脂肪酶試劑攜帶污染導致鈣離子檢測假性升高識別與處理

謝良才，劉天春，范　文，許　蓉，楊章元

(長江大學附屬第一醫院，湖北荊州 434000)

·臨床研究·

脂肪酶試劑攜帶污染導致鈣離子檢測假性升高識別與處理

謝良才，劉天春，范文，許蓉，楊章元

(長江大學附屬第一醫院，湖北荊州 434000)

目的研究貝克曼AU5400全自動生化分析儀中脂肪酶試劑攜帶污染對血清鈣離子檢測的影響和處理措施。方法通過復檢所有的血清鈣檢測標本，發現不符的檢測結果。將脂肪酶試劑(去離子水作對照)按5%體積比混入到血清中，比較鈣離子檢測值偏倚。將潛在的干擾試劑放置于不同的工作模塊或比色杯圈，防止干擾的發生。結果鈣離子原檢測系統復檢與原始檢測結果不符標本12份(3.82%)，脂肪酶試劑添加組與對照組鈣離子檢測值比較，差異有統計學意義(P<0.05﹚；脂肪酶試劑與鈣離子檢測試劑分入不同的比色杯圈，之后復檢血清鈣離子標本426份，未發現不符合。結論脂肪酶檢測試劑攜帶污染可以導致鈣離子檢測假性升高，將含潛在干擾物的試劑與鈣離子檢測試劑放入不同的比色杯圈，可以消除干擾。

試劑攜帶污染；鈣離子；脂肪酶；假性升高

筆者在臨床檢驗工作中偶然發現有血清鈣離子檢測結果不符合，出現假性升高，查看工作記錄，發現當日調整脂肪酶試劑位置將脂肪酶試劑調入鈣離子同一工作模塊，且均選擇內圈比色杯，檢測系統未見其他異常和改變，懷疑不符合是由于脂肪酶試劑攜帶污染引起。本研究參考美國臨床和實驗室標準化委員會(NCCLS)EP7-A2文件——《臨床生化干擾實驗批準指南》設計，旨在證實脂肪酶試劑攜帶污染是否會引起血清鈣離子檢測的假性升高。

1材料與方法

1.1標本來源所有血液標本來自長江大學附屬第一醫院門診、住院部患者，5 000 r/min離心8 min，分離血清，進行血鈣離子檢測。

1.2儀器與試劑貝克曼AU5400全自動生化分析儀購自美國貝克曼庫爾特有限公司(日本)。鈣離子檢測試劑購自寧波瑞源科技有限公司，脂肪酶檢測試劑購自寧波美康科技有限公司。

1.3方法

1.3.1不符合的識別與糾正復檢所有的鈣離子檢測標本，計算原始結果與復檢結果相對偏差，超過鈣離子檢測系統批間相對極差，認為復檢結果與原始結果不符的，對不符合檢驗報告及時糾正。實驗中全自動生化分析儀鈣離子檢測批間相對極差小于6%，以6%為干擾統計學標準。

1.3.2干擾物確認取血清標本10份，其中高血鈣離子標本1份，低血鈣離子標本2份，正常血鈣離子標本7份，每份再分裝于2支試管，1份按5%體積比混入脂肪酶檢測試劑納入試驗組，1份加入5%去離子水納入對照組。檢測試驗標本，對照標本的血鈣濃度。

1.3.3劑量效應關系依次按1%、2%、3%、4%、5%、10%不同體積比將脂肪酶試劑加入混合血清，檢測各不同比例試劑加入標本的鈣離子檢測值，分析脂肪酶試劑加入量與標本的鈣離子檢測值相關性。

1.3.4不符合糾正措施與預防措施換試劑盤中試劑位置，將脂肪酶的試劑與鈣離子檢測試劑分入不同的比色杯圈，通過1.3.1干擾識別的方法確認干擾是否消除。

1.4統計學處理采用SPSS19.0軟件進行數據處理及統計學分析。正態性檢驗采用擬合優度(K-S)檢驗，P>0.05為正態分布。正態分布資料，兩組間比較采用t檢驗(或配對t檢驗)，P<0.05為差異有統計學意義。相關性分析采用Spearman相關分析。

2結果

2.1干擾的識別與干擾物篩查復檢血清鈣離子檢測標本314份，血鈣離子原檢測系統復檢與原始檢測結果不符12份(3.82%)，平均相對偏差為24.04%，最大相對偏差為35.29%。

表1　標本血鈣離子原始檢測與復檢不符結果

注：表中只列出復檢結果不符合的標本數據。

2.2干擾物確認取10份血清標本，其中高血鈣離子標本1份，低血鈣離子標本2份，正常血鈣離子標本7份，試驗組與對照組血鈣離子檢測值比較，差異有統計學意義(t=19.26，P=0.00)。見表2。

2.3劑量效應關系將干擾試劑按不同體積比(1%、2%、3%、4%、5%、10%)加入血清標本，分別檢測各標本鈣離子值。脂肪酶檢測試劑添加比例與標本鈣離子檢測值呈線性相關(r2=0.95，P=0.00)，以6%相對偏差為干擾限，脂肪酶檢測試劑添加比例3%出現干擾，見表3、圖1。

表2　脂肪酶檢測試劑對鈣離子檢測的影響

表3　加入不同比例試劑后鈣離子檢測值(mmol/L)

注：&表示已校正試劑加入后的稀釋效應；*表示該值對照相對偏差超過6%。

圖1　添加物添加量與鈣離子檢測值劑量效應

2.4干擾的處理將脂肪酶檢測試劑與鈣離子檢測試劑分入不同的比色杯圈，之后采用1.3.1方法復檢高鈣離子標本426份，未發現不符合標本。

3討論

報道證實生化檢測試劑攜帶污染可對鎂離子[1-3]、總膽汁酸[4-6]、葡萄糖等項目檢測造成干擾[7-9]。

筆者工作中發現鈣離子檢測結果與歷史記錄不符，對當日送檢的334例鈣離子檢測標本復檢，共發現12例(3.82%)與原始檢測結果不符(相對偏差均超過檢測系統鈣離子批間相對極差6%)。12份標本兩次檢測結果平均相對偏差為24.04%，最大相對偏差為35.29%。12份均為假高血鈣離子檢測結果(本實驗室鈣離子生物參考區間2.10～2.70 mmol/L)，對不符合報告進行糾正。

12份不符合檢測結果全部出現在儀器大量標本檢測的高峰時期，獨立或少量標本檢測時未發現，在排查出標本、儀器、人員等因素時，發現當日儀器脂肪酶檢測項目試劑調入鈣離子檢測試劑同一工作模塊。懷疑檢測高峰期清洗不完全，試劑交叉污染導致鈣離子檢測值假性升高。

為進一步確認證實，向10份正常血清標本添加5%體積比的疑似干擾試劑，結果證實脂肪酶檢測試劑R1添加組與對照組鈣離子檢測值，差異有統計學意義(P=0.00)。認為脂肪酶試劑的攜帶污染可以引起血鈣離子檢測的假性升高。

為了明確干擾的劑量效應關系，分別以不同體積比將脂肪酶檢測試劑加入混合血清，結果顯示,脂肪酶檢測試劑添加比例與標本鈣離子檢測值線性相關(r2=0.95,P=0.00)，以6%相對偏差為干擾限，脂肪酶檢測試劑添加比例為3%時，標本鈣離子檢測結果出現不符合。

研究中發現假性升高的發生率為3.82%，由于試劑攜帶污染可以出現在比色杯、試劑加樣針、攪拌棒等部位，攜帶污染的影響與儀器狀況、試劑間相對位置有關。為消除干擾，脂肪酶檢測試劑與鈣離子檢測試劑設置在不同的比色杯圈。之后復檢鈣離子標本426例，未發現不符合。

脂肪酶檢測試劑攜帶污染可以引起血清鈣離子檢測假性升高，造成錯誤的檢測結果，尤其容易發生在大量標本檢測的高峰期，檢驗科應該重視。通過標本復檢可以發現由于試劑攜帶污染導致的生化檢測隨機誤差，對檢測系統試劑位置的調整、更換不同廠商試劑前應預先進行相關的驗證工作[10-12]，以證實該操作不會因試劑攜帶污染而導致檢測結果不符合的發生。

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2016-01-28修回日期：2016-03-18)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.034

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1673-4130(2016)12-1682-03