卡介苗多糖核酸與308 nm準分子激光對白癜風患者外周血Th17細胞亞群的影響*

洪志林　柯風蘭

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卡介苗多糖核酸與308 nm準分子激光對白癜風患者外周血Th17細胞亞群的影響*

洪志林①柯風蘭①

【摘要】目的：探討卡介苗多糖核酸與308 nm準分子激光對白癜風患者外周血Th17細胞亞群的影響。方法：選取2013年1月-2015年1月本院皮膚性病科白癜風患者192例作為研究對象，采用隨機數字表法將其分為研究組與對照組，每組96例，對照組采用308 nm準分子激光治療，研究組在對照組基礎上采用卡介苗多糖核酸治療，采用流式細胞儀檢測外周血Th17細胞亞群變化，比較兩組臨床療效及不良反應發(fā)生情況。結果：治療后，研究組治療總有效率明顯高于對照組，其中同組進展期白癜風患者治療總有效率明顯高于穩(wěn)定期患者，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。治療前，兩組外周血Th17細胞亞群比例比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；治療后，觀察組外周血Th17細胞亞群比例明顯低于治療前與對照組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。兩組不良反應發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論：308 nm準分子激光對進展期白癜風患者的臨床療效較為顯著；卡介苗多糖核酸通過提高機體免疫功能，從而改善白癜風患者的臨床療效，且藥物安全性較高，值得臨床推廣應用。

【關鍵詞】卡介苗多糖核酸； 308 nm準分子激光； 白癜風； 外周血Th17細胞亞群

①中信惠州醫(yī)院 廣東 惠州 516006

First author’s address：Zhongxin Huizhou Hospital，Huizhou 516006，China

白癜風是常見的皮膚性病科疾病，是一種獲得性皮膚黏膜色素脫失性皮膚病，平均發(fā)生率約為1%~2%，其主要與自身免疫系統(tǒng)有關，且與性別、年齡無明顯相關性，其中面頸部白癜風嚴重影響患者的形象與生活質量[1]。臨床上尚缺乏對白癜風的特效治療手段，導致大部分白癜風患者喪失治療信心。大量文獻證實，Th17細胞亞群參與白癜風發(fā)生與發(fā)展的過程，通過提高機體免疫力，降低Th17細胞亞群表達對白癜風的治療具有重要的意義[2]。目前，關于卡介苗多糖核酸與308 nm準分子激光對白癜風患者外周血Th17細胞亞群的影響研究罕見，本文就這一問題展開研究，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2013年1月-2015年1月本院皮膚性病科白癜風患者192例作為研究對象，采用隨機數字表法將其分為研究組與對照組。研究組96例，其中男46例，女50例；年齡1~60歲，平均（32.15±10.25）歲；病程1個月~20年，平均（4.25±1.02）年；疾病分型：局限型40例，散在型46例，泛發(fā)型10例；疾病分期：穩(wěn)定期46例，進展期50例；皮損面積0.5 cm×3 cm~4 cm×13 cm，平均（18.54±5.12）cm2。對照組96例，其中男48例，女48例，年齡1~60歲，平均（32.09±10.33）歲；病程2個月~21年，平均（4.33±1.07）年；疾病分型：局限型38例，散在型46例，泛發(fā)型12例；疾病分期：穩(wěn)定期50例，進展期46例；皮損面積0.5 cm×4 cm~4 cm×14 cm，平均（18.49±5.09）cm2；兩組性別、年齡、病程、疾病分型、疾病分期及皮損面積等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2診斷、納入及排除標準

1.2.1診斷標準 參照《白癜風臨床分型及療效標準》中關于白癜風的診斷標準：（1）后天發(fā)病，原因不明的色素脫失白斑，呈乳白色，形態(tài)大小各異；（2）白斑分布可局限于某部位或散在、泛發(fā)全身，并沿皮神經節(jié)支配區(qū)分布；（3）根據病情程度將其分為穩(wěn)定期與進展期。原白斑范圍未見擴大，未見新白斑皮損出現者為穩(wěn)定期，白斑范圍逐漸擴大，邊界模糊，新白斑皮損出現者為進展期；（4）病程緩慢，無自覺臨床癥狀。（5）排除其他病因造成的色素脫失或色素減退造成的白斑[3]。

1.2.2納入標準 符合白癜風的診斷標準，皮損≥2處，受累面積<20%體表面積，對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2.3排除標準 合并自發(fā)色素再生史，合并嚴重心肺功能不全，嚴重肝腎功能衰竭，免疫功能低下，采用免疫抑制劑藥物治療，采用皮質類固醇激素治療，合并糖尿病、高血壓、慢性內科疾病，妊娠期與哺乳期婦女，對卡介苗多糖核酸、紫外線過敏，合并精神性疾病患者。

1.3方法

1.3.1治療方法 對照組采用308 nm準分子激光皮膚光療儀（美國XTRACAL7000公司）照射治療，調節(jié)參數：工作氣體為氯化氙，波長308 nm，光斑直徑10/20/25 mm，單脈沖能量150 mJ/cm2，脈寬60 ns，頻率200 Hz，再根據皮損反應適當調整照射劑量，治療2次/周，1周為1個療程，總療程10周，共20次。研究組在對照組基礎上采用卡介苗多糖核酸（商品名：治療用卡介苗，生產企業(yè)：成都生物制品研究所有限責任公司，批準文號：國藥準字S19983036，規(guī)格：1 mL/支）治療，2 mL肌注，每2天1次，總療程10周。

1.3.2檢測方法 治療前后采集新鮮抗凝外周血5 mL，采用2000 r/min密度梯度離心15 min，分離淋巴細胞，采用PBS緩沖液漂洗，采用含胎牛血清BPMI1640培養(yǎng)液重懸，滴加50 μg/L佛波酯、500μg/L離子霉素與0.67 mg/L莫能霉素于37 ℃孵育4 h，PBS緩沖液漂洗，滴加1 μg CD4-FITC抗體，4 ℃孵育0.5 h，PBS緩沖液漂洗，滴加250 μL破膜固定液，4 ℃孵育20 min，采用1 mL破膜液漂洗2次，分為3管，分別加入IL-17-PE 1 μg，室溫避光孵育0.5 h，破膜液漂洗2次，采用流式細胞儀檢測外周血Th17細胞亞群變化。

1.4觀察指標 比較兩組臨床療效及不良反應（疼痛性紅斑、眼瞼水腫、局部瘙癢等）發(fā)生情況，比較兩組不同疾病分期臨床療效的差異，比較兩組患者治療前后外周血Th17細胞亞群的變化。

1.5療效判定標準 參照中國中西醫(yī)結合皮膚性病學會關于《白癜風臨床療效評定標準》評定白癜風的臨床療效，其中白斑徹底消退，100%皮損面積恢復正常膚色者評估為治愈；部分白斑消退，白斑范圍逐漸縮小，50%~99%皮損面積恢復正常膚色者評定為顯效；部分白斑消退，白斑范圍逐漸縮小，10%~49%皮損面積恢復正常膚色者評定為有效；小部分白斑消退，白斑范圍逐漸縮小，0~9%皮損面積恢復正常膚色，或白斑范圍逐漸擴大者評定為無效，總有效率=治愈率+顯效率+有效率。

1.6統(tǒng)計學處理 本研究數據采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，比較采用Χ2檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1兩組臨床療效比較 治療后，研究組治療總有效率明顯高于對照組，比較差異有統(tǒng)計學意義（ Χ2=9.26，P<0.05），見表1。

表1 兩組臨床療效比較 例（%）

2.2兩組不同疾病分期臨床療效比較 治療10周時，研究組進展期患者治療總有效率明顯高于同組穩(wěn)定期患者，比較差異有統(tǒng)計學意義（ Χ2=9.38，P<0.05）；對照組進展期患者治療總有效率明顯高于同組穩(wěn)定期患者，比較差異有統(tǒng)計學意義（ Χ2=5.34，P<0.05），見表2。

表2 兩組不同疾病分期臨床療效比較

2.3兩組治療前后外周血Th17細胞亞群比較 治療前，兩組外周血Th17細胞亞群比例比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；治療后，觀察組外周血Th17細胞亞群比例明顯低于治療前及對照組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表3。

表3 兩組治療前后外周血Th17細胞亞群比較（±s） %

表3 兩組治療前后外周血Th17細胞亞群比較（±s） %

*與同組治療前比較，t=40.24，P<0.05

組別　治療前　治療后研究組（n=96）　4.06±0.61　1.48±0.15*對照組（n=96）　3.98±0.62　3.85±0.49 t值　0.56　45.31 P值　>0.05　<0.05

2.4兩組不良反應發(fā)生情況比較 兩組不良反應發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計學意義（ Χ2=0.00，P>0.05），見表4。

表4 兩組不良反應發(fā)生情況比較

3　討論

白癜風是由于皮膚色素代謝障礙導致的疾病，該病治療難度較大，治療療程較長。白癜風的發(fā)生機制與以下因素具有密切的關系：（1）自身免疫系統(tǒng)；（2）皮膚黏膜色素細胞脫失；（3）內分泌系統(tǒng)；（4）銅離子、酪氨酸相對缺乏；（5）遺傳；（6）藥物、精神刺激、手術刀傷、燙傷、砸傷、擦傷、碰撞等；（7）環(huán)境因素。白癜風治療原則主要為促進皮損處色素沉著與白斑范圍逐漸縮小，改善外觀及皮膚對光照的耐受程度[4]。白癜風治療主要采用局部整體相結合、中西醫(yī)相結合的治療方案，其中主要包括手術治療與非手術治療。白癜風的非手術治療方案包括窄譜中波紫外線（NB-UVB）、比較光化學療法（PUVA）及糖皮質激素治療等[5]。308 nm準分子激光具有促進黑素細胞增殖、黏附與遷移的作用，可促進白癜風皮損邊緣、毛囊處黑素細胞增殖，誘導黑素新生細胞遷移至白斑部位，促進皮損處色素沉著與白斑范圍逐漸縮小，308 nm準分子激光照射療法有助于抑制皮膚抗原提呈細胞，降低朗格漢斯細胞功能與數量，抑制免疫功能，促進角朊細胞合成白介素，增強網狀內皮細胞及其補體的吞噬功能，調節(jié)機體免疫效應[6]。大量文獻證實，308 nm準分子激光治療白癜風患者的起效時間短、療效佳、不良反應較低，可明顯改善白癜風兒童與白癜風成人患者的病情活動程度，且治療依從性高，可明顯改善白癜風兒童與成人患者的生活質量[7]。卡介苗多糖核酸是卡介苗多糖核酸類提取物，其通過激活巨噬細胞，可增強T、B細胞介導的體液免疫與細胞免疫功能[8]。經臨床研究與實驗研究證實，卡介苗多糖核酸對Th17相關因子具有重要的調節(jié)作用[9]。Th17細胞亞群及其相關因子在介導免疫細胞因子釋放，促進免疫性疾病中具有重要的意義[10]。但關于卡介苗多糖核酸與308 nm準分子激光對白癜風患者外周血Th17細胞亞群的影響研究尚少。

本研究結果顯示，卡介苗多糖核酸與308 nm準分子激光結合治療的總有效率由單純308 nm準分子激光治療的66.67%提高至85.42%，提示卡介苗多糖核酸在白癜風患者的治療中具有重要的價值。卡介苗多糖核酸與308 nm準分子激光結合療法或單純308 nm準分子激光療法對患者進展期治療總有效率更高，提示308 nm準分子激光療法對進展期白癜風患者的臨床療效更佳，可能由于：（1）308 nm準分子激光屬于中波紫外線，可直接誘導與間接誘導T淋巴細胞的凋亡，且每周1次308 nm準分子激光照射治療的效果較為理想；（2）進展期黑素細胞損傷尚未完全，且仍暴露部分的黑素細胞，而穩(wěn)定期色素脫失完全，病程較長，其對308 nm準分子激光照射治療敏感性均造成一定的負面影響[11-12]。卡介苗多糖核酸與308 nm準分子激光結合治療，患者外周血Th17細胞亞群比例由單純308 nm準分子激光治療的（3.85±0.49）%降低至（1.48±0.15）%，揭示了卡介苗多糖核酸通過顯著下調白癜風患者外周血Th17細胞亞群比例，從而發(fā)揮免疫調節(jié)的作用，間接反映了卡介苗多糖核酸通過改善機體免疫功能，從而達到治療白癜風的目的[13]。最后，卡介苗多糖核酸與308 nm準分子激光結合治療并不增加白癜風患者的不良反應發(fā)生風險，與相關研究報道結果一致[14-15]。

綜上所述，308 nm準分子激光對進展期白癜風患者的臨床療效較為顯著，其中卡介苗多糖核酸通過提高機體免疫功能，從而改善白癜風患者的臨床療效，且藥物安全性較高，值得臨床推廣應用。

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*基金項目：惠州市科技計劃項目（20140810）

通信作者：洪志林

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.10.004

收稿日期：（2015-10-09） （本文編輯：王利）

Effect of BCG-polysaccharide Nucleic Acid and 308 nm Excimer Laser on Peripheral Blood Th17 Cell Subsets of Vitiligo Patients/HONG Zhi-lin，KE Feng-lan.//Medical Innovation of China，2016，13（10）：011-014

【Abstract】Objective：To investigate the effect of BCG-polysaccharide nucleic acid and 308 nm excimer laser on peripheral blood Th17 cell subsets of vitiligo patients.Method：192 cases of vitiligo patients in STD Dermatology of our hospital from January 2013 to January 2015 were selected as the research objects.Using the random number table method，all patients were divided into study group and control group，with 96 cases in each group.The control group was treated with 308 nm excimer laser，the study group was treated with BCG nucleic acid on the basis of the control group.Peripheral blood Th17 cell subsets were detected by flow cytometry.The clinical curative effect and the incidence of adverse reactions were compared between the two groups.Result：After treatment，the total effective rate of the study group was significantly higher than that of the control group，the total effective rate of advanced stage was significantly higher than that of stable stage in the same group，the differences werestatistically significant（P<0.05）.Before treatment，the difference in peripheral blood Th17 cell subsets between the two groups was not statistically significant（P>0.05）.After treatment，the peripheral blood Th17 cell subsets of the observation group was significantly lower than pre-therapy and that of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.There was no statistically significant difference in the incidence rate of adverse reactions between the two groups（P>0.05）.Conclusion：308 nm excimer laser has more significant clinical curative effect for advanced vitiligo.BCG nucleic acid improves the clinical curative effect by improving the organism immune function for vitiligo，its drug safety is high，which is worthy of clinical application.

【Key words】BCG-polysaccharide nucleic acid； 308 nm excimer laser； Vitiligo； Peripheral blood Th17 cell subsets