Xpert MTB/RIF技術在基層定點醫院肺結核病診斷中的應用價值

劉建俠

(天津市西青醫院 檢驗科，天津300380)

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Xpert MTB/RIF技術在基層定點醫院肺結核病診斷中的應用價值

劉建俠

(天津市西青醫院 檢驗科，天津300380)

摘要：目的探討Xpert MTB/RIF技術在基層定點醫院肺結核病診斷中的應用價值。方法選取本院感染科門診2014年7月至2015年9月疑似肺結核患者的痰標本185份，分別進行固體培養法、Xpert MTB/RIF檢測技術和藥敏試驗，比較Xpert MTB/RIF檢測和傳統檢測痰液標本中結核分枝桿菌培養及利福平耐藥性的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值和Kappa值。結果痰結核分枝桿菌培養陽性96份，陽性率為51.9%；以固體培養法作為金標準，Xpert MTB/RIF檢測的敏感度94.8%，特異度為87.6%，陽性預測值為89.2%，陰性預測值為94.0%，Kappa值為0.826；以比例法藥敏試驗作為金標準，Xpert MTB/RIF檢測的敏感度為86.7%，特異度為94.9%，陽性預測值為76.5%，陰性預測值為97.4%，Kappa值為0.774。結論Xpert MTB/RIF檢測快速，操作簡便，硬件設施要求低，能夠有效檢測結核分枝桿菌及利福平耐藥性，可在基層結核實驗室大力推廣。

關鍵詞：Xpert MTB/RIF技術；結核分枝桿菌；利福平；耐藥性；敏感度；特異度

(ChinJLabDiagn,2016,20:0928)

肺結核病是由結核分枝桿菌引起的慢性傳染病，嚴重威脅著人類的身體健康。肺結核是一種傳染性很強的空氣傳播疾病，在我國近幾年法定報告的乙類傳染病中占第二位，因此，早期診斷對結核病的治療、預后和預防有著重要的臨床意義。目前固體培養法和液體培養法檢測周期較長，因而急需尋求一種簡便、快速、敏感度高的檢測方法[1]。同時，耐多藥結核病(MDR-TB)對結核病的治療構成新的挑戰，我國是27 個MDR-TB嚴重流行國家之一[2]，及時、準確地獲得藥敏試驗尤為重要。隨著新型分子診斷技術的不斷發展，結核分枝桿菌/利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測技術(xpert mycobacterium tuberculosis/rifampin，Xpert MTB/RIF)受到廣大醫生和患者的關注[3]。GeneXpert平臺Xpert MTB/RIF試驗的開發在2009年完成，它被認為是與結核斗爭中的一個重要突破，2010年WHO正式對Xpert MTB/RIF技術進行推薦，2014年全球基金耐多藥結核病項目并為我國捐贈了一批Gene Xpert 儀器，用于結核病和利福平耐藥性的檢測。為了探討Xpert MTB/RIF技術在基層定點醫院結核病診斷中的應用價值，本文做如下研究。

1資料與方法

1.1一般資料

選取本院感染科門診2014年7月至2015年9月疑似為肺結核患者的痰標本185份，標本采集前患者均未使用抗結核藥物進行治療。

1.2儀器和設備

中性羅氏培養由天津市CDC提供，分枝桿菌藥敏試驗培養基購置于珠海貝索生物技術有限公司；Gene Xpert Dx儀器、Gene Xpert MTB/RIF Cartridge檢測盒為美國Cepheid公司產品。

1.3檢測方法

所有標本同時進行固體培養法、比例法藥敏試驗和Xpert MTB/RIF檢測技術。

1.3.1固體培養法和比例法藥敏試驗

采用簡單法培養，具體操作根據《結核病實驗室標準化操作與網絡建設》[4]進行。采用4%氫氧化鈉進行處理，通過無菌操作的方法將標本在改良羅氏培養基斜面上進行接種，在37℃的條件下分別培養3天和7天后進行觀察，然后再每1周觀察1次，對生長情況進行詳細記錄，直至培養至陽性結果出現，如果60天后無生長，則判斷為陰性。在培養基上出現菌落時，進行生化實驗菌種鑒定和藥敏試驗，培養陽性標本根據《結核病細菌學檢驗規程》[5]進行。

1.3.2Xpert MTB/RIF檢測

嚴格按照Gene Xpert MTB/RIF Cartridge檢測盒的檢測程序進行操作。選取1 ml標本加入處理管中，根據標本的形狀加入2倍標本體積的樣品試劑標本處理液，采用漩渦振蕩15-30 s，然后靜置15 min。將檢測盒打開，吸取2 ml處理后的樣品緩慢加入到檢測盒中，再將檢測盒放置在檢測系統的檢測模塊中，將儀器打開，進行全自動檢測，約2 h后反應結束后，在檢測系統窗口下可直接讀取測試結果。

1.4統計學方法

采用SPSS19.0統計學軟件進行處理，敏感度、特異度、利福平耐藥率等計數資料用百分率表示，采用χ2檢驗，P<0.05說明差異顯著有統計學意義。Xpert MTB/RIF檢測和金標準檢測進行一致性檢驗(Kappa檢驗)。

2結果

2.1Xpert MTB/RIF對痰標本結核分枝桿菌的檢測結果

185份標本中痰結核分枝桿菌培養陽性96份，陽性率為51.9%；以固體培養法作為金標準，Xpert MTB檢測的敏感度為94.8%，特異度為87.6%，陽性預測值為89.2%，陰性預測值為94.0%，Kappa值為0.826，提示兩者具有極好的一致性。見表1。

表1　　　　Xpert MTB/RIF對痰標本結核分枝桿菌的檢測

2.2Xpert MTB/RIF對利福平的耐藥性分析

通過固體培養法共得到96株陽性菌株，通過菌種鑒定，2株為非結核分枝桿菌，其余94株均為結核分枝桿菌。94株菌株中，Xpert MTB/RIF技術和藥敏試驗分別有17株和15株耐利福平，耐藥率分別為18.1%(17/94)和16.0%(15/94)，兩者比較無明顯差異(χ2=0.151，P>0.05)。以藥敏試驗作為金標準，Xpert MTB/RIF檢測的敏感度為86.7%，特異度為94.9%，陽性預測值為76.5%，陰性預測值為97.4%，Kappa值為0.774，提示兩者具有較高的一致性。結果見表2。

表2　　　　Xpert MTB/RIF對利福平的耐藥性分析

3討論

結核病傳統的診斷方法有分枝桿菌培養和涂片鏡檢等，培養法是檢測分枝桿菌的金標準，靈敏度和陽性檢出率高于涂片法但是耗時較長，需3周-8周才能出結果，具有一定的局限性；涂片鏡檢快速簡單，但是對于含菌量較低的肺外標本較難檢測出，而且容易漏診[6]。大量研究表明，痰液行抗酸染色陽性率較低，這使得結核病痰液樣本結核菌數需要達到5 000條/ml以上才能夠檢測出陽性結果，確診為結核病[7,8]。并且涂片法無法區分非結核分枝桿菌和結核分枝桿菌。目前藥敏試驗主要采用比例法或者絕對濃度法，但是檢測時間也比較長，需要1個月，一般情況下會影響到患者的用藥時間。Xpert MTB/RIF技術是一種全新的體外診斷技術，將樣品準備、定量PCR 擴增和熒光擴增檢測集于一身的核酸擴增檢測分析系統[9]。而且該技術具有一次性試劑盒，能夠自動完成檢測，比傳統的PCR方法更加簡便快捷、生物安全性更高、檢測過程更不容易受到干擾、檢測時間僅需2個小時等優點。正是基于上述優點，WHO將Xpert MTB/RIF技術納入工作規劃中，推薦可以將此方法作為低中收入國家對結核病、耐藥性結核病感染檢測的主要檢測方法。

研究證實，Xpert MTB/RIF技術試劑盒能夠對結核桿菌和利福平耐藥相關的基因，能夠對耐多藥患者進行初篩，敏感性和特異度較高，檢驗周期也比較短，因而臨床上可作為首選檢測方法[10]。本研究結果顯示，以固體培養法作為金標準，Xpert MTB/RIF檢測的敏感度為94.8%，特異度為87.6%，陽性預測值為89.2%，陰性預測值為94.0%，Kappa值為0.826，這與大部分研究結果[11]基本一致，提示Xpert MTB/RIF檢測和固體培養法具有極好的一致性，而且Xpert MTB/RIF檢測不但能夠提高敏感度，而且能夠縮短檢測時間。

以比例法藥敏試驗作為金標準，其Xpert MTB/RIF檢測的敏感度為86.7%，特異度為94.9%，陽性預測值為76.5%，陰性預測值為97.4%，Kappa值為0.774，提示Xpert MTB/RIF檢測和藥敏試驗具有較高的一致性。由于耐利福平分枝桿菌耐藥基因主要集中在81bp的核心突變區，Gene Xpert主要是通過對rpoB基因片段核心突變區的檢測對耐利福平結核病進行診斷，因而Xpert MTB/RIF檢測在結核分枝桿菌對利福平的耐藥性的檢測上也具有明顯優勢。利福平耐藥性很少單獨發生，通常表明對許多其他抗結核病藥物均有耐藥性,因此利福平耐藥作為耐多藥的參考指標。

參考文獻：

[1]夏輝,趙雁林.Xpert MTB/RIF在我國的應用前景[J].實用醫學雜志,2013,29(23):3799.

[2]WHO.The stop TB stratey,case reports,treatment outcomes and estimagtes of TB burden [R].Geneva,2009.

[3]Mark P，Nicol Andrew Whitelaw,Wendy Stevens.Using Xpert MTB/RIF[R].curent Respiratory Medicine Reviews,2013,9,187-192．

[4]趙雁林，劉志敏.結核病實驗室標準化操作與網絡建設[M].北京：人民衛生出版社，2013：227-280.

[5]中國防癆協會基礎專業委員會.結核病診斷實驗室檢驗規程[M].北京：中國教育文化出版，2006：17-18.

[6]賈文韞.Xpert MTB/RIF在骨關節結核患者快速診斷中的應用[J].中國脊柱脊髓雜志，2015，25(3)：208.

[7]徐大葉．某結核病定點醫院痰涂片陽性率低的調查及應對措施[J].醫學動物防制雜志,2014,30(10):1177.

[8]Boehme CC，Nabeta P，Hillemann D，et al.Rapid moledular detection of tuberculosis and rifampin resistance[J].N Engl Med，2010，263(9)：1005.

[9]鄒遠嫵,劉尚武,朱蕾，等.Xpert MTB/RIF 檢測結核分枝桿菌及其耐藥性在結核病輔助診斷中的臨床價值[J].臨床肺科雜志，2015，20(3):568.

[10]Tortoli E，Russo C，Piersimoni C，et al.Clinical validation of Xpert MTB/RIF for the diagnosisof extrapulmonary tuberculosis[J].Eur Respir J，2012，40(2)：442.

[11]李妍，張天華，鮮小萍，等.Xpert Mtb/RIF檢測技術診斷結核病和肺外結核的價值J].中國防癆雜志，2013，37(6)：386.

文章編號：1007-4287(2016)06-0928-03

中圖分類號：R521

文獻標識碼：A

作者簡介：劉建俠(1970-)，女，副主任技師，從事微生物檢驗。

(收稿日期：2015-11-24)

Application value of Xpert MTB/RIF technology in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in the primary pointed hospital

LIUJian-xia.

(DepartmentofClinicalLaboratory,XiqingHospitalofTianjin,Tianjin300380,China)

Abstract:ObjectiveTo study the application value of Xpert MTB/RIF technology in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in the primary pointed hospital.MethodsDuring July 2014 to September 2015,185 cases of sputum samples from patients with suspected pulmonary tuberculosis in the infectious disease department were selected,they were given solid culture,MTB/RIF Xpert detection and drug sensitivity test.The sensitivity,specificity,positive predictive value,negative predictive value and Kappa value of Rifampin resistance and the culture situation of the Mycobacterium tuberculosis that detected from sputum samples by Xpert MTB/RIF technology and traditional technology were compared.Results96 sputum specimens were culture-positive,the positive rate was 51.9%;With solid culture as gold standard,the sensitivity of MTB/RIF Xpert detection was 94.8%,the specificity was 87.6%,the positive predictive value was 89.2%,the negative predictive value was 94.0%,the Kappa value was 0.826;With proportional drug sensitivity test as gold standard,the sensitivity of MTB/RIF Xpert detection was 86.7%,the specificity was 45.9%,the positive predictive value was 76.5%,the negative predictive value was 97.4%,the Kappa value was 0.774.ConclusionThe Xpert MTB / RIF technology is fast and easy to operate,and has a low demand for hardware,it can effectively detect Mycobacterium bacilli and rifampin resistance,and it can be popularized in the primary tuberculosis laboratory.

Key words:Xpert MTB/RIF technology;Mycobacterium tuberculosis;Rifampicin;Drug resistance;Sensitivity ;specificity