Smac和Livin在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達及意義

譚美英　張楊

【摘要】 目的：探討Smac和Livin在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達及臨床意義。方法：采用免疫組化法檢測宮頸鱗狀細胞癌、宮頸上皮內瘤變、正常對照者的組織標本中的Smac和Livin的表達，并將宮頸鱗狀細胞癌中Smac和Livin表達的相關性進行分析。將收集的石蠟包埋組織標本制成組織芯片，應用免疫組化染色SP法檢測Smac和Livin蛋白的表達。結果：宮頸癌組、內瘤變組、正常組Smac的陽性表達率分別為91.67%、62.50%、0，宮頸癌組、內瘤變組、正常組Livin的陽性表達率分別為91.67%、90.63%、22.22%。Smac和Livin測定結果的陽性率最高值均出現在宮頸癌組，明顯高于其他兩組，差異均有統計學意義（P<0.05）。且宮頸鱗狀細胞癌中Smac和Livin的表達呈正相關。結論：Smac和Livin的表達與宮頸鱗狀細胞癌的發生和發展密切相關，可能協同參與調控細胞的凋亡。

【關鍵詞】 宮頸鱗狀細胞癌； Smac； Livin

中圖分類號 R714.2 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2016）9-0093-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.9.052

宮頸鱗狀細胞癌是嚴重威脅女性健康的疾病之一，近年來發病趨勢有所上升。目前對于宮頸鱗狀細胞癌，手術切除是其主要的治療方式，放療和化療是重要的輔助手段[1]。為了尋找更為有效的治療方法，需對宮頸鱗狀細胞癌的發生發展機制有進一步的研究。本研究檢測宮頸鱗狀細胞癌組織中存活蛋白（Livin）和線粒體促凋亡蛋白（Smac）的表達，旨在為研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年12月-2014年12月在筆者所在醫院接受手術切除并被臨床病理學明確診斷為原發性宮頸鱗狀細胞癌組織標本（宮頸癌組）24份作為研究對象，標本所屬患者年齡27～65歲，平均46歲。腫瘤的直徑為2.1～4.7 cm，平均3.4 cm。同時另選取64份宮頸上皮內瘤變組織標本（內瘤變組）和18份正常宮頸組織標本（正常組）作為對照，選取的所有患者術前均未進行化療、放療和免疫治療，且所有患者均無其他嚴重內科疾病或者是其他惡性腫瘤。宮頸癌組和內瘤變組患者性別、年齡、病情、手術方式等比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有標本均經過甲醛液固定以及石蠟包埋后，制作成組織芯片[2]。免疫組化染色多克隆抗體Smac購自于Santa Cruz Biotechnology（美國），二抗試劑盒由福建邁新生物技術開發有限公司提供，免疫組化染色多克隆抗體Livin購自于武漢博士德公司。采用EnVisionTM法進行免疫組化染色，嚴格按照說明書進行操作。陽性對照切片購自于試劑公司，PBS替代一抗作為陰性對照[3]。

1.3 結果判斷標準

背景染色清晰，Livin和Smac陽性細胞均為胞質著色，呈棕黃色或棕黃色顆粒[4]。參照Bachtiary的方法在高倍鏡下隨機選取視野5個，每個視野計數200個細胞，結合染色情況，弱（1分），清晰（2分），強（3分）；陽性細胞數小于1.0%（0分），1.0%～10.0%（1分），11.0%～50.0%（2分），51.0%～80.0%（3分），大于80%（4分），綜合兩項評分，總分≥3則判斷為陽性表達，總分<3則判斷為陰性表達。由兩位病理科醫師獨立閱片確定免疫組化結果，如存在不一致協商后統一意見，同時分析Livin和Smac相關性[5]。

1.4 統計學處理

采用SPSS 19.0軟件對文中所得數據進行統計學分析，計數資料采用字2檢驗，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組Smac測定結果比較

正常組Smac陽性率為0，內瘤變組Smac的陽性率為62.50%，宮頸癌組中Smac陽性率為91.67%；Smac測定結果陽性率最高值在宮頸癌組中，明顯高于其他兩組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1和圖1。

2.2 各組Livin測定結果比較

正常組Livin陽性率為22.22%，內瘤變組Smac的陽性率為90.63%，宮頸癌組Smac陽性率為91.67%。Livin測定結果陽性率最高值在宮頸癌組中，明顯高于其他兩組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2和圖2。

2.3 相關性分析

宮頸鱗狀細胞癌中Smac和Livin的表達呈正相關（P<0.05）。

3 討論

宮頸鱗狀細胞癌屬于女性常見惡性腫瘤之一，發病率呈逐年升高趨勢。其發病機制目前尚未闡明，宮頸鱗狀細胞癌的治療已成為臨床工作者研究的重點[6]。研究顯示，腫瘤生長與細胞增殖和凋亡密切相關。因此，腫瘤發生的關鍵是調節細胞凋亡基因[7]。作為一種可與多種凋亡蛋白抑制劑（IAPs）分子結合的凋亡因子，Smac在調控細胞凋亡過程中具有重要作用。各種凋亡刺激Smac可使其與細胞色素C同時從線粒體釋放，在結合IAPs情況下解除IAPs抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶，加速細胞凋亡。研究指出，不同組織中Smac表達存在差異，非小細胞肺癌、肝癌及宮頸癌中高表達，胃癌中則低表達。Livin基因是一種新發現的IAP成員，可在胚盤、胚胎組織、乳腺癌、非小細胞肺癌、胃癌、前列腺癌、結腸癌、膀胱癌及黑色素瘤等中表達。Livin蛋白主要在細胞質中表達，通過半胱氨酸蛋白水解酶（如Caspases3/7和Caspases-9等）和LivinBIR區抑制Caspases蛋白活性，阻斷凋亡受體而發揮作用。其在多數正常成人組織中不表達或低表達，在大部分惡性腫瘤中表達較高。因此，Livin和Smac表達對宮頸鱗狀細胞癌的進展具有重要意義[8]。本文通過免疫組化染色法檢測宮頸癌組、內瘤變組和正常組Smac和Livin，研究結果顯示，宮頸癌組患者的Smac和Livin的表達均明顯高于內瘤組和正常組，差異有統計學意義（P<0.05），證實了Smac和Livin的表達在宮頸鱗狀細胞癌中的價值。此外，宮頸癌組、內瘤變組和正常組中Livin和Smac表達比較差異均有統計學意義（P<0.05），說明這兩種蛋白的表達具有相關性，可能協同參與了細胞凋亡通路的調節，從而促進宮頸鱗狀上皮病變的發生和發展[9]。這為今后宮頸鱗狀細胞癌的治療提供了新的研究靶點和方向[10]。

綜上所述，Smac和Livin表達與宮頸鱗狀細胞癌的進展存在相關性，對其進行研究可為宮頸鱗狀細胞癌的臨床治療提供參考。

參考文獻

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[10]劉秀芳，王炳勝，熊正文，等.微血管密度及增殖細胞核抗原表達與宮頸癌放射敏感性的關系初探[J].中國腫瘤臨床與康復，2005，12（2）：100-102.

（收稿日期：2015-11-06）