Sysmex HST-302全自動血液分析系統復檢規則的優化及驗證

唐玉鳳陳艷佩董美襯陳 勛郭慧娟尚曉泓*

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Sysmex HST-302全自動血液分析系統復檢規則的優化及驗證

唐玉鳳①陳艷佩②董美襯①陳 勛①郭慧娟①尚曉泓①*

［摘要］目的：以國際血液學復檢專家組推薦的血細胞分析復檢規則41條為基礎，根據醫院病源及病種特點，對檢驗科正在使用的血液分析儀復檢規則進行評估并優化；在建立雙向通訊的基礎上，進一步完善適合科室實際工作的復檢規則。方法：①連續收集2周應用Sysmex HST-302血液分析流水線檢測的所有全血樣本1072例，自動推片染色；②由2名形態學主管技師雙盲法鏡檢，以國際血液學專家組制定的12條鏡檢陽性判斷標準為依據，每人各分類200個白細胞、并同時觀察紅細胞、血小板的大小、形態及分布；③應用Labman軟件，以鏡檢結果為標準，對第九套復檢方案和建立雙向通訊后的新方案進行比對，計算真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率及復檢率。結果：①第九套復檢方案的真陽性率為13.15%，假陽性率為11.94%，真陰性率為70.06%，假陰性率為4.85%，復檢率為25.09%；②優化后復檢規則的真陽性率為11.75%，假陽性率為7.65%，真陰性率為77.15%，假陰性率為3.45%，復檢率為19.40%，前后均無確診意義的血細胞漏檢。結論：復檢規則優化后儀器的靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值均有不同程度的提高，在保證工作質量的前提下可降低復檢率，提高工作效率。

［關鍵詞］血液分析儀；鏡檢；復檢規則；復檢率；細胞形態

唐玉鳳，女，（1971- ），碩士研究生，副主任技師。中國中醫科學院西苑醫院檢驗科，從事臨床檢驗及血液學檢驗研究工作。

［First-author’s address］ Department of Laboratory Medicine， Xiyuan Hospital， China Academy of Chinese Medical Science， Beijing， 100091， China.

Sysmex HST-302血液分析流水線由2臺Sysmex XE-2100全自動血液分析儀、1臺SP1000i全自動制片染色機和3條CVR流水線軌道傳輸系統組成。該系統將先進的流式細胞技術、熒光染色技術和電阻抗原理相結合，可極大提高工作效率，滿足醫患需求［1］。然而，在日常檢測血常規樣本中，當儀器提示核左移、幼稚細胞、原始細胞、異型淋巴細胞、有核紅及血小板聚集等報警信息時，血液分析儀只能起到篩查作用［2］。在漏檢率＜5%且具有確診意義的重要參數不漏檢的前提下降低復檢率，減輕勞動強度，提高工作效率是檢驗工作者致力達到的目標。為此，本研究在參考國際41條復檢規則和應用第九套復檢方案（優化前復檢規則）的基礎上，以HST-302血液分析流水線安裝雙向傳輸系統為契機，對正在使用的血液分析復檢規則進行優化并驗證［3-4］。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Sysmex HST-302血液分析流水線、Olympus光學顯微鏡、血液分析儀配套試劑、校準品和質控品均由日本Sysmex公司提供；使用的染液由珠海貝索公司提供。

1.2 血液樣本來源

（1）優化前復檢規則驗證樣本。收集中醫科學院西苑醫院自2014年8月5-18日連續兩周所有用HST-302全自動血液分析流水線檢測的血常規樣本1072例，利用SP1000i推制標準血涂片，詳細記錄患者的姓名、性別、檢測序號及就診科室，所選病例覆蓋醫院所有臨床科室。

（2）優化后復檢規則驗證樣本。收集2014年11月18-24日連續一周所有用該流水線檢測的血常規樣本509例進行驗證。

1.3 研究方法

（1）人員培訓。參照“全國臨床檢驗操作規程”和NCCLS H20-A規定的方法對參與人員進行培訓［5-6］。確保儀器室內、室間質控均在控。

（2）樣本檢測。采集患者EDTA-K2抗凝全血2.0 ml，采血后2 h內使用Sysmex HST-302血液分析流水線檢測血細胞的各項參數并完成推片染色。

（3）人工鏡檢。由2名血細胞形態學經驗豐富的技師將推片機制備好的血涂片分別采用雙盲法進行顯微鏡檢查，以全國血液學復檢專家組提出的12條血涂片鏡檢陽性判斷標準為依據，記錄陽性結果百分比［4］。

1.4 復檢規則改進及優化

（1）在該流水線安裝雙向通訊軟件后，在原有第九套規則的基礎上增加本次檢驗結果與歷史結果的比對功能，即如果此次檢測結果與上次檢測結果白細胞計數及白細胞分類（leukocyte differential count，DC）、血小板計數或紅細胞計數在一周時間內變化＜15%，本次檢測不再推片。

（2）調整儀器報警信號“Q-flag”的部分臨界值，根據第九套復檢方案統計的假陽性率，將幼稚粒、左移、有核紅細胞（nucleated red blood cell，NRBC）的報警界限閾值由原來的100分別修改為120、130和150。

1.5 優化后復檢規則驗證

新規則初步建立完成后，為了驗證復檢規則的有效性，對收集的2014年11月18-24日連續一周所有用該流水線檢測的血常規樣本509例進行驗證。

1.6 統計學方法

采用血液分析儀裝載的Labman4.2軟件進行數據統計學分析，以手工鏡檢為標準，統計該流水線應用第九套復檢規則的真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率及涂片復檢率。

2 結果

所收集的1072例樣本覆蓋了醫院所有臨床科室，并且血液科、腫瘤科和肺病科的樣本分別不少于總樣本量的10%，腎病科、風濕免疫科和感染科樣本數分別不少于總樣本量的5%，血常規樣本的組成具有代表性。

2.1 復檢規則優化后與優化前性能評價

復檢規則優化后與優化前相比，假陽性率和假陰性率明顯降低，陽性預測值和陰性預測值均有所升高，復檢率由25.09%降為19.40%，優化前后性能評價及復檢率結果見表1。

表1 對1072例樣本復檢規則優化前后的性能評價(%)

表2 復檢規則優化前后1072例樣本檢測報警信息及假陰性的比較(%)

2.2 復檢規則優化前后報警信息及假陰性比較

復檢規則優化后與優化前相比，未成熟粒細胞和NRBC的報警率明顯減低，白細胞（WBC）、平均紅細胞體積（MCV）的報警率略減低，而血小板（PLT）聚集、血紅蛋白（Hb）、紅細胞（RBC）的報警率升高。復檢規則優化后與優化前相比，除PLT聚集外，核左移、未成熟粒細胞、NRBC以及粒細胞毒性變化的假陰性率均有所降低，其比較結果見表2。

2.3 優化后的復檢規則

（1）初診患者執行的規則包括：①WBC、RBC、Hb、PLT和RET超出線性，即WBC＞440×109/ L、RBC＞8.0×1012/L、Hb＞250 g/L、PLT＞1000×109/L、Ret＞23%或Ret#＞0.72×109/L；②WBC、RBC、Hb、PLT、Hb＜60 g/L或＞180 g/ L及DC無結果或結果不全；③RBC IP Message出現紅細胞凝集、鐵缺乏、乳糜血、Hb異常、RBC溶血不良和RBC碎片等懷疑性報警；④Ret IP Message報警無結果和（或）異常散點圖；⑤PLT IP Message任何計數結果伴PLT聚集報警，WBC IP Message出現WBC異常散點圖，未成熟粒細胞、核左移、原始細胞及有核紅細胞等報警；⑥WBC＜3.0×109/L或＞30.0×109/L，PLT＜70×109/L或＞1000×109/ L，Hb＜60 g/L或＞180 g/L；⑦MCV＜75 fl或＞105 fl，MCHC＞380 g/L或＜300 g/L且MCV＞80 fl；⑧RDW＞22%，Neut#＜1.0×109/L或＞20.0×109/ L，Lym#＞5.0×109/L，Mono#＞1.5×109/L，Eos#＞2.0×109/L，Baso#＞0.5×109/L；

（2）復診患者執行的復檢規則。在執行上述初診患者復檢規則前8項的基礎上添加“復診結果WBC、RBC、PLT、Neut#、Lymph#、Mono#、Eos#、Baso#”中的任意一項，7 d內升高或下降超過15%需復檢。

2.4 優化后復檢規則的驗證

規則優化后通過509例樣本進行驗證，假陰性率為3.47%，復檢率為19.23%，與新規則的復檢率和假陰性率基本一致。

3 討論

XE-2100是由日本Sysmex公司生產的五分類全自動血液分析儀，該儀器使用流式細胞術、熒光技術對細胞進行計數和分類，可為臨床提供32個檢測參數，每小時可檢測150份樣本，是具有檢測精度高、速度快及功能強等優點的全自動五分類血液分析儀［7］。但無論多精尖的自動識別技術，均不可代替人工顯微鏡檢查，只是不同檔次的設備“篩選”水平不同而已，這是由于病理情況下的血細胞形態的多樣性和異質性所決定［8-9］。因此，建立有效而合理的復檢規則，及時篩檢異常標本，避免漏檢細胞數量和形態學異常同時保證工作效率，給臨床診斷和治療提供可靠的依據是檢驗工作人員必備的素質。

3.1 復檢規則優化后復檢率降低

本研究中優化前后復檢規則的復檢率及其性能評價，雖然優化前該規則符合國內外復檢規則的基本要求，即假陰性是制定復檢規則的關鍵參數，具有診斷意義的重要參數不能出現假陰性，其他參數假陰性率＜5%［10］的規定。但該規則假陽性率、假陰性率較高，為進一步降低復檢率，縮短檢驗結果報告時間，將規則進行了優化并驗證，新規則與優化前規則和Novis等［11］、洪駿等［12］的相關報道比較，復檢率明顯降低，其原因是新規則啟用雙向通訊后，規定了復診標本WBC、DC、RBC和PLT絕對值在7 d內增加或減少15%之內，即使觸犯復檢規則也不再進行復檢，減少了同一患者在一周內多次復查血常規且血常規結果變化不大時造成的重復涂片復檢的次數，從而提高了工作效率。

3.2 復檢規則優化后假陽性率和假陰性率明顯降低

復檢規則優化后，儀器報警“幼稚粒細胞？”的假陽性率由優化前的49例，明顯降低至優化后的7例，優化前的假陽性較高，主要是由于未能與歷史規則結合，腫瘤科、肺病科以及血液科的標本存在少量未成熟粒細胞，通過人工鏡檢分析發現其白細胞總數和分類計數與之前并無差別，啟用雙向通訊之后不再重復鏡檢。

XE-2100儀器為每個可疑報警信號（Q-flag）設置1個直方圖來表達“是或否”，通常情況下，以100為儀器陰性和陽性的界限，該數值的大小反映了Q-flag報警的可信度，實驗室也可以根據自己實驗研究的結果對某個指標的Q-flag值進行適當的調整，以提高或降低某個指標的靈敏度［13］。因此，對優化前假陽性率過高的報警信息進行調整，將幼稚粒、核左移和NRBC的警示閾值由100分別調為120、130和150。經驗證無血液病相關細胞漏檢，降低了假陽性率，與吳軍錄等［14］、沈丹等［15］的研究結果一致。

假陰性主要是由于血小板聚集、核左移和未成熟粒細胞引起。通過分析該類樣本的血涂片發現，盡管存在每張血涂片血小板聚集＞5堆，但是血小板計數均在生物參考區間內，而且與人工血涂片估計的血小板數量基本一致，并不影響臨床診斷和治療，可能是由于患者病情處于高凝狀態、采血過程略有不順利、采血后顛倒混勻略遲緩或混勻次數不夠等原因所導致，加強對采血人員的培訓和考核可以進一步降低假陰性率。至于核左移、未成熟粒引起的假陰性，通過人工分類，均為幼稚粒＜3%且多為腫瘤、手術和炎癥引起，通過與臨床溝通，該類漏診并不影響臨床診療，因此本研究制定的復檢規則能夠滿足臨床需要。

優化后結果顯示，本研究設定的顯微鏡復檢標準的特異度為90.9%，靈敏度為77.3%，特異度較高，靈敏度偏低，其原因可能與標本例數不夠多或者與實驗室設置儀器的參數有關。石玉玲等［16］報道，在具有雙向通訊的前提下對已經明確診斷而臨床未要求進行人工分類的血液科或腫瘤科樣本不復檢，復檢率將會下降至10%左右，在以后的工作中應根據樣本情況定期調整儀器設定參數，優化工作程序。

4 結論

本研究復檢規則優化后，儀器的靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值均有不同程度的提高，尤其是在保證工作質量的前提下降低了復檢率，提高了工作效率，表明優化后的規則符合臨床檢驗工作的實際需求，具有科學性。因此，為了保證血細胞分析的質量，保證檢測結果的準確性、可靠性，為臨床提供更有價值的檢測信息，減少誤診、漏診，各檢驗科室必須要根據本科室所用分析儀的性能特點、醫院規模、病種差異以及實驗室常規工作的質量管理要求，制定相應的復檢規則并在日常工作中不斷地完善和改進。

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①中國中醫科學院西苑醫院檢驗科 北京 100091

②涉縣第一人民醫院檢驗科 河北 邯鄲 056400

［文章編號］1672-8270（2016）05-0034-04 ［中圖分類號］ R-331

［文獻標識碼］A

DOI:10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.05.012

作者簡介

收稿日期：2015-10-23

*通訊作者：shangxh2056@sina.com

Optimization and validation of hematology review criteria in Sysmex HST-302 hematology analyzer assembly line

TANG Yu-feng， CHEN Yan-pei， DONG Mei-chen， et al

China Medical Equipment，2016，13（5）:34-37.

［Abstract］ Objective: To optimize and validate hematology analyzer review criteria and establish a new hematology review criteria suitable for Clinical Laboratory of Xiyuan hospital based on bidirectional communication according to the 41 items of blood cell analysis review rules recommended by the International Consensus Group for Hematology Review. Methods: The 1072 whole blood samples collected randomly for two weeks were detected by Sysmex HST-302 hematology analyzer assembly line and pushed piece dyeing automatically. The samples were examined by two experienced morphological physician using double-blind microscopic examination based on the microscopy positive standard of the 12 items established by the International Consensus Group for Hematology Review. The two physicians analyzed 200 white blood cells respectively and observed the size， shape and distribution of the red blood cells and platelets. The false positive ratio（FP）， true positive ratio（TP），false negative ratio（FN）， true negative ratio（TN） and recheck rate were evaluated compared the ninth review criteria and the optimized ones by Labman software. Results: The FP， TP， FN， TN and recheck rate of the samples was 11.94%， 13.15%， 4.85%， 70.06%， 25.09% for the ninth review criteria and 7.65%， 11.75%， 3.45%， 77.15， 19.4% for the optimized ones respectively. None of blood cells of diagnostic value was missed for the two review criteria. Conclusion: The sensitivity， specificity， positive predictive value and negative predictive value are all increased， and recheck rate decreased using the optimized review criteria. The work efficiency improved obviously.

［Key words］Hematology analyzer； Microscopic examination； Review criteria； Recheck rate； Cell morphology