-3]。DNA拓撲異構酶Ⅱα( topoisomerase Ⅱα, Top Ⅱα)基因是一個耐藥基因，TopoⅡα能對特殊的DNA 序列進行識別，并通過Tyr 與DNA 5′斷端的磷酸基以共價鍵結合，改變DNA 的拓撲結構，催化斷裂鏈的重新連接DNA分子鏈的過程[4]。TopoⅡα在喉鱗狀細胞癌、霍奇金淋巴瘤、彌漫性大B細胞性淋巴瘤等腫瘤細胞中高度表達, 并且與細胞增殖高度相關[5]。本研究通過免疫組化方法檢測乳腺癌組織中TOPⅡα表達，探討TOPⅡα表達與乳腺癌臨床病理的關系及其在不同分子分型乳腺癌中的表達特點。

1資料與方法

1.1一般資料

2012年1月～2014年10月收治的乳腺癌女性患者141例，31～61歲，中位年齡42歲，病理分期Ⅰ期18例，Ⅱ期89例，Ⅲ期34例，所選標本均經病理證實為浸潤性導管癌。排除術前均行化療、放療或內分泌治療患者。

1.2方法

所有乳腺癌標本組織經甲醛液固定，石蠟包埋，采用免疫組織化學Envision二步法檢測雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、表皮生長因子受體2(HER-2)、增殖細胞相關的核抗原(Ki-67)及TOPⅡα表達(試劑盒均購自丹麥DAKO公司)，步驟嚴格按照說明書進行，用PBS代替一抗作陰性對照，以已知陽性組織作陽性對照，用DAB顯色，蘇木素復染，根據文獻[6]判斷結果。在細胞核內有黃色或棕黃色著色顆粒為陽性，陽性細胞<5%為(-)，5%～10%為可疑(±)，10%～50%為(+)，50%～75%為(++)，>75%為(+++)；(+)-(+++)判斷為陽性患者，(-)及(±)判斷為陰性患者。

1.3觀察指標

分析TOPⅡα表達與乳腺癌患者年齡、家族史、月經狀況、腫瘤大小、有無淋巴結轉移及病理分級的關系，觀察TOPⅡα在不同分子分型(Luminal A型、B樣型、B-like型，HER2表達型及三陰性)乳腺癌中的表達。分子分型按文獻[6]分類標準， Luminal A型(ER/PR陽性，且PR高表達，HER2陰性，Ki-67低表達)，Luminal B樣型(ER/PR陽性，HER2陰性，Ki-67高表達或PR低表達)，Luminal B-like型(ER/PR陽性，HER2陽性，任何狀態的Ki-67)，HER2表達型(HER2陽性，ER/PR陰性)，三陰性(HER2陰性，ER/PR陰性)。

1.4統計學處理

運用SPSS 17.0系統進行分析，計數資料用百分比或率(%)表示，組間比較采用卡方檢驗，以P<0.05為有差異有統計學意義。

2結果

TopⅡα表達水平與乳腺癌患者的年齡、家族史、月經狀況、腫瘤大小及是否有淋巴結轉移無關(P>0.05)，與乳腺癌病理分級有關(P<0.05)，隨腫瘤的組織學分級越高，TopⅡα表達水平越高，見表1。TopⅡα在Luminal B-like型、HER2表達型和三陰性乳腺癌患者中明顯高表達，在Luminal A型和B樣型中低表達。見表2。

表1　TopⅡα表達與乳腺癌臨床病理指標

表2　TOPⅡα表達與不同分子分型乳腺癌(n，%)

3討論

乳腺癌的發生是一個多基因、多步驟參與的復雜過程，無論在分子生物學特征、組織形態、免疫表型、基因特點，還是對治療的反應上都存在著極大的差異，而這種異質性的存在提示其在分子水平上可能具有不同的分子亞型。TopⅡα基因產物為同型二聚體蛋白質，其與DNA能形成穩定的共價復合物；同時TopⅡα也可通過染色體上兩個解離位點作用于DNA，即DNase 超敏感區和斯加弗得相關區(scaf-fold association region, SAR)，是客觀反映細胞惡性程度的指標之一[1]。TopⅡα可作為增殖指數，表達與S-G2/M期，其高表達使腫瘤細胞復制加快，提高腫瘤的惡性程度[2]。有研究表明，TopⅡα在乳腺癌臨床后期病人如伴有TopⅡα高表達，其預后較低表達者差[3]。本研究結果顯示，TopⅡα表達水平與乳腺癌患者的年齡、家族史、月經狀況及腫瘤大小和是否有淋巴結轉移無關(P>0.05)，與乳腺癌病理分級有關(P<0.05)，且隨組織學分級越高，TopⅡα表達水平越高，說明TopⅡα的表達與乳腺癌的惡性程度有關，TopⅡα能夠較為客觀地反映乳腺癌的增殖活性，對預后有一定的預測作用。

TopⅡα陽性率在有HER2擴增的Luminal B-like和HER2表達型中占71.55%(47/66)，明顯高于其他3種類型，與Konecny等[7]的檢出率(62.6%)相近。有文獻報道，在HER2基因擴增的原發性乳腺癌中，TopⅡα基因出現擴增的概率為24.3%～ 55%， TopⅡα和HER2之間存在一定的相關性[8]。因HER2與TopⅡα都位于17q12-22，故兩者在基因表達和變化上存在某種聯系，HER2的過表達，能夠引起TopⅡα基因和蛋白質的改變[9-10]。王云翔等[11]認為TopⅡα蛋白表達可以作為HER2過表達型乳腺癌的獨立預后因子。三陰性乳腺癌TopⅡα表達率71.4%(20/28)，Tan等[12]采用免疫組化法研究了三陰性乳腺癌的TopⅡα表達情況，發現三陰性中存在較廣泛的TopⅡα表達水平(79.4%)，認為TopⅡα可作為判斷三陰性乳腺癌患者預后及指導化療的有效指標[13-15]。本研究結果顯示，TopⅡα表達水平達(71.4%)與文獻報道一致，也支持上述觀點。

綜上，在乳腺癌患者癌組織中，病理分級越高，TopⅡα表達越高。TopⅡα在有HER2擴增的Luminal B-like型、HER2表達型乳腺癌中有較高表達，說明opⅡα、HER2共表達提示腫瘤惡性程度更高。TopⅡα表達水平與乳腺癌病理分級及分子分型有關。

4參考文獻

[1] Park K,Kim J,Lim S,et al. Topoisomerase II-alpha (topoII) and HER2 amplification in breast cancers and response to preoperative doxorubicin chemotherapy[J].European Journal of Cancer, 2003(5):631-634.

[2] 施為建，王渝芝，蔣鳳蓮，等. 乳腺浸潤性導管癌中多藥耐藥相關蛋白的表達情況[J].中國健康月刊， 2011(8):15-16.

[3] Andrea JE, Adachi K, Morgan AR.Fluorometric assays for DNA topoisomerases and topoisomerase-targeted drugs: quantitation of catalytic activity and DNA cleavage[J] .Molecular Pharmacology, 1991(4):495-501.

[4] 錢晨彭,再利,巢暉. 靶向抑制DNA 拓撲異構酶的抗腫瘤藥物研究[J]. 大學化學, 2014(1):1-10.

[5] 潘亞奇,袁公,楊艷維. DNA拓撲異構酶Ⅱα與腫瘤[J]. 醫學信息, 2011(2):415.

[6] 中國抗癌協會乳腺癌專業委員會. 中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范(2013版) [J]. 中國癌癥雜志, 2013(8):637-693.

[7] Konecny GE, Untch M. HER2 gene amplification and response to dose dense sequential epirubicin and paclitaxel as neoadjuvant therapy of primary breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat， 2006 (1): 48.

[8] Siddiqa A,Long LM,Li L,et al.Expression of HER-2 in MCF-7 breast cancer cells modulates anti-apoptotic proteins Survivin and Bcl-2 via the extracellular signal-related kinase (ERK) and phosphoinositide-3 kinase (PI3K) signalling pathways[J]. BMC Cancer， 2008(8)：129．

[9] Di Leo A, Larsimont D, Gabcberg D,et al. HER-2 and topo-isomerase IIα as predictive markers in a population of node-positive breast cancer patients randomly treated with adjuvant CMF or epirubicin plus cyclophosphamide[J].Ann Oncol, 2001(8):1081-1089.

[10]MacGrogan G, Rudolph P, De Mascarel I. DNA topoisomerase II alpha expression and the response to primary chemotherapy in breast cancer[J]. British Journal of Cancer, 2003(5):666-671.

[11]王云翔，范宇，張勤，等. TopⅡα蛋白在不同分子亞型乳腺癌中的表達及其預后價值[J].中國腫瘤臨床， 2012(7):129-130.

[12]Tan DS,Marchio C,Jones RL. Triple negative breast cancer: molecular profiling and prognostic impact in adjuvant anthracycline-treated patients[J]. Breast Cancer Research and Treatment, 2008(1):27-44.

[13]王曉文，楊亮，朱麗萍，等. Ki-67及TopⅡα在三陰乳腺癌中的表達及意義[J].中國普通外科雜志， 2014(5):692-694.

[14]況麗平，王媛媛，管慧紅，等. TopⅡα和Ki-67在不同分子分型乳腺癌組織中的表達及意義[J].實用醫學雜志， 2014(5):778-780.

[15]陳秋蘭，周紹榮，焦蘭農，等.乳腺癌組織中HER-2、VEGF和Ki67的表達及臨床意義.實用臨床醫藥雜志， 2015(15)：38-40.

(2016-03-13收稿，2016-05-16修回)

中文編輯： 吳昌學； 英文編輯： 劉華

The Expression and Clinical Significances of TOPⅡα in Different Molecular Type of Breast Cancer

YANG Liangquan1, ZHOU Dongguang1, LOU Huanhuan2, MAO Dahua3

(1.DepartmentofGalactophore,Maternal&ChildCareCenterofQinhuangdao,Qinhuangdao066000,Hebei,China;2.DepartmentofSurgery,QinhuangdaoDevelopmentDistrictHospital,Qinhuangdao066004,Hebei,China;3.theAffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To analyze expression and clinical significance of TOP II α in breast cancer. Methods： The breast cancer tissues were collected from 141 patients with pathologically diagnosed breast cancer. The expression of Top II α in cancer tissue was detected by immunohistochemistry. The correlation between the expression of Top II α and age of patients, family history, menstrual status, tumor size, lymph node metastasis and pathological grades were analyzed. The expression of Top II α in different molecular type of breast cancer (luminal A type, B type, B-like type, HER2 expression type and triple negative breast cancer) were observed. Results： There was no correlation between the expression level of Top II α and age of patients, family history, menstrual status, tumor size and lymph node metastasis(P>0.05). There existed a positive correlation between Top II α expression level and pathological grades of breast cancer (P<0.05). The higher pathological grade, the more Top II α expression. There was a significantly high expression of Top II α in the luminal B-like type, HER2 expression type and triple negative breast cancer while there was a significantly low expression in luminal A type and B type breast cancer. Conclusion： Top II α expression level is related to pathological grades and molecular type of breast cancer.

[Key words]breast cancer; topoisomerase II α; gene expression; immunohistochemistry

*[基金項目]河北省科技廳項目(152777118)

[中圖分類號]R737.9

[文獻標識碼]A

[文章編號]1000-2707(2016)06-0729-03

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.025

網絡出版時間：2016-06-16網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1743.060.html