薄荷及其飲片質量控制研究進展

周文菊 豆小文 楊美華 韓旭 趙明 歐陽臻

2外源性污染物研究

薄荷及加工產品薄荷油和薄荷腦是我國重要的出口產品，藥材種植源頭、采收、加工、運輸和儲藏暴露的環境等因素造成的產品質量安全性問題不容忽視。一直以來，薄荷及其飲片容易受到如重金屬及有害元素、農藥殘留、真菌毒素等外源性有害物質的污染而導致薄荷及其飲片的質量難以符合要求，嚴重滯后了我國中藥材現代化、國際化的步伐。

2·1重金屬及有害元素污染薄荷屬于多年生草本，植株在生長過程中會主動吸收與富集環境（土壤、空氣、水等）中及種植或養殖過程中所施加的農藥、化肥、飼料等中的重金屬及有害元素等污染物，且在生產過程（采收、加工、輔料、包裝、貯存、運輸）中帶入的重金屬及有害元素^[14-15]，極易造成藥材中重金屬及有害元素超標的現象。攝入體內的重金屬及有害元素一旦蓄積，極易引發免疫系統障礙，神經、內分泌、肝、腎功能損傷，出現嚴重的中毒癥狀^[16-17]。嚴格控制薄荷藥材及其飲片中重金屬及有害元素的含量^[18-19]是首當其沖解決的問題。

鉛（Pb）、鎘（Cd）、砷（As）、汞（Hg）、銅（Cu）是目前薄荷及其飲片中研究較為主要的重金屬。美國藥典規定薄荷油中重金屬的限量標準為20 mg·kg^-1，日本藥典則規定薄荷中重金屬含量不得超過40 mg·kg^-1。不同來源和暴露在不同環境中的中藥材中的重金屬含量存在差異^[20]，且由于藥材本身遺傳特性、代謝等的不同，也會造成同一株藥材不同藥用部位重金屬含量存在差異^[21]。田林鋒等^[22]對薄荷不同器官中5種重金屬進行了檢測，結果發現，As，Hg，Pb含量在葉中最高，其次根，莖中最低；Cu的含量以根為最高，其次是葉，莖中最低；而Cd在黔薄荷根中含量最高，莖次之，葉最低，驗證了組織器官間重金屬含量差異顯著。王枚博等^[23]在檢測10種中藥材中15種有機元素時發現，5批薄荷藥材中汞含量超標，超標率為20%。欒爽等^[24]檢測到河北產薄荷中鉛的質量分數為7·07 mg·kg^-1，超過我國規定的限量標準（韓國、英國、法國、德國等規定的中藥材中鉛的限量為5 mg·kg^-1）。這也警示針對薄荷重金屬檢測取材的關鍵有賴于研究對象，需要做到取材的均一性和代表性。此外，以薄荷為原材的薄荷加工品，其重金屬監測也極為重要。

藥材加工炮制過程如煎煮等過程也會導致重金屬及有害元素發生轉移，從而影響終產品的質量^[25]，且不同的化學形態存在于中藥中的重金屬及有害元素，可能產生不同的活性^[26]。楊榮等^[27]研究表明，在中藥材中以可交換態和碳酸鹽結合態存在的重金屬容易遷移轉化，生物利用度高，但以鐵錳氧化物結合態、有機結合態和殘渣態存在的重金屬性質較為穩定，不易被人體吸收。然而，目前薄荷中重金屬及有害元素的研究仍舊停留在簡單的檢測層面，尚未系統的展開重金屬及有害元素的轉移、化學形態分析研究，因而不能完全把握薄荷的安全性。因此，在薄荷綜合質量控制方面還需深入探究。

2·2農藥殘留污染薄荷在生長過程中會經歷各種病蟲害現象。分枝期易發生霜霉病、白粉病、斑枯病等病害，尤其以白粉病發生較為常見；開花期是病害最為嚴重的階段，如黒莖病、銹病、病毒病、莖枯病、灰斑病、斑枯病、白絹病等，部分病害還會直接導致植株死亡。薄荷易受侵害的蟲害包括小地老虎、夜蛾類蟲、造橋蟲等^[28-30]。岳瑾等^[31]對北京市人工栽培薄荷病蟲害發生規律進行探究，發現露地栽培薄荷的常發蟲害為棉鈴蟲、煙青蟲，設施栽培薄荷的常發蟲害為溫室白粉虱、紅蜘蛛。為了預防病蟲害發生，保障薄荷產量，藥農往往選擇依賴農藥，如會選用40%甲胺磷乳油（EC） 1 500倍液、40%樂果EC 800倍液、2·5%溴氰菊酯（敵殺死）EC 1 000倍液等防止蚜蟲，用90%敵克松可濕性粉劑（WP）500倍液噴霧防治白粉病，用75%百菌清WP500倍液噴防灰斑病等的方式來防止病蟲害的發生。然而，不合理規范施藥必然導致農殘超標現象發生，從而影響了薄荷的質量和用藥安全。

近年來，薄荷質量急劇下降，韓國根據中國薄荷殘留農藥超標現狀，將加強對中國出口薄荷中多菌靈、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、惡唑菌酮、氰戊菊酯的檢查項目。臺灣地區“食藥署”也檢出大陸出口的干薄荷葉中殘留農藥多菌靈、氯蟲苯甲酰胺、多效唑、甲拌磷、三唑酮、莠去津、氯氟氰菊酯、氰戊菊酯及氯氰菊酯嚴重超標。目前國內外對薄荷及其飲片中的農藥殘留研究報道甚少。前期研究顯示，薄荷及其飲片中農殘污染的品種主要為有機磷類和有機氯類。何鵬等^[33]對薄荷中的10種農藥進行同時測定，結果在薄荷藥材中檢出了聯苯菊酯、氯氰菊酯、順式氰戊菊酯。徐彥君^[34]對三唑酮、氰戊菊酯和殺螟硫磷在薄荷中的殘留和轉移規律進行了研究。結果表明3種農藥都在薄荷中有殘留。此外，還發現，薄荷隨著加工過程，這3種農藥會發生轉移、降解、揮發的現象，但是殺螟硫磷在薄荷上的用藥會對食用薄荷加工后各種產品的一般人群產生不可接受的風險。但是，此研究的薄荷只局限于田間，尚無市場流通的薄荷及其產品中農殘檢測的研究。因此，急需建立行之有效的檢測手段應用于市場上實際的薄荷及相關產品的農殘檢測研究。

2·3真菌毒素污染真菌毒素（mycotoxin）是由真菌產生的有毒次級代謝產物。目前，已發現的真菌毒素有400多種^[35]。研究證明，對中藥材中真菌毒素的研究遠遠少于對谷物食品，特別是對類似薄荷等含有揮發性抑菌成分的中藥材^[36]。傳統意義上揮發性成分可以抑制真菌毒素的生長，避免毒素的產生，故對此類藥材中真菌毒素關注較少。然而，國內外研究表明薄荷作為藥食兩用中藥，亦存在真菌毒素嚴重污染的現象。匯總近年來薄荷中真菌毒素的研究情況表明（表2），曲霉屬Asperigillus和青霉屬Penicillium真菌在薄荷中發生頻繁，且Penicillium spp·作為薄荷中最主要污染菌種，在經過包裝的藥材中真菌的污染率比未經包裝的污染率高，這可能與溫度和濕度有關。同時表明，Penicillium屬真菌易浸染儲藏中的薄荷藥材，合理的包裝儲藏有利于減少真菌的污染的發生。此外，秦筱茂^[37]通過對9種藥材中真菌種類及污染真菌毒素進行研究，從薄荷葉中分離得到交鏈孢屬Alternaria真菌，薄荷葉的個子（藥用植物采收后，經簡單清理加工的藥材稱為個子貨藥材）和飲片中分離得到的真菌的種類有所不同，個子存在Alternaria 菌和毛霉屬Mucor菌的污染，而飲片則為Aspergillus屬菌和枝孢霉屬Cladosporium菌的污染，產生這種情況的原因很可能加工過程造成了其他真菌的滋生，多步加工工藝增大了污染真菌的幾率。

目前，2015年版藥典尚無薄荷藥材中真菌毒素的限量規定，基于薄荷藥材及其產品的日用劑量，真菌毒素的污染，建立薄荷藥材中真菌毒素的風險評估迫在眉睫。此外開展薄荷藥材中多毒素檢測的質量控制手段應用于種植、采收、加工、儲藏、流程整個過程中的監測措施也極為重要，關注薄荷藥材及其飲片中真菌毒素的污染進而控制藥材及飲片品質，降低服用者的中毒風險。

3內在質量研究

3·1藥效成分研究目前，我國現行的中藥材及其飲片質量控制的基本模式以化學成分定性鑒別與指標成分檢測為主。2015年版《中國藥典》中以揮發油的含量作為薄荷藥材及其飲片的質量評價指標，并規定薄荷藥材中揮發油不得少于0·80%（mL·g^-1），薄荷飲片中揮發油不得少于0·40%（mL·g^-1）^[13]，多數研究者以薄荷腦的含量作為薄荷藥材及其飲片質量控制指標（表3）。但中醫理論指導下的中藥，檢測任何一種有效成分都不能體現其整體療效，且歐洲及其他國家藥典中規定了包括薄荷醇、檸檬烯、薄荷酮、異薄荷酮等多指標含量要求（表4）。因此，以單一指標評價薄荷的內在質量可能存在片面性。

揮發油屬于薄荷中主要的藥效成分，包括醇、酮、酯、萜烯和萜烷類等，具有抗菌、抗氧化等活性，廣泛應用于化妝品、食品、藥品以及煙草等領域。薄荷腦占薄荷揮發油成分的80%左右，為主要組分，具有廣泛的藥理活性，如消炎、止痛、止癢、促進血液循環、減輕浮腫、健胃、驅風等。薄荷揮發油和薄荷腦是我國出口的大宗產品，也是用途最廣和用量最大的天然香料之一，可作為指標性成分來評價薄荷藥材及其飲片的內在質量。但薄荷油和薄荷腦的性質極其不穩定，薄荷油的組成和含量會受到種間的差異（遺傳）、種內的差異（主要由地理環境、海拔、光照、溫度、濕度等生態環境引起）^[47]、批間、產地、不同部位（如花序、葉、莖、根）^[48]、播種期（播種期對薄荷油的含量有顯著影響，對品質影響不明顯）^[49]、栽培條件（包括施肥量、施肥方式與時期、氮源、礦質離子濃度、種植密度、生長激素等）^[50-53]、采收時間^[54]和采收時的氣象因子^[55]、加工、炮制、儲藏（包括濕度、溫度、時間）、包裝形式^[56]等因素的影響，尤其是儲藏，會引起薄荷變色、氣味失散、蟲蛀等現象^[57]，這些現象必然導致薄荷的質量良莠不齊。薄荷揮發油中含65種物質^[58]，除薄荷腦外，還有薄荷酮、胡薄荷酮、異薄荷酮、醋酸薄荷酯等成分，薄荷酮是薄荷揮發油中含量僅次于薄荷腦的成分，約占10%左右。僅將薄荷腦作為評價薄荷內在質量的指標，明顯不足以表征薄荷的整體質量。

此外，薄荷中還含有非揮發性成分，如黃酮類、有機酸、蒽醌類、氨基酸類等^[59]。黃酮類含量最高，主要包括黃酮和少量的黃酮醇化合物兩大類?，F代藥理學研究表明，薄荷黃酮類成分具有良好的抗病毒、抗氧化、抗炎等作用，與其臨床療效關系密切，也應視為含量控制指標，其中蒙花苷為主要的黃酮物質，具有良好的抗菌及醛糖還原酶活性抑制作用等^[60]；橙皮苷，其含量較高，有抗氧化、抗菌、抗癌、調節免疫力等作用^[61]；香葉木苷能增加靜脈張力，改善靜脈通透性，改善微循環，抗炎、抗腫瘤、治療糖尿病等^[62]；香蜂草苷能預防和治療出血性疾病^[63]等。有機酸，也有優異的生物活性，如迷迭香酸具有抗炎^[64]、抑菌^[65]、抗腫瘤^[66]、抗抑郁作用^[67]、神經保護作用^[68-69]等；咖啡酸具有抗炎、抗菌、抗病毒、升高白細胞及血小板等多種藥理作用^[70]。故僅以揮發油或薄荷腦的質量控制遠不能真實反映薄荷的整體藥效，難以實現薄荷及其飲片的全面評價和質量控制。