HPLC-MS/MS法檢測中成藥和食品中違法添加的10種降糖類藥物

隋海山王立娟戚 威

（1 山東省濰坊市食品藥品檢驗檢測中心，山東 濰坊 261041；2 濰坊市紅十字中心血站，山東 濰坊 261041）

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HPLC-MS/MS法檢測中成藥和食品中違法添加的10種降糖類藥物

隋海山1王立娟2戚 威1

（1 山東省濰坊市食品藥品檢驗檢測中心，山東 濰坊 261041；2 濰坊市紅十字中心血站，山東 濰坊 261041）

【摘要】目的 建立快速、準確HPLC-MS/MS法測定中成藥和食品中添加的10種降糖類藥物。方法 采用Waters Atlantis T3色譜柱（2.1 mm×100 mm，5 μm）；用含0.01 mol/L的乙酸銨水溶液（A）-甲醇（B）為流動相，梯度洗脫，流速為0.3 mL/min進樣量1 μL，選擇ESI離子源、正離子掃描、多反應監測（MRM）方式檢測，一級質譜、二級質譜，確定樣品中是否添加了降糖類藥物，并根據外標法計算添加藥物的準確量。結果 在上述色譜及質譜條件下，10種藥物的分離度良好，方法檢測限在0.6～30 ng/g，回收率91%～99%。結論 該方法簡便準確，靈敏度高，可作為保健品及中成藥非法添加降糖類藥物的測定方法。

【關鍵詞】MRM；液相色譜；質譜；非法添加；降糖藥

在日常工作中，食品和中成藥中檢出降糖類藥物的現象日益突出，有的含量較高，有的含量較低，造假者利用患者充分信任食品和中成藥的心理，肆意添加降糖類西藥，給廣大患者的健康帶來嚴重威脅。本文用HPLC-MS/MS法檢出了鹽酸苯乙雙胍、格列本脲、馬來酸羅格列酮，從保留時間、一級質譜、二級質譜三個方面判斷食品和中成藥中是否添加降糖類藥物，檢出違法添加西藥的種類同文獻［1］報道的一致。

1 研究方法與結果

1.1 儀器、試劑試藥：LC-20AD液相色譜儀-API4000+質譜儀，Thermo冷凍離心機，型號：ST-16R，Synthesis A10超純水系統，XS-205DU電子天平（德國梅特勒公司），KQ-200KDE型高功率數控超聲波清洗器（昆山超聲波儀器有限公司）。

甲醇（色譜純，默克公司）乙酸鈉（色譜純），實驗用水為超純水。

對照品鹽酸苯乙雙胍、格列本脲、鹽酸二甲雙胍、格列喹酮、格列吡嗪、鹽酸吡格列酮、格列齊特、格列美脲、瑞格列奈、馬來酸羅格列酮（中國食品藥品檢定院）。

1.2 溶液制備

1.2.1 對照品儲備液：準確稱取含鹽酸苯乙雙胍、格列本脲、鹽酸二甲雙胍、格列喹酮、格列吡嗪、鹽酸吡格列酮、格列齊特、格列美脲、瑞格列奈、馬來酸羅格列酮各10.0 mg，分別用甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，配成1 mg/mL儲備液，于4 ℃下保存，使用前用甲醇稀釋至所需濃度。

1.2.2 標準混合使用液1：分別準確吸取1.0 mL各對照品儲備液于100 mL容量瓶中用甲醇定容。

1.2.3 標準混合使用液2：準確吸取1.0 mL標準混合使用液1于100 mL容量瓶中用甲醇定容至刻度。

1.2.4 供試品溶液：取本品10粒，傾出內容物，研碎，混勻，精密稱取一次口服劑量的內容物，加甲醇25 mL超聲處理20 min，靜置，放冷，以8000 r/min離心15 min取上清液經0.22 μm微孔濾膜過濾后，取0.1 mL置100 mL容量瓶，用甲醇稀釋至刻度，作為供試液。

1.3 色譜條件：參考相關文獻［2］：采用Waters Atlantis T3色譜柱（2.1 mm× 100 mm，5 μm）；用含0.01 mol/L的乙酸銨水溶液（A）-甲醇（B）為流動相，梯度洗脫（0～30 min，30%～40% B，30～40min，40%→60% B，40～60 min，60%～70% B，60～70 min，70% B，70～72 min，70%～30%B，72～77 min，30%B；流速為0.3 mL/min進樣量1 μL。

1.4 質譜條件：離子源為電噴霧電離源，采用正離子模式檢測，CAD（噴撞氣）：4 psi；CUR（氣簾氣）25 psi；GS1（噴霧氣）65 psi；GS2（輔助加熱氣）65 psi；IS（離子化電壓）5500 V；TEM（溫度）600 ℃；采用多反應監測（MRM）。

1.5 方法與結果

1.5.1 線性關系及檢出限：取各對照儲備液，準確配制一系列不同濃度的混合標準溶液，重復進樣測定3次，以各物質特征碎片離子峰面積平均值（Y）對被測組分的的質量濃度（X，μg/mL）進行線性回歸，得回歸方程、相關系數和線性范圍及定量限。分別以信噪比（S/N）等于3和10為標準，測得10個待測組分的檢出限及定量限，見表1。

表1　10化合物的回歸方程、相關系數和線性范圍檢出限及定量限（n=3）

1.5.2 精密度和穩定性試驗：取同一批次樣品6份，按“1.2.4”項下方法制備供試品溶液，在優化的實驗條件下測定，測定峰面積，結果顯示各組分特征碎片離子峰面積的RSD為0.7%～3.0%，表明該方法有較好的精密度。

取同一批次樣品按“1.2.4”項下方法制備供試品溶液，在優化后的實驗條件下分別于0、2、4、6、8、10 h進行測定，測定峰面積，結果顯示各物質特征碎片離子峰面積的RSD為0.6%～3.0%，表明供試品溶液在10 h穩定。

1.5.3 樣品含量測定：分別精密稱取不同批號的樣品，按“1.2.4”項下方法制備供試品溶液，在優化的實驗條件下進行含量測定，把各組分峰面積帶入回歸方程計算計算樣品的含量結果見表2。

表2　樣品測定結果（mg/一次口服劑量）

表3 加樣回收率試驗

1.5.4 加樣回收率試驗：各取未含降糖類藥物的空白基質丸劑、膠囊劑、片劑一次劑量，照表3添加對照品量。

2 討 論

2.1 本文參照國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2009029的方法進行了HPLC的檢驗，原標準將鹽酸二甲雙胍和鹽酸苯乙雙胍和其余8種物質分開，用不同的液相色譜方法檢驗，本文用一種液相色譜方法同時檢測10種成分，提高了效率。

2.2 本文梯度洗脫程序較原標準延長了30 min，在75 min洗脫出了較多雜質，10種成分也得到了較好分離。

2.3 HPLC-MS/MS法采用Waters色譜柱，柱壓較低，在樣品處理上較HPLC-DAD法多稀釋了1000倍，各物質特征碎片離子峰面積卻達到了104，檢測出樣品含有鹽酸苯乙雙胍、格列本脲、羅格列酮3種違禁成分，與對照品的一級質譜和二級質譜高度匹配。

2.4 HPLC-MS/MS法采用正離子掃描，得到的是M+1質譜離子，鹽酸苯乙雙胍、鹽酸二甲雙胍、馬來酸羅格列酮溶解于甲醇后得到的是脫鹽的離子。參照文獻選用甲醇為溶劑。

參考文獻

［1］ 肖樹雄，李楊杰.由降糖中成藥和保健食品檢驗情況探索非法添加化學成分的系統快篩思路［J］.藥物分析雜志，2011，31（2）:418.

［2］ 張喆，高青，余倩.中藥制劑及保健品中違禁添加9種化學降糖藥的HPLC-MS/MS定性檢測［J］.中國醫藥工業雜志，2007，38（1）:39.

中圖分類號：R9

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）01-0036-02