麻黃-桂枝配伍對麻黃類生物堿、桂皮酸及桂皮醇在大鼠體內藥動學的影響

衛　平，陳飛龍，馬欽海，任孟月，羅佳波

(1. 南方醫科大學中醫藥學院，廣東省中藥制劑重點實驗室，廣東 廣州　510515；2. 深圳市坪山新區婦幼保健院藥劑科，廣東 深圳　518122)

?

麻黃-桂枝配伍對麻黃類生物堿、桂皮酸及桂皮醇在大鼠體內藥動學的影響

衛平1，2，陳飛龍1，馬欽海1，任孟月1，羅佳波1

(1. 南方醫科大學中醫藥學院，廣東省中藥制劑重點實驗室，廣東 廣州510515；2. 深圳市坪山新區婦幼保健院藥劑科，廣東 深圳518122)

摘要：目的建立UPLC-MS/MS法，對麻黃-桂枝藥對提取物、單味麻黃提取物和單味桂枝提取物中麻黃類生物堿、桂皮醇及桂皮酸的血漿藥動學進行比較研究，探討中藥復方配伍對藥效成分體內過程的影響。方法實驗大鼠分別灌胃麻黃、桂枝及麻黃-桂枝提取物，測定不同時間點大鼠血漿中麻黃類生物堿、桂皮醇和桂皮酸的濃度，采用DAS3.0軟件計算藥動學參數，SPSS13.0對兩組的藥動學參數進行統計分析。結果麻黃-桂枝組中去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿的達峰濃度(Cmax)均明顯大于麻黃組(P<0.05)；麻黃-桂枝組中去甲基偽麻黃堿的藥時曲線下面積(AUC0-t)明顯大于麻黃組(P<0.05)；麻黃-桂枝組中去甲基麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿的平均駐留時間(MRT0-t)均明顯小于麻黃組(P<0.05)；麻黃-桂枝組中去甲基麻黃堿、麻黃堿和甲基麻黃堿的半衰期(T1/2z)明顯小于麻黃組(P<0.05)。麻黃-桂枝組中桂皮醇、桂皮酸的AUC0-t和MRT0-t均明顯大于桂枝組(P<0.05)。結論麻黃與桂枝配伍后，增加了5種麻黃生物堿在體內的吸收濃度，延緩了去甲麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿在體內的消除，提高了桂皮醇和桂皮酸的生物利用度。

關鍵詞：麻黃；桂枝；麻黃-桂枝藥對；麻黃類生物堿；桂皮酸；桂皮醇；血漿藥動學；UPLC-MS/MS

藥對又叫“對藥”，具備方劑的基本作用，是中醫遣方用藥的特色之一，是最簡單、最基本和最常見的中藥配伍形式[1]。麻黃-桂枝藥對在多個經典方劑中都有應用，如麻黃湯、小青龍湯等，臨床上也具有較高的配伍使用頻率，具有發汗解表、疏風散寒、止咳平喘功效[2]。課題組前期對麻黃-桂枝藥對的化學成分、藥理作用、代謝組學以及最佳配比等進行了大量研究[3-4]。但麻黃-桂枝藥對體內過程、單方及復方中各成分的藥動學相互作用的影響還不明確，有待進一步研究。麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasinicaStapf、中麻黃EphedraintermediaSchrenk et C. A. Mey. 或木賊麻黃EphedraequisetinaBge.的干燥草質莖，其主要含多種生物堿和少量的揮發油等[5]。桂枝為樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl.的干燥嫩枝，主要含有桂皮醛、桂皮醇、桂皮酸和香豆素等[6]。本實驗運用現代技術手段，UPLC-MS/MS法檢測分析麻黃提取物中具有代表性的麻黃類生物堿(甲基麻黃堿(norephedrine, NME)、去甲基偽麻黃堿(norpseudoephedrine, NMP)、麻黃堿(ephedrine, E)、偽麻黃堿(pseudoephedrine, PE)和甲基麻黃堿(methylephedrine, ME))和桂枝提取物中具有代表性的桂皮醇(cinnamic alcohol, CAL)、桂皮酸(cinnamic acid, CA)的濃度，研究麻黃-桂枝配伍前后血漿藥動學特征的變化，探討復方中藥配伍對麻黃類生物堿、桂皮酸和桂皮醇代謝的影響，為該藥對更深層次的開發利用提供科學依據。

1儀器與材料

1.1儀器

1290Infinity-G6410型UPLC-MS/MS聯用儀(美國Agilent公司)；XW-80A型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；KQ5200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HC-3018R型高速冷凍離心機(安徽中科中佳科學儀器有限公司)；CP225D型十萬分之一天平(美國Denver公司)；CP3243型萬分之一天平(美國Denver公司)；自制氮氣吹干裝置。

1.2試劑與試藥

鹽酸麻黃堿(批號：171241-201007)，鹽酸偽麻黃堿(批號：171237-200807)，鹽酸甲基麻黃堿(批號：171247-200301)，桂皮酸(批號：110786-200503)，鹽酸金剛烷胺(IS1，批號：100426-201002)和鹽酸苯海拉明(IS2，批號：100066-200506)均購自中國食品藥品檢定研究院；桂皮醇對照品(批號：30794)，購自阿拉丁公司；鹽酸去甲基麻黃堿及鹽酸去甲基偽麻黃堿對照品(含量≥98%，赤峰艾克制藥科技股份有限公司，批號：20100412)；乙腈(色譜純，Merck公司)，甲酸(色譜純，Tedia公司)；乙醚、二氯甲烷均為分析純；雙蒸水由南方醫科大學純水中心提供；單味麻黃、單味桂枝和麻黃-桂枝提取物均為實驗室自制(批號：20140110)，經“2.1”項下方法測定得單味麻黃提取液中NME、NMP、E、PE和ME的濃度分別為0.12、0.22、2.70、1.12和0.27 g·L-1，麻黃-桂枝提取液中5種成分的濃度相應為0.10、0.19、2.76、1.23和0.28 g·L-1；單味桂枝提取液中CAL和CA的濃度分別為34.25和352.48 mg·L-1，麻黃-桂枝提取液中2種成分的濃度相應為31.30和334.30 mg·L-1。

1.3試驗動物

健康Sprague-Dawley (SD)大鼠18只，♂，體質量(250±20)g，由南方醫科大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(粵) 2011-0015。

1.4數據處理與分析

2方法

2.1液質聯用檢測條件

2.1.1檢測麻黃生物堿的條件[10]色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18 columm(3.5 μm, 2.1×100 mm)；流動相：乙腈(A)-0.1%的甲酸水溶液(B)，程序洗脫(0～3 min：97% B；3～5 min：97%～96% B；5～7 min：96% B；7～7.5 min：96%～82% B；7.5～9 min：82% B；9～9.1 min ：82%～97% B)；流速：0.40 mL·min-1；柱溫：35 ℃；進樣量：1 μL。離子源：ESI源；毛細管電壓：4 000 V，霧化器壓力：30 psi；干燥氣流溫度：350 ℃；干燥氣流速度：8.0 L·min-1；碰撞氣為高純氮氣；采集模式：多反應監測(MRM)模式；掃描離子：正離子。用于定量分析的離子對分別為：NME與NMPm/z152.1>134.1，E與PEm/z166.1>148.1，MEm/z180.1>162.1，ISm/z152.2>135.1。Fragmentor分別為75、88、110、95；碰撞能分別為8、12、12、20 V。

2.1.2檢測桂皮酸及桂皮醇的條件色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18 columm(3.5 μm, 2.1×100 mm)；流動相：乙腈(A) ∶0.1%的甲酸水溶液(B)=30 ∶70，等梯度洗脫；流速：0.40 mL·min-1；柱溫：35 ℃；進樣量：2 μL；洗脫時間：3.9 min。離子源：ESI源；毛細管電壓：4 000 V，霧化器壓力：30 psi；干燥氣流溫度：350 ℃；干燥氣流速度：10.0 L·min-1；碰撞氣為高純氮氣。采集模式：多反應監測(MRM)模式。掃描離子：正離子。用于定量分析的離子對分別為：CAL m/z 117.1>117.1、CA m/z 149.1>131.1、IS m/z 256.2>167.1。Fragmentor分別為100、80、85；碰撞能均為7 V。

2.2對照品溶液的配制

精密稱取NME、NMP、E、PE和ME對照品適量于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得混合對照品儲備液。其中含NME、NMP、E、PE和ME分別為212.4、219.9、2044.1、1022.4和407.1 mg·L-1。精密稱取CA、CAL對照品適量于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得混合對照品儲備液。其中含CA和CAL分別為125.00、200.00 mg·L-1。上述對照品儲備液依次稀釋得系列對照品溶液，于4 ℃冰箱保存備用。精密稱取鹽酸金剛烷胺(amantadine, IS1)對照品適量于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得11.32 mg·L-1的IS1對照品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明(diphenhydramine, IS2)對照品適量于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，得103.00 mg·L-1的IS2對照品溶液，于4 ℃冰箱保存備用。

2.3血漿樣品預處理

2.3.1含麻黃生物堿的血樣預處理[10]5 mL EP管中加入血漿樣品100 μL，IS1溶液30 μL，甲醇100 μL，渦流30 s，加入40 μL的飽和碳酸鈉溶液，渦流30 s，加入1.2 mL乙醚-二氯甲烷(6 ∶4，V/V)溶液，渦流2 min，14 000 r·min-1離心10 min，分取上層溶液；再以1.2 mL乙醚-二氯甲烷(6 ∶4，V/V)溶液重復萃取1次，合并上層溶液于N2流下吹干，殘留物用200 μL 流動相初始配比溶液(乙腈 ∶0.1%甲酸水溶液=3 ∶97，V/V)復溶，渦流2 min，14 000 r·min-1離心20 min，取上清進行UPLC-MS/MS檢測分析。

2.3.2含桂皮醇及桂皮酸的血樣預處理2 mL EP管中加入血漿樣品100 μL，IS2溶液20 μL，甲醇100 μL，渦流10 s，加入0.5 mL乙腈，渦流2 min，14 000 r·min-1離心10 min，分取上層溶液，于N2流下吹干，殘留物用100 μL流動相復溶，渦流2 min，14 000 r·min-1離心10 min，取上清進行UPLC-MS/MS檢測分析。

2.4藥動學試驗

將18只健康SD大鼠，按體重隨機分為單味麻黃提取物組、單味桂枝提取物組和麻黃-桂枝提取物組，給藥前禁食12 h，但可自由飲水。大鼠口服給予8.10 g·kg-1單味麻黃提取物，13.50 g·kg-1麻黃-桂枝提取物，5.4 g·kg-1單味桂枝提取物[4](根據給藥量進行折合，前兩組均相當于NME 0.95 mg·kg-1，NMP 1.81 mg·kg-1，E 21.98 mg·kg-1，PE 9.03 mg·kg-1，ME 2.15 mg·kg-1；后兩組均相當于CAL 0.04 mg·kg-1，CA 1.09 mg·kg-1)，分別于給藥前和給藥后0.08、 0.25、 0.5、 0.75、 1.5、 3、 4、 6、 8、 12、 24、 48 h(其中單味桂枝組和麻黃-桂枝組增采36 h時間點)經眼眶靜脈叢采血約0.5 mL于肝素化的EP管中，4 000 r·min-1離心10 min，分離血漿置-20 ℃冰箱中保存。

3結果

3.1專屬性考察

取空白血漿、空白血漿加麻黃生物堿混合對照品溶液和IS1溶液以及給藥后大鼠的含藥血漿，分別按“2.3.1”項下預處理方法處理樣品，在“2.1.1”項下條件進樣，獲得色譜圖Fig 1；另取空白血漿、空白血漿加CAL、CA混合對照品溶液和IS2溶液以及給藥后大鼠的含藥血漿，分別按“2.3.2”項下預處理方法處理樣品，在“2.1.2”項下條件進樣，獲得色譜圖Fig 2。由結果可見，空白血漿的內源性物質在待測物出峰時間處干擾小，專屬性強；待測物LLOQ的血漿樣品出峰時間合適，峰型良好、分離度恰當；適合大鼠血漿樣品的測定。

3.2線性關系考察

取空白血漿100 μL，加入系列對照品混合溶液100 μL，除不加100 μL甲醇外，按“2.3.1”項下處理，每一濃度進行3樣本分析，按“2.1.1”項方法測定，記錄樣品峰面積，以待測物與內標物的峰面積比為縱坐標Y，待測物的濃度為橫坐標X，用加權(1/C2)最小二乘法進行回歸分析，得標準曲線NME：Y=0.0014X+0.0039(r2=0.9919)、NMP：Y=0.0016X-0.0035(r2=0.9971)、E：Y=0.0010X+0.1212(r2=0.9982)、PE：Y=0.0015X+0.0439(r2=0.9995)、ME：Y=0.0006X+0.0037(r2=0.9998)，線性范圍分別為0.11～1062.00、0.11～1099.50、1.23～12205.00、0.51～5112.00、0.21～2035.50 μg·L-1，定量下限分別為0.11、0.11、1.23、0.51、0.21 μg·L-1。同法得標準曲線CA：Y=0.0008X+0.0836(r2=0.9977)、CAL：Y=0.0012X+0.0531(r2=0.9955)，其線性范圍分別為1.61～6042.00、2.11～211.20 μg·L-1，定量下限分別為1.61、2.11 μg·L-1。

3.3精密度和準確度

取空白血漿100 μL，加入系列對照品混合溶液，制備麻黃類生物堿高、中、低濃度(NME：531.00、53.10、1.06 μg·L-1；NMP：549.75、54.98、1.10 μg·L-1；E：6102.50、610.25、12.21 μg·L-1；PE：2556.00、255.60、5.11 μg·L-1；ME：1017.75、101.78、2.04 μg·L-1)的質控樣品(QC)，每一濃度進行5樣本分析，連續測定3日，根據當日的隨行標曲算得QC樣品濃度，與配制濃度對照，計算日內、日間精密度(RSD)和準確度(RE)，結果5種麻黃類生物堿的日內RSD均小于10.9%、RE為-6.6%～8.2%，日間RSD均小于13.1%、RE為-8.1%～2.3%。同法制得CA：3222.40、161.12、6.04 μg·L-1；CAL：105.60、21.12、5.28 μg·L-1高、中、低濃度的質控樣品(QC)，得CA和CAL的日內RSD均小于9.6%,、RE為-3.8%～-1.1%，日間RSD均小于7.3%、RE為-6.5%～-2.3%。由上述結果可見，均符合生物樣品分析方法的要求。

Fig 1　Representative UPLC-MS/MS chromatograms of plasma samples

A:Rat blank plasma; B:Rat blank plasma spiked with standard solutions in LLOQ; C:The rat plasma sample collected at 1.5h after oral administration of Ephedrae extract; D:The rat plasma sample collected at 1.5 h after oral administration of Ephedrae-Cinnamomi extract; 1.NME/NMP; 2.E/PE; 3.ME; 4. IS1

Fig 2　Representative UPLC-MS/MS chromatograms of plasma samples

A: Rat blank plasma; B: Rat blank plasma spiked with standard solutions in LLOQ; C: The rat plasma sample collected at 0.75h after oral administration of Cinnamomi extract; D: The rat plasma sample collected at 0.75 h after oral administration of Ephedrae-Cinnamomi extract; 1.CAL; 2.CA ; 3.IS2.

3.4基質效應和提取回收率

取空白血漿100 μL,經“2.3.1”項下處理后分別加入高、中、低濃度QC樣品溶液復溶，進樣后所得峰面積為分子，對應濃度的對照品溶液直接進樣后所得峰面積為分母，計算得基質效應；另取高、中、低濃度QC樣品，經“2.3.1”項下處理后，所得峰面積與空白血漿經“2.3.1”項下處理后加相應對照品溶液進樣所得的峰面積相比，計算得提取回收率。各成分3種濃度的基質效應為NME：94.06%～100.96%、NMP：91.23%～100.98%、E：89.02%～96.16%、PE：87.17%～94.91%、ME：96.87%～102.41%(n=5，RSD均小于9.7%)，IS1：95.52%(n=5，RSD=6.9%)；3種濃度下的提取回收率為NME：94.6%～96.4%、NMP：90.9%～98.6%、E：89.3%～96.3%、PE：81.9%～99.5%、ME：82.8%～96.1%(n=5，RSD均小于5.6%)，IS1：91.8%(n=5，RSD=2.8%)。同法得3種濃度下CA和CAL的基質效應分別為86.00%～95.50%、89.11%～90.40%(n=5，RSD均小于9.6%)，IS2：89.67%(n=5，RSD=5.4%)；3種濃度下的提取回收率為CA：81.96%～92.83%、CAL：82.64%～87.44%(n=5，RSD均小于9.4%)，IS2：92.48%(n=5，RSD=6.2%)。由結果可見，該方法無明顯離子增強或抑制效應；IS的提取回收率與分析物的回收率相近，平行性好，起到了很好的校正作用，提高了方法的準確度。

3.5穩定性考察

取空白血漿100 μL，按“3.1.3”項下制備含待測物高、中、低濃度的血漿樣品各5份，考察樣品處理前3次反復凍融，置于-20 ℃保存30 d和經處理后室溫放置10 h的穩定性。結果表明，樣品處理前3次反復凍融后血漿中麻黃類生物堿濃度的RE為-5.6%～3.8%，-20 ℃保存30 d后血漿濃度的RE為-2.8%～1.0%，經處理后室溫放置10 h后血漿濃度的RE為-3.9%～1.2%。同法得樣品處理前3次反復凍融血漿中桂皮醇、桂皮酸濃度的RE為-9.7%～-1.3%，-20 ℃保存30 d后血漿濃度的RE為-8.5%～1.7%，經處理后室溫放置10 h后血漿濃度的RE為-9.0%～1.0%。由結果可見，在以上條件下，待測物均能保持穩定。

3.6藥動學試驗

麻黃類生物堿、桂皮醇和桂皮酸的平均C-T曲線分別見Fig 3和Fig 4，采用DAS3.0軟件對藥動學參數進行擬合，結果見Tab 1，Tab 2。

4討論

在桂枝與麻黃-桂枝提取物血漿藥動學的研究中，桂枝的檢測成分選擇了桂皮酸和桂皮醇，而沒有選擇桂皮醛。因為在研究的前期摸索階段，發現桂皮醛對照品極不穩定，很難達到生物樣品檢測方法學的要求；另由相關研究報道，桂皮醛進入體內后迅速氧化為桂皮酸，經β-氧化作用后生成苯甲酸[7]，并與甘氨酸結合，再在ATP與酰基轉移酶的作用下生成代謝物馬尿酸，經尿液排出體外[8]。

Tab 1　Pharmacokinetic parameters for NME, NMP, E, PE, ME in rats plasma after oral administration of Ephedrae and Ephedrae-Cinnamomi±s,n=6)

*P<0.05vsEphedrae

Tab 2　Pharmacokinetic parameters for CAL, CA in rats plasma after oral administration of Cinnamomi and Ephedrae-Cinnamomi±s,n=6)

*P<0.05vsCinnamomi

生物樣品檢測方法的建立和驗證是藥代動力學研究的基礎，由于在藥動學研究中，生物藥品存在濃度較低，基質環境復雜等問題，因此，建立快速、靈敏可靠的生物樣品測定方法是本課題擬解決的關鍵問題之一，以實現高通量的生物樣品分析，滿足藥動學研究大樣本量的要求[9]。本文麻黃類生物堿UPLC-MS/MS檢測方法采用了本課題組前期的分析方法[10]。為了改善色譜分離并同時提高質譜響應，在檢測桂皮酸和桂皮醇時，借鑒了麻黃類生物堿的研究方法對流動相進行了優化。分別對甲醇-水及乙腈-水系統進行了探索，并向其中加入一定量的甲酸，這樣有利于提高待測物在正離子檢測方式下的質譜響應。分析時發現含乙腈的流動相更能提高待測物的響應，改善了峰形以及降低了背景噪音，最終選擇了乙腈-0.1%甲酸水(30 ∶70)等梯度洗脫來檢測分析桂皮酸和桂皮醇。在內標物的選擇上，根據文獻的報道，分別對鹽酸苯海拉明、苯丙酸、對羥基苯甲酸甲酯等[11-14]進行了考察，最終確定了鹽酸苯海拉明為檢測的內標物。

Fig 4　Mean plasma concentration-time profiles of CAL and CA after oral administration of Cinnamomi and Ephedrae-Cinnamomi±s,n=6)

結果顯示，麻黃類生物堿在麻黃-桂枝藥對和單味麻黃給藥的情況下，兩者的藥動學參數Cmax、MRT0-t(NMP除外)、T1/2z(NMP和PE除外)、Vz/F(NMP和PE除外)差異具有顯著性，NMP的AUC0-t和CLz/F差異具有顯著性，其中NME、E和ME具有相似的藥動學趨勢。提示麻黃-桂枝藥對中的其他成分在藥物的吸收上起到了促進作用，而在藥物的消除上有起到了延緩作用。另麻黃類生物堿的藥動學趨勢還與本身的藥物結構存在一定的關系。桂皮酸和桂皮醇在麻黃-桂枝藥對和單味桂枝給藥的情況下，兩者的藥動學參數AUC0-t、MRT0-t、Vz/F和CLz/F差異均具有顯著性，提示麻黃-桂枝藥對中的其他成分可提高桂皮酸和桂皮醇的生物利用度，延緩二者在體內的分布和消除。

中藥復方在中國具有悠久的使用歷史，在臨床上中藥配伍給藥有其內在的合理性。本研究從血漿藥動學的角度，探討了麻黃與桂枝配伍使用后，效應成分起到了協同的作用，復方配伍給藥可能影響其他藥物有效成分的吸收程度及消除速率，其內在的作用機制有待大量的實驗研究。

(致謝：感謝廣東省中藥制劑重點實驗室為本實驗的開展提供相關實驗耗材與儀器設備。真誠感謝實驗室各位同學、老師在實驗中給予我的指導和幫助。)

參考文獻：

[1]胥慶華. 中藥藥對大全[M]. 北京：中國中醫藥出版社, 1997, 1.

[1]Xu Q H.EncyclopediaoftraditionalChineseMedicine[M].Beijing: Chinese Press of Traditional Chinese Medicine, 1997, 1.

[2]陳華章.《千金方》麻黃與桂枝相伍探析[J]. 中醫藥通報, 2006, 4(5): 23-5.

[2]Chen H Z. Analysis on the combined Ephedra with Cinnamomi in thousand golden prescriptions[J].TraditChinMedJ, 2006, 4(5): 23-5.

[3]徐文杰, 陳飛龍, 謝穎, 羅佳波. 不同配伍配比對麻黃-桂枝藥對有效成分含量的影響[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2012, 10(18):84-8.

[3]Xu W J, Chen F L, Xie Y, Luo J B. Content of active compounds in water extracts of ephedra with cinnamomi by compatibility of different ratio[J].ChinJExpTraditMedForm, 2012, 10(18):84-8.

[4]徐文杰. 麻黃類藥對組成規律的基礎研究—麻黃桂枝藥對I[D]. 廣州：南方醫科大學, 2012.

[4]Xu W J. Basic Research on the composition rules of herba ephedrae couplet medicines—couplet medicines of Herba Ephedrae-Ramulus Cinnamomi I[D]. Guangzhou: Southern Medical University, 2012.

[5]李佳蓮, 方磊, 張永清,等. 麻黃的化學成分和藥理活性的研究進展[J]. 中國現代中藥, 2012, 7(14):21-7.

[5]Li J L, Fang L, Zhang Y Q, et al. Research progress on chemical constituents and pharmacological activities of Ephedra[J].ModChinMed, 2012, 7(14):21-7.

[6]劉江云, 楊學東, 徐麗珍, 楊世林. 桂枝的化學成分研究[J]. 中草藥, 2002, 8(33):681-3.

[6]Liu J Y, Yang X D, Xu L Z, Yang S L. Studies on chemical constituents in dried tender stem of Cinnamomum cassis[J].ChinTraditHerbDrugs, 2002, 8(33):681-3.

[7]Yuan J H, Dieter M P, Bucher J R. Toxicokinetics of cinnamic aldehyde in F344 rats[J].FoodChemToxicol, 1992, 30(12):997.

[8]楊軍, 鄭法雷. 馬尿酸與尿毒癥[J]. 國外醫學泌尿系統分冊, 1989, 9(4):145.

[8]Yang J, Zheng F L. Hippuric acid and Uremia[J].UrolNephrolForeignMedSci, 1989, 9(4):145.

[9]甘萍, 霍仕霞, 白鵬, 等. 類葉升麻苷在大鼠體內的藥代動力學及組織分布研究[J]. 中國藥理學通報, 2014, 30(3)：417-20.

[9]Gan P, Huo S X, Bai P, et al. Pharmacokinetics and tissue distribution study on acetoside in rats[J].ChinPharmacolBull, 2014, 30(3)：417-20.

[10]Wei P, Huo H Y, Ma Q H, et al. Pharmacokinetic comparisons of five ephedrine alkaloids following oral administration of four different Mahuang-Guizhi herb-pair aqueous extracts ratios in rats[J].JEthnopharmacol, 2014, 155(1):642-8.

[11]王睿, 孫天慧, 景丹,等. 高效液相色譜法測定家兔血漿中桂皮酸的濃度及其藥代動力學初探[J]. 色譜, 2005, 23(3):273-5.

[11]Wang R, Sun T H, Jing D, et al. High performance liquid chromatographic determination of cinnamic acid in rabbit plasma and application in study of pharmacokinetics[J].ChinJChromatogr, 2005, 23(3):273-5.

[12]陳瑩蓉, 馬越鳴, 張寧,等. 高效液相色譜法測定大鼠血漿中桂皮酸和馬尿酸[J]. 藥物分析雜志, 2009, 29(2):212-6.

[12]Chen Y R, Ma Y M, Zhang N, et al. HPLC determination of cinnamic acid and hippuric acid in rat plasma[J].JPharmAnal, 2009, 29(2):212-6.

[13]Bogan D P, Kennedy R. Simultaneous determination of coumarin, 7-hydroxycoumarin and 7-hydroxycoumarin glucuronide in human serum and plasma by high-performance liquid chromatography[J].JChromatogrBiomedAppl, 1996, 686:267-73.

[14]Zhang J, Chen M, Ju W Z, et al. Liquid chromatograph/tandem mass spectrometry assay for the simultaneous determination of chlorogenic acid and cinnamic acid in plasma and its application to a pharmacokinetic study[J].JPharmBiomedAnal, 2010, 51:685-90.

Effects of combined administration of Ephedrae-Cinnamomi on pharmacokinetics of ephedra alkaloids, cinnamic acid and cinnamic alcohol in rats

WEI Ping1，2, CHEN Fei-long1, MA Qin-hai1, REN Meng-yue1, LUO Jia-bo1

(1.KeyLaboratoryofChineseDrugsPharmaceuticsofGuangdongProvince,CollegeofChineseTraditionalMedicine,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China; 2.ShenzhenPingshanMaternalandChildHealthHospital,Shenzhen518122,China)

Abstract:AimsTo compare the pharmacokinetics of ephedra alkaloids, cinnamic acid and cinnamic alcohol in Ephedrae, Cinnamomi and Ephedrae-Cinnamomi herb couple through UPLC-MS/MS in rats respectively, and to investigate the effect of combination on physiological disposition.MethodsPlasma samples were collected at different times after oral administration of Ephedrae, Cinnamomi and Ephedrae-Cinnamomi herb couple extracts. The concentrations of ephedra alkaloids, cinnamic acid and cinnamic alcohol in plasma samples were determined by UPLC-MS/MS. DAS 3.0 was used to calculate pharmacokinetic parameters. The differences of samples in two groups were conducted with univariate statistical analysis using SPSS 13.0.ResultsCompared with Ephedrae group, theCmaxof norephedrine hydrochloride, norpseudoephedrine hydrochloride, ephedrine hydrochloride, pseudoephedrine hydrochloride, and methylephedrine hydrochloride in Ephedrae-Cinnamomi herb couple group were significantly greater (P<0.05); the AUC0-tof norpseudoephedrine hydrochloride was significantly greater (P<0.05); the MRT0-tof norephedrine hydrochloride, phedrine hydrochloride, pseudoephedrine hydrochloride, and methylephedrine hydrochloride were significantly less (P<0.05); theT1/2zof norephedrine hydrochloride, phedrine hydrochloride, and methylephedrine hydrochloride were significantly less (P<0.05). The AUC0-tand MRT0-tof cinnamic acid and cinnamic alcohol were significantly greater than those in Cinnamomi group(P<0.05).ConclusionThe combination of Ephedrae and Cinnamomi improves the absorption concentration of five ephedra alkaloids, Slows down the elimination of norephedrine hydrochloride, phedrine hydrochloride, pseudoephedrine hydrochloride, and methylephedrine hydrochloride, and increases the bioavailability of cinnamic acid and cinnamic alcohol.

Key words:Ephedrae; Cinnamomi; Ephedrae-Cinnamomi herb couple; ephedra alkaloids; cinnamic acid; cinnamic alcohol; plasma pharmacokinetics; UPLC-MS/MS

收稿日期:2016-01-11,修回日期:2016-02-26

基金項目：國家自然科學基金資助項目(No 81030066)

作者簡介：衛平(1981-), 女, 博士, 主管藥師, 研究方向: 藥物分析及中藥藥代動力學, Tel:0755-66858751,E-mail:weiping1238@126.com;

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.06.026

文獻標志碼：A

文章編號：1001-1978(2016)06-0873-08

中國圖書分類號：R-332；R284.1；R282.71；R289.1；R969.1

網絡出版時間：2016-5-25 15:39網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160525.1539.052.html

羅佳波(1947-), 男, 教授, 研究方向:中藥復方制劑組方原理及配伍規律,Tel:020-61648266,E-mail: Luojb_smu@163.com