白花蛇舌草的體外抗腫瘤活性研究

鄧鳳蕓

【摘 要】 目的：應用白花蛇舌草提取物進行體外結腸癌HT-29細胞株、結腸癌HCTI16細胞株的抑制實驗，觀察白花蛇舌草提取物的抗腫瘤活性。方法：通過體外培養的方法培養人結腸癌HT-29細胞株和結腸癌HCTI16細胞株，對比分析不同濃度白花蛇舌草提取物對細胞株的影響。結果：白花蛇舌草提取物對HT-29、HCTI16細胞株的影響為：3mg/ml濃度時抑制率分別為（25.64±1.36）%、（27.36±1.87）%；5mg/ml濃度時抑制率（37.25±2.01）%、（39.01±1.65）%；7mg/ml濃度時抑制率（49.87±1.68）%、（51.22±2.33）%，其抑制率均優于對照組（P<0.05）。結論：白花蛇舌草提取物可有效抑制結腸癌HT-29細胞株以及結腸癌HCTI16細胞株的增值，具有顯著的抗腫瘤效果。

【關鍵詞】 白花蛇舌草；提取物；結腸癌HT-29細胞株；結腸癌HCTI16細胞株；凋亡作用

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）11-0007-01

腫瘤在患病人群中的致殘率及致死率居高不下，是較為難治的一類疾病。西醫對于腫瘤的治療常采用切除手術治療以及放化療治療等，但治療費用昂貴，且對機體損害極大[1]。中醫藥及其提取物屬于天然藥材，具有極高的生物活性，且中藥臨床應用的不良反應相對較小。為了觀察白花蛇舌草提取物的抗腫瘤活性，本研究通過體外實驗的方法觀察其對結腸癌HT-29細胞株以及結腸癌HCTI16細胞株的抑制率。

1 儀器與材料

1.1 儀器 低溫離心機（SIGMA公司生產，型號2-16PK）、酶標儀（上海賽默飛世爾公司生產，型號MK3）、顯微鏡（日本尼康公司生產，型號ECLIPSE TS-100）。

1.2 材料 白花蛇舌草由醫院藥房提供。RPMI1640培養基（上海博生生物科技有限公司生產，LM-R1641/500）；噻唑藍（MTT）干粉（北京索萊寶科技有限公司生產，M8180-1）；（上海國源生物技術有限公司，9002-07-7）、胎牛血清（上海玉博生物科技有限公司，16000-044）。結腸癌HT-29、HCTI16細胞株由本市醫學科學院基礎醫學研究所贈。

2 方法

2.1 藥液的制備 白花蛇舌草應用85%乙醇進行回流提取兩次，過濾，回收乙醇，將過濾液濃縮至1.05的相對密度，然后進行噴霧干燥得白花蛇舌草粉末提取物。將提取物溶于40%DMSO中，制備成0.4g/ml的溶液，備用。

2.2 方法 在含有胎牛血清的RPMI1640培養基中分別加入結腸癌HT-29細胞株、結腸癌HCTI16細胞株，分別置于細胞培養箱中進行體外培養。培養后取對數生長期的結腸癌HT-29細胞株及結腸癌HCTI16細胞株，應用胰蛋白酶進行消化處理，制成細胞懸浮液進行細胞計數。將細胞懸液的細胞計數密度限定在1×105個/ml，分別加入0mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml的白花蛇舌草溶液，于96孔培養板進行接種24h培養。再加入0.5mg/ml的MTT溶液37℃下進行4h的孵育，后加入DMSO進行混勻震蕩。

2.3 指標的測定 室溫下靜置后進行吸光度值測定，計算不同濃度下的平均抑制率。結腸癌細胞株的抑制率=（對照組吸光度值-觀察組吸光度值）/對照組吸光度值×100%。

2.4 統計學方法 數據采用SPSS18.0軟件統計分析，計量資料用（x±s）表示，并用t檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

由表1可知，不同濃度的白花蛇舌草提取物對結腸癌HT-29細胞株、結腸癌HCTI16細胞株的抑制率均顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。

4 討論

腫瘤屬于中醫“積聚”的范疇，是由于機體受到外界邪毒入侵，體內正氣虧虛，導致正虧邪實而誘發腫瘤的發生。腫瘤發生早期主要為風濕熱毒邪入侵機體，導致機體邪實癥狀[2]。隨著腫瘤的不斷發生發展，機體正氣耗損，從而出現較為顯著的虛證癥狀。另外，飲食結構因素及自身情志失暢等，可使邪毒入侵所致的臟腑損傷以及氣滯血瘀狀態加重，導致腫瘤的不斷進展。中藥有效成分的提取分離在中藥產業中得到廣泛關注，通過藥物有效成分的提取純化，可在不同程度上提升藥物的臨床藥效。

中藥及其提取物在抗腫瘤的應用研究較為廣泛，其作用機制復雜，主要體現在誘導癌細胞凋亡、抑制腫瘤血管生成、誘導腫瘤細胞分化以及逆轉腫瘤細胞耐藥性等幾個方面。目前，抗腫瘤治療較為理想的機制即為誘導腫瘤細胞的凋亡[3]，而細胞凋亡的自我破壞機制由基因決定。中藥及其提取物可使腫瘤細胞自身的基因受到直接性的損傷，從而使其處于病理狀態。[JP+1]腫瘤細胞的周期性分裂受到阻礙，基因表達受到抑制，腫瘤細胞停止擴增，發生程序性凋亡，從而起到抗腫瘤的作用。另外，隨著腫瘤的不斷生長，其可刺激新生腫瘤血管的出現，并不斷為腫瘤的生長提供營養供給。但腫瘤細胞內血管多未成熟，且其血管分支雜亂，極易發生破裂滲漏而為腫瘤的轉移提供重要條件。

中藥及其提取物可使腫瘤血管的VEGF等生成因子的信號傳導途徑受到抑制，從而阻礙腫瘤血管生成因子的表達，還可促使血小板因子4等腫瘤血管生成抑制因子的表達[4]。機體內腫瘤細胞存在異型性特征，從一定程度上證實腫瘤細胞存在不同階段的分化現象，腫瘤干細胞是腫瘤細胞分化發生以及發展的源動力。中藥及其提取物可促使腫瘤干細胞恢復正常調節分化機制，不斷分化為正常細胞或者終末細胞，降低腫瘤細胞的惡性水平或使其自我更新能力喪失，從而達到抗腫瘤的效果。此外，多數腫瘤細胞存在不同程度的多重耐藥性，降低了腫瘤化療治療的療效。腫瘤多重耐藥的主要因素為其P-糖蛋白的相關表達，中藥及其

提取物可使P-糖蛋白在腫瘤細胞膜上的表達水平下調，從而使P-糖蛋白的活性受到抑制，降低腫瘤細胞的耐藥性，提升化療抗腫瘤的療效[5]。

白花蛇舌草屬于茜草科耳草植物，具有利尿消腫、清熱解毒的功效，目前廣泛應用于治療肺癌、肝癌、白血病、胃腸道癌等疾病的治療，并且取得良好的治療效果。隨著研究深入，發現白花蛇舌草的核苷類成分具有較強的抗腫瘤活性。楊鵬等[6]通過24孔培養法及MTT法觀察白花蛇舌草核苷對人非小細胞肺癌細胞株A549及人紅白血病細胞株K562的抑制作用，結果兩種細胞株抑制的最低濃度為100μg/ml及50μg/ml，證明白花蛇舌草核苷有抗腫瘤活性。

本文探討白花蛇舌草提取物對結腸癌HT-29細胞株以及結腸癌HCTI16細胞株的抑制效果發現，隨著白花蛇舌草提取物濃度的上升，其腫瘤抑制率呈不斷上升態勢，抑制率與對照組相比具有統計學差異。曾永長等[7]采用白花蛇舌草提取物（HDNF）對直結腸癌細胞HCT-116、肺癌細胞A549以及肝癌細胞HepG2進行體外抗腫瘤試驗，發現中高劑量白花蛇舌草提取物的抑瘤作用顯著。但研究存在癌細胞株涉及范圍窄等缺陷性，應進一步進行研究擴充，為中藥及其提取物的臨床抗腫瘤治療提供科學可靠的依據。

綜上所述，中藥及其提取物的抗腫瘤已經得到多數學者的廣泛認可，臨床上也取得一定的成效。說明中藥及其提取物應用于臨床抗腫瘤治療中的前景廣闊，值得臨床推廣應用。

參考文獻

[1]劉巖，張春陽，張大田，等.白花蛇舌草提取物誘導人腎癌GRC-1細胞凋亡及抑制血管生成的實驗研究[J].山東醫藥，2011，51（8）：97-98.

[2]李文婷，戴紫函，程海波，等.白花蛇舌草活性成分及其協同抗腫瘤機制研究進展[J].世界科學技術-中醫藥現代化，2015，17（3）：670-674.

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[6]張鵬，趙啟韜，楊培民，等.白花蛇舌草核苷體外抗腫瘤作用實驗研究[J].時針國醫國藥，2012，23（8）：1901-1902.

[7]曾永長，梁少瑜，羅佳波，等.白花蛇舌草提取物（HDNF）體內外抗腫瘤實驗研究[J].中藥材，2011，34（4）：594-597.

（收稿日期：2016.04.06）