胃癌中β-catenin、ki-67和Her-2/Neu表達及對胃癌侵襲、轉移的影響

陳　超，姚莉敏

(1.信陽職業技術學院醫學院，河南信陽 464000；2.信陽職業技術學院附屬醫院，河南信陽 464000)

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胃癌中β-catenin、ki-67和Her-2/Neu表達及對胃癌侵襲、轉移的影響

陳超1，姚莉敏2

(1.信陽職業技術學院醫學院，河南信陽 464000；2.信陽職業技術學院附屬醫院，河南信陽 464000)

[摘要]目的探討β-連環蛋白(β-catenin)、增殖細胞核抗原ki-67和人表皮生長因子受體2(Her-2)/Neu在不同胃癌病理特征中的表達差異及在胃癌發生、發展和侵襲、轉移中的作用。方法分別采用免疫組化檢測150份胃癌組織(觀察組)和70份正常胃黏膜(經病理檢測無癌變作為對照組)中β-catenin、ki-67及Her-2/Neu的表達，分析β-catenin、ki-67及Her-2/Neu與胃癌病理特征的關系。結果觀察組患者β-catenin、ki-67、Her-2/Neu陽性率明顯高于對照組(χ2=30.51、63.74、11.38，P<0.01)；分化程度影響β-catenin、ki-67、Her-2/Neu表達(χ2=15.82、8.61、8.11，P<0.01)；淋巴結轉移影響β-catenin、ki-67表達(χ2=6.26，P<0.05；χ2=7.36，P<0.01)；侵潤深度影響β-catenin、ki-67表達(均χ2=11.34，P<0.01)； TMN影響ki-67、Her-2/Neu表達(χ2=10.85、14.24，P<0.01)；β-catenin和ki-67表達呈正相關。結論β-catenin、ki-67和Her-2/Neu可反映腫瘤細胞增殖、侵襲和轉移的情況，有助于對患者預后的判斷。

[關鍵詞]β-連環蛋白；ki-67抗原；基因，erbB-2；胃腫瘤

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，全球每年新增病例約100萬，將近40%病例發生在中國。侵襲和轉移是影響胃癌預后的主要因素，是導致患者死亡重要原因。多種胃癌的標志物與胃癌的侵襲和轉移有關。ki-67是一種與細胞增殖特異相關的核抗原，主要用于判斷癌細胞增殖活性。人表皮生長因子受體2(Her-2)/Neu是一個跨膜受體，其表達和活性與腫瘤的發生、發展密切相關[1]。本研究采用免疫組化檢測β-連環蛋白(β-catenin)、增殖細胞核抗原ki-67和Her-2/Neu在正常胃黏膜與胃癌組織中的表達，分析β-catenin、ki-67和Her-2/Neu與胃癌病理特征的關系。

1資料與方法

1.1一般資料選取本院2011～2013年實施手術切除并有完整隨訪資料的150例胃癌患者的存檔石蠟塊作為觀察組，另取胃鏡檢查經病理證實無癌變的新鮮正常胃黏膜組織70份作為對照組。觀察組：男101例，女49例；年齡35～75歲，平均(58.22±11.35)歲；黏液腺癌60例，管狀腺癌42例，印戒細胞癌48例。對照組：男55例，女15例；年齡36～77歲，平均(57.34±10.86)歲。兩組患者在性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要儀器和試劑LEICA RM2135切片機購自德國徠卡儀器有限公司；生物醫學微波爐購自上海醫療器械廠；顯微鏡CX-40購自日本Olympus公司；4 ℃冰箱購自海爾冰箱廠；JD801形態學圖像分析儀購自江蘇省捷達科技發展有限公司；Nikon eclipse E800光學顯微鏡、酶標儀購自日本Nikon公司；鼠抗人β-catenin單克隆抗體、兔抗人ki-67多克隆抗體、兔抗人Her-2/Neu多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司；SP免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2.2免疫組化方法石蠟塊連續切片，每片2.5 μm，60 ℃烤片過夜，二甲苯脫蠟2次，梯度乙醇復水，3%的過氧化氫溶液浸泡切20 min，檸檬酸鹽修復液高壓抗原修復，血清封閉組織45 min，ki-67(1∶100)、β-catenin(1∶50)和Her-2/Neu(1∶100)一抗孵育過夜，二抗孵育30 min，滴加有辣根酶標記的鏈霉卵白素液體孵育30 min，DAB顯色，蘇木素染液復染，封片觀察。β-catenin、ki-67和Her-2/Neu免疫組化染色陽性表達，見圖1。

A:β-catenin；B:ki-67;C:Her-2/Neu。

圖1β-catenin、ki-67和Her-2/Neu 免疫組化(SP×400)

1.2.3評價標準參照文獻[2]的標準，β-catenin陽性染色為細胞膜呈現棕褐色細小顆粒狀著色，ki-67陽性染色為細胞核內出現棕黃色顆粒，Her-2/Neu陽性染色為細胞膜棕黃色染色。判斷標準為陽性細胞打分+染色強度打分，0分為“-”，1～2分為“+”，3～4分為“++”，5～6分為“+++”。光鏡下計算陽性細胞數，0～10%為0分，>10%～<50%為1分，50%～<75%為2分，75%～100%為3分；染色強度，無染色0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。

1.3統計學處理所有數據采用SPSS12.0軟件進行統計分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Spearman相關系數檢驗分析指標之間的相關性。以P<0.05有統計學意義。

2結果

2.1兩組患者β-catenin、ki-67 和Her-2/Neu陽性率比較觀察組β-catenin、ki-67、Her-2/Neu陽性率明顯高于對照組(χ2=30.51、63.74、11.38，P<0.01)。兩組患者β-catenin、ki-67等陽性率比較見表1；觀察組患者中β-catenin、ki-67、Her-2/Neu陽性率分布見表2。

2.2觀察組患者β-catenin、ki-67及Her-2/Neu與胃癌病理特征的關系不同性別、年齡和瘤體大小患者的β-catenin、ki-67及Her-2/Neu比較，差異無統計學意義(P>0.05)；不同分化程度患者β-catenin、ki-67、Her-2/Neu比較，差異均有統計學意義(χ2=15.82、8.61、8.11，P<0.01)；有無淋巴結轉移患者β-catenin和ki-67比較，差異有統計學意義(χ2=6.26、P<0.05，χ2=7.36，P<0.01)；不同侵潤深度患者β-catenin和ki-67比較，差異有統計學意義(χ2=11.34，P<0.01)；不同TMN分期患者ki-67和Her-2/Neu比較，差異均有統計學意義(χ2=10.85、14.24，P<0.01)，見表3。

表1　　兩組患者β-catenin,ki-67等陽性細胞比較[n(%)]

表2　　觀察組患者β-catenin、ki-67等陽性細胞分布[n(%),n=150]

表3　　觀察組患者β-catenin、ki-67及Her-2/Neu與胃癌病理特征的關系[n(%),n=150]

2.3β-catenin、ki-67和Her-2/Ne相關性分析β-catenin和ki-67同時陽性患者為105例(70.00%)，同時陰性患者20例(13.33%)；通過2×2配對資料的關聯性分析，發現Pearson列聯系數r=0.501(P<0.01)，Pearsonχ2=40.511(P<0.01)；β-catenin和ki-67呈正相關，具有良好的一致性。β-catenin和Her-2/Neu同時陽性患者為3例，同時陰性患者3例；通過2×2配對資料的關聯性分析，發現Pearson列聯系數r=0.211(P>0.05)，Pearsonχ2=3.21(P>0.05)；β-catenin和Her-2/Neu無相關性，見表4、5。

表4　　觀察組β-catenin和ki-67關聯分析

表5　　觀察組β-catenin和Her-2/Neu關聯分析

3討論

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，在所有惡性腫瘤的病死率中高居第一或第二位，中國每年死于胃癌的人數約16萬人。胃癌是一種具有高度侵襲特性的惡性腫瘤，其轉移過程主要包括：腫瘤部位血管生成、黏附內皮細胞和基膜、細胞外基質和基膜、定位于繼發器官、腫瘤細胞增殖和血管生成[3]。腫瘤的轉移機制一直是困擾醫學界的難題，尋找提示轉移的腫瘤標記物、并建立行之有效的檢測方法和顯得尤為重要。如果僅僅依靠某些傳統的病理指標來評估患者的預后，并不能充分滿足臨床的需要，因此篩選和胃癌侵襲、轉移的相關腫瘤因子具有重要的意義。

ki-67主要表達在增殖細胞的細胞核中，它能夠識別細胞周期中核抗原上的一個抗原決定簇，與細胞的合成代謝有關，能較客觀地反映腫瘤的性質。ki-67與胃癌的相關性研究報道并不一致，有研究證實ki-67與腫瘤的分化程度、Lauren分型、淋巴轉移明顯相關[4]，但另一項研究中認為ki-67表達與腫瘤患者的年齡、性別、分期和預后等都無統計學差異[5]。而在本研究中，不同分化程度、是否淋巴結轉移、浸潤深度和TMN分期患者ki-67的表達比較差異有統計學意義(P<0.05)。

Her-2/Neu是目前已知的60余種腫瘤基因之一，Her-2/Neu在正常情況下處于非激活狀態，Her-2/Neu受各種因素激活后，導致細胞無序生長，運動、浸潤，轉移，可抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤新生血管生成，增加腫瘤細胞的侵襲力[6]。一般只在胎兒時期表達，成年后只能在極少數組織中發現其低水平表達。胃癌中Her-2/Neu陽性率各文獻報道為6%～43%[7]，在本研究中為16.67%。在乳腺癌和胃癌的細胞中雖然高表達了Her-2/Neu蛋白，但未見Her-2/Neu基因的擴增，為此本文并未檢測Her-2/Neu基因的表達水平。本研究中TMN分期患Her-2/Neu的表達差異有統計學意義(P<0.05)。

β-catenin是在細胞質和細胞膜中的一種單鏈多肽，具有介導細胞黏附及信號轉導雙重活性，參與Wnt信號轉導及酪氨酸蛋白激酶信號轉導途徑,在胚胎發育、細胞分化和增生及癌癥的發生過程中發揮重要的功能[8-9]。有研究報道，在結腸癌中高表達β-catenin的癌細胞多集中于腫瘤邊緣浸潤性較強部分[10-11]，這樣的表達模式有利于β-catenin參與癌細胞內信號的傳導，從而增加癌細胞的侵襲能力。本研究中分化程度、淋巴結轉移和侵潤深度均可影響β-catenin的表達，說明β-catenin的異常可指示胃癌細胞的侵襲和轉移能力。

綜上所述，β-catenin、ki-67及Her-2/Neu可反映腫瘤細胞增殖、侵襲和轉移的情況，胃癌術后檢測β-catenin、ki-67及Her-2/Neu表達水平，可一定程度反映胃癌的生物學特征，為臨床治療提供指導。

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Expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neuin in gastric carcinoma and their influence on infiltration and metastasis of gastrie carcinoma

ChenChao1,YaoLimin2

(1.MedicalCollege,XinyangVocationalandTechnicalCollege,Xinyang,Henan464000,China;2.AffiliatedHospitalofXinyangVocationalandTechnicalCollege,Xinyang,Henan464000,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression differences of β-catenin,Her-2/Neu and ki-67 in different pathological features of gastric cancer and their role in the occurrence,progression,invasion and metastasis of gastric cancer invasion and metastasis.MethodsThe expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu in 150 gastric cancer tissue samples(observation group) and 70 normal gastric mucosal samples were detected by adopting the immunohistochemistry method,and the relationship between the expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu with the pathological features of gastric cancer was analyzed.ResultsThe β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu positive rate in the observation group was significantly higher than that in the control group (χ2=30.51,63.74,11.38,P<0.01);the differentiation degree affected the expression of β-catenin,ki-67 and Her-2/Neu expression (χ2=15.82,8.61,8.11,P<0.01)；the lymph node metastasis affected the expression of ki-67 and β-catenin (χ2=6.26,P<0.05;χ2=7.36,P<0.01);the invasion depth affected the expression of β-catenin and ki-67(χ2=11.34，P<0.01)；TMN affected the expression of ki-67 and Her-2/Neu(χ2=10.85,14.24,P<0.01)；the β-catenin and ki-67 expression showed positive correlation.Conclusionβ-catenin,ki-67 and Her-2/Neu may reflect the proliferation,invasion and metastasis situation of tumor cells and their detection conduces to the judgment of prognosis.

[Key words]β-catenin;ki-67 antigen;genes,erbB-2;stomach neoplasms

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.18.017

作者簡介：陳超(1980-)，講師，在職碩士研究生，主要從事病理學研究。

[中圖分類號]R735.2

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)18-2504-03

(收稿日期：2015-12-01修回日期：2016-03-16)