IFCC促甲狀腺激素國際溯源和檢測一致性系列研究(三)

于　翔，陳文霏，余小六，江　明，李　可，余枝廣

(廣東省深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司免疫試劑開發部　518057)

IFCC促甲狀腺激素國際溯源和檢測一致性系列研究(三)

于翔，陳文霏，余小六，江明，李可，余枝廣△

(廣東省深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司免疫試劑開發部518057)

目的采用邁瑞促甲狀腺激素(TSH)測定試劑盒，按照國際臨床化學和實驗室醫學聯盟(IFCC)甲狀腺功能檢測標準化委員會(C-STFT)提供的一致性研究方案，測試發放的第二期和第三期健康人體標本和病理標本，驗證經過第一期標本重校準后的邁瑞TSH檢測結果的一致性；同時嘗試將第三期標本作為標準血清盤，建立校準品的計量學溯源性。方法使用邁瑞標準試劑和工作校準品搭配測試IFCC發放的人體病理標本，與C-STFT提供的所有測量程序修剪均值(APTM)比對，評估一致性；使用第三期標本為邁瑞工作校準品賦值，評估重新賦值后的邁瑞TSH測試結果與APTM的一致性。結果使用Passing & Bablok回歸，邁瑞測試結果與APTM的斜率為1.0，相關系數(r)大于0.975；但如果采用IFCC第三期標本作為溯源鏈的最高等級對工作校準品重新賦值，再行計算標本TSH濃度，則結果與APTM不具有理想的一致性。結論通過測試C-STFT統一發放的血清盤和提供的APTM值，實現了邁瑞與國際參與廠家TSH檢測結果的一致性；但是，使用標準血清盤建立校準品計量學溯源性的方法還有待研究和商榷。

促甲狀腺激素；化學發光免疫分析法；國際臨床化學甲狀腺功能檢測標準化委員會；測量程序修剪均值

自2010年開始，國際臨床化學和實驗室醫學聯盟(IFCC)甲狀腺功能檢測標準化委員會(C-STFT)嘗試推出特定的血清盤及所有測量程序修剪均值(APTM)的概念，在全球范圍征集了具有代表性的10個廠家的檢測系統，包括羅氏、雅培、貝克曼、西門子、邁瑞等，分階段進行促甲狀腺激素(TSH)檢測結果一致性的可行性研究[1-2]。邁瑞于2014年加入TSH一致性可行性研究，免疫檢測系統CL-2000i和配套TSH試劑盒對首期20例健康人標本的測試結果，滿足C-STFT設定的精密度、批間差異控制和方法學比對等性能要求[3-4]；從而依次進入了第二期和第三期，除正常標本外，還包括甲狀腺功能減退和甲狀腺功能亢進癥等病理標本的研究工作。C-STFT結合所有參與廠家系統的測試結果，對邁瑞CL-2000i系統TSH測試結果的可靠性和一致性進行了客觀地評價；同時，邁瑞根據C-STFT的研究目的，嘗試將C-STFT發放的第三期標本作為校準品溯源鏈中的一個等級，研究C-STFT標準血清盤代替世界衛生組織(WHO)標準品(NIBSC 81/565)直接給校準品賦值的可行性。

1資料與方法

1.1一般資料第二期標本共89份，第三期標本共101份，包含甲狀腺功能減退、正常和甲狀腺功能亢進癥標本，均由Invent和Solomon Park Research Laboratories (www.solomonpark.com)兩個商務機構收集[5]。第三期高值標本部分來源于服用高劑量表達TSH藥物(Thyrogen)的患者，標本一式兩份，每份0.5 mL。標本長期凍存，運送過程溫度控制在-20 ℃以下。這些血清標本TSH的濃度，來自已經完成一致性研究的數個國際生產廠家檢測系統的具有代表性的測試結果[6]；C-STFT通過因子分析(FA)模型對廠家測試結果進行統計處理，一些明顯離群值被剔除，取而代之以模擬的數值，最終獲得各標本的APTM[7-8]。

1.2方法采用經第一期標本測試結果重校準后的邁瑞CL-2000i全自動化學發光免疫檢測系統，包括CL-2000i發光儀，及配套的TSH試劑盒、邁瑞工作校準品和甲狀腺功能復合質控品。測試前須完成儀器維護并通過基礎性能驗證。標本測試前后，甲狀腺功能復合定值質控品的測試結果均應在靶值±2s范圍內。

1.3C-STFT標本測試第二期標本共89份(其中6份因部分國際廠家TSH試劑盒檢測靈敏度過低，無法獲取濃度值，從而APTM值無法計算)；標本按隨機順序正序測試一次，再逆序測試一次，用以評估檢測系統隨時間的漂移，及監測可能發生的跳變。第二期標本測試結果通過C-STFT審核后，進入第三期標本的測試；第三期標本共101份，同一標本一式兩份，在不同的日期復融和開瓶，混勻后各測試一次，每個標本共得到兩批測試結果。

1.4C-STFT血清盤作為溯源標準的嘗試使用C-STFT第三期標本作為標準血清盤，以標本APTM為標定值，以邁瑞CL-2000i系統測試所得標本的相對發光值擬合4參數對數校準曲線，根據工作校準品的相對發光值測試結果，計算出邁瑞工作校準品的標定濃度；以邁瑞工作校準品新的標定濃度重新計算第一期和第二期的標本測試結果，并評估與APTM的一致性。

2結果

儀器基礎性能測試結果滿足要求。在C-STFT標本測試前、后，用邁瑞TSH試劑盒檢測內部質控結果均在靶值±2s內，系統均在控。第二期標本正序(Run 1)和逆序(Run 2)測試所得兩批測試結果的漂移和跳變分析見圖1，結果表明兩批測試結果之間無漂移和跳變。邁瑞測試結果均值相與APTM的相關系數(r)大于0.975；Passing & Bablok回歸線斜率約為1.0，見圖2；同時說明經過第一期標本測試結果重校準后，邁瑞測試結果與APTM已實現一致性，不需要再進行重校準。

圖1　第二期標本測試結果漂移與跳變

第三期標本兩批測試結果(Run 1和Run 2)無漂移和跳變，見圖3；邁瑞測試結果均值與APTM的r大于0.975，Passing & Bablok回歸線斜率在0.9～1.1，見圖4；以上分析均不包括系統檢測范圍以外的點；測試結果符合C-STFT的要求，已獲準參與第四期參考范圍的研究工作。

圖2　第二期標本Passing & Bablok回歸

圖3　第三期標本測試結果漂移與跳變

圖4　第三期標本Passing & Bablok回歸

注：WHO為世界衛生組織，IFCC為國際臨床化學與實驗室醫學聯盟；APTM為所有測量程序修剪均值。

圖5校準品溯源鏈

筆者嘗試根據C-STFT的意圖，將標準血清盤作為校準品溯源鏈的一個等級，見圖5，建立邁瑞TSH校準品計量學溯源性；使用第三期標本校準邁瑞CL-2000i系統為邁瑞工作校準品賦值，獲得系統主校準曲線，見圖6；使用該校準曲線重新校準計算C-STFT第一期和第二期標本的濃度值，并評估與APTM的一致性。結果表明如果邁瑞校準品溯源至C-STFT第三期病理血清盤，則難以實現C-STFT第一期和第二期標本測試結果與APTM的一致性，見圖7～8。

圖6　新建主校準曲線

圖7　第一期標本測試結果重新計算

圖8　第二期標本測試結果重新計算

3討論

對于第二期和第三期標本，C-STFT匯總各個參與廠家的測試數據，結果顯示病理標本比第一期的正常標本趨于復雜，數據質量有所下降；在低值區域，有3～6個國際廠家檢測系統靈敏度過低，對小于0.04 mIU/L的標本測量誤差過大，不能給出可靠的濃度值，無法納入APTM的統計計算；大約有2%左右的標本檢測結果在某些系統呈現為離群值，需要模擬出替代值用于APTM的計算。

對于第一期健康人體標本的測試，邁瑞根據測試結果對校準曲線進行了修正，實現了與APTM的一致性；但是這個過程并沒有建立計量學溯源性，因為校準品濃度值與C-STFT標本之間并無校準溯源鏈聯系。目前廠家廣泛使用WHO的TSH標準品可能存在基質效應和互換性問題。因此，筆者嘗試借助濃度覆蓋整個檢測范圍的第三期標本，對邁瑞校準品進行賦值實驗，驗證具有APTM標定值的C-STFT血清盤用以替代WHO標準品是否可行。結果表明，直接由血清盤為校準品賦值，很難實現真實標本在不同檢測系統上最終測試結果的一致性。其主要原因是血清盤標本濃度的分布不均和高濃度標本測試質量的影響：大多數標本的濃度主要集中在參考范圍附近，但較少數的高值標本由于濃度值遠大于參考范圍濃度，在擬合校準曲線時所占權重較大；因此高值測試結果的少許偏離，都會直接影響主校準曲線的形狀，并最終導致了標本測試結果失去了一致性；這將是所有廠家在嘗試使用C-STFT血清盤為校準品賦值時所面臨的一個共同的問題。

綜上所述，使用C-STFT未來推出的標準血清盤作為TSH校準品溯源鏈的一個等級，對于實現不同檢測系統測試結果的一致性可能存在風險；需要對標準血清盤的制備方法和使用方法，與IFCC及其他國際代表性廠家進一步研究和探討。

[1]Thienpont LM.Traceability to a common standard for protein measurements by immunoassay for in-vitro diagnostic purposes[J].Clinica Chimica Acta,2010,411(23):2058-2061.

[2]van Uytfanghe K,Linde A,Thienpont LM.A “Step-Up” approach for harmonization[J].Clinica Chimica Acta,2014,432(1):62-67.

[3]閆玉峰，張娟，李可，等.IFCC促甲狀腺性激素(TSH)國際溯源和檢測一致性系列研究[J].國際檢驗醫學雜志，2016，37(4)：496-498.

[4]于翔，陳文霏，余小六，等.IFCC促甲狀腺性激素(TSH)國際溯源和檢測一致性系列研究(二)[J].國際檢驗醫學雜志，2016,37(6):751-753.

[5]van Houcke SK,Thienpont LM.“Good samples make good assays”-the problem of sourcing clinical samples for a standardization project[J].Clin Chem Lab Med,2013,51(5):967-972.

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[7]Stǒckl D,Van Uytfanghe K,van Aelst S,et al.A statistical basis for harmonization of thyroid stimulating hormone immunoassays using a robust factor analysis model[J].Clin Chem Lab Med,2014,52(7):965-972.

[8]van Houcke SK,van Aelst S,van Uytfanghe K,et al.Harmonization of immunoassays to the all-procedure trimmed mean-proof of concept by use of data from the insulin standardization project[J].Clin Chem Lab Med,2013,51(5):e103-e105.

2016-01-28修回日期：2016-03-18)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.054

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1673-4130(2016)12-1719-03

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