長白山野生香薷中揮發(fā)油的提取及抗氧化性

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院生物工程學(xué)院，吉林吉林 132101）摘要：對長白山野生香薷中揮發(fā)油的抗氧化活性進行研究。以水蒸氣蒸餾法提取香薷中的揮發(fā)油，通過分光光度法測定揮發(fā)油對DPPH自由基、羥基自由基（·OH）、超氧陰離子自由基（O-2 · ）的清除能力，從而判定揮發(fā)油的抗氧化活性。結(jié)果表明，不同濃度的揮發(fā)油清除自由基的能力不同，相同濃度下的揮發(fā)油對不同自由基的清除能力也各有差異。結(jié)果表明，野生香薷揮發(fā)油具有較強的抗氧化性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化學(xué)工業(yè)等領(lǐng)域。研究為進一步開發(fā)香薷揮發(fā)油的藥用價值提供了良好的數(shù)據(jù)支持。

關(guān)鍵詞：長白山野生香薷；水蒸氣蒸餾；抗氧化性；揮發(fā)油

中圖分類號： R284.2文獻標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2016）06-0399-02

收稿日期：2015-05-15

基金項目：吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院微生物重點學(xué)科培育項目（編號：吉農(nóng)院合字[2013]第X005號）。

作者簡介：于加平（1973—），男，吉林大安人，副教授，從事分析化學(xué)和天然產(chǎn)物的教學(xué)與科研。E-mail：542646746@qq.com。香薷[Elsholtzia ciliata（Thunb.）Hyland]是唇形科芳香草本植物，別稱小葉蘇子、香草、臭粥芥等，其香味極濃，是東北地區(qū)傳統(tǒng)的調(diào)料。香薷主要分布于江西、陜西、山東、甘肅、吉林等地，在中國資源豐富，其中以江西省產(chǎn)量大、品質(zhì)佳，又稱“江香薷”[1]。根據(jù)藥典記載，香薷是一種常見的中草藥，具有發(fā)汗解表、和中化濕、利尿消腫的功效，可治療風(fēng)寒、感冒、胸悶氣喘、嘔吐腹瀉等[2-3]。據(jù)相關(guān)報道，目前主要是對“江香薷”中的黃酮、多糖、揮發(fā)油等方面進行的研究，而對長白山區(qū)野生香薷揮發(fā)油的研究卻鮮見報道。揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、解熱、緩解腸痙攣等功效[4-5]。為了更好地研究、利用香薷，本研究以長白山野生香薷為原料，采用水蒸氣蒸餾法對其中的揮發(fā)油進行提取，并利用其對DPPH自由基、羥基自由基以及對超氧陰離子的清除能力來研究揮發(fā)油的抗氧化性能，研究結(jié)果可為長白山野生香薷食藥用價值的開發(fā)和利用奠定理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1材料長白山野生香薷，采自吉林省長白山區(qū)內(nèi)，經(jīng)專家鑒定為長白山野生香薷，經(jīng)陰干、粉碎，得香薷粉末備用。

1.1.2儀器FZ102型微型植物粉碎機，天津市泰斯特儀器有限公司；揮發(fā)油提取器、FA2004N型天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司；ATC-15A型電子恒溫電熱套，海寧市華星儀器廠；RE3000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器公司；UV2300紫外分光光度計，上海天美科學(xué)儀器有限公司。

1.1.3試劑乙醚、NaCl、Na2SO4 、95%乙醇溶液、0.1 mol/L DPPH無水乙醇溶液、16.0 mmol/L FeSO4、0.04 mmol/L H2O2、6.0 mmol/L水楊酸、0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液、50 mmol/L 鄰苯三酚、8 mol/L HCl 0.1 mL。

1.2試驗方法

1.2.1長白山野生香薷中揮發(fā)油的提取利用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油[6-7] 。精確稱取20 g干燥野生香薷粉末，置于燒瓶內(nèi)，連接水蒸氣蒸餾裝置后開始提取；收集餾出液，向餾出液中加入NaCl，靜置后用乙醚萃取（20 mL×3次），合并萃取液；向萃取液中加入適量無水Na2SO4后，低溫干燥24 h后再進行過濾，旋蒸回收乙醚，收集揮發(fā)油，置于冰箱內(nèi)備用。

1.2.2長白山野生香薷中揮發(fā)油抗氧化性研究

1.2.2.1羥基自由基的清除率測定待測樣品用無水乙醇稀釋成0、20、40、60、80 μg/mL。取若干10 mL離心管，依次加入16.0 mmol/L FeSO4、0.04 mmol/L H2O2、6.0 mmol/L水楊酸及不同質(zhì)量濃度的樣品。37 ℃反應(yīng)30 min，流水冷卻，各管中分別加入0.9 mL無水乙醇，使體系終體積為6.0 mL，2 000 r/min 離心10 min。取出后于510 nm處比色測定吸光度。每個試樣做3次平行試驗，取平均值。 清除率按下式計算：

S=（Do（510 nm）-Di（510 nm））/Do（510 nm）×100%。

（1）

式中：Do（510 nm）為未加樣品的吸光度；Di（510 nm）為加入樣品的吸光度；S為清除率，%。

1.2.2.2超氧陰離子自由基的清除率測定待測樣品用無水乙醇稀釋成0、20、40、60、80 μg/mL。取4.5 mL 0.05 mol/L、pH值8.2的Tris-HCl緩沖液于試管中，置于25 ℃水浴中預(yù)熱20 min，加入1 mL供試液、0.5 mL 2.5 mmol/L鄰苯三酚，混勻后在25 ℃水浴中精確反應(yīng)5 min，立即用0.1 mL 8 mol/L HCl終止反應(yīng)，并在波長320 nm處測定吸光度D320 nm。對照組用0.5 mL無水乙醇代替鄰苯三酚，同時設(shè)立試劑空白管。每個試樣做3次平行試驗，取平均值。清除率按下式計算：

S′1=（Do（320 nm）-Di（320 nm））/Do（320 nm）×100%。

（2）

式中：Do（320 nm）為2.5 mmol/L鄰苯三酚溶液的吸光度；Di（320 nm）為加入供試液的吸光度；S′1為清除率，%。

1.2.2.3DPPH自由基清除率的測定待測樣品用無水乙醇稀釋成0、20、40、60、80 μg/mL。分別取不同質(zhì)量濃度的供試品溶液0.5 mL，置于10 mL試管中，加入2.5 mL濃度為 0.1 mol/L DPPH 溶液，室溫避光反應(yīng)30 min。同時以95%乙醇為空白對照，于517 nm波長處測定吸光度。每個試樣做3次平行試驗，取平均值。按照下列公式計算DPPH自由基清除率：

S2=[Do（517 nm）-（Di（517 nm）-Dj（517 nm））]/Do（517 nm）×100%。

（3）

式中：Do（517 nm）為0.5 mL 95%乙醇加2.5 mL DPPH 溶液的吸光度；Dj（517 nm）為0.5 mL樣品溶液加2.5 mL 95%乙醇的吸光度；Di（517 nm）為0.5 mL樣品溶液加2.5 mL DPPH 溶液的吸光度；S為清除率，%。

2結(jié)果與分析

2.1長白山野生香薷中揮發(fā)油對·OH的清除率

按“1.2.2.1”節(jié)方法，測定長白山野生香薷中不同濃度揮發(fā)油對·OH清除率，結(jié)果見表1。可見長白山野生香薷中揮發(fā)油對羥基自由基有很強的清除作用，隨著揮發(fā)油濃度增加，對羥基自由基的清除作用越明顯，即清除率與揮發(fā)油的含量存在一定的量效關(guān)系。

2.2長白山野生香薷中揮發(fā)油對 O-2 · 的清除率

按“1.2.2.2”節(jié)方法，測定長白山野生香薷中不同濃度揮發(fā)油對 O-2 · 清除率，結(jié)果見表2。可見長白山野生香薷中揮發(fā)油對 O-2 · 也有很強的清除作用，5種濃度的揮發(fā)油對 O-2 · 的清除率均隨濃度的增加而增大，即有一定的劑量效應(yīng)。隨著野生香薷中揮發(fā)油濃度的增加，對 O-2 · 的清除作用越明顯。

2.3長白山野生香薷中揮發(fā)油對DPPH·的清除率

按“1.2.2.3”節(jié)方法，測定長白山野生香薷中不同濃度揮發(fā)油對DPPH·清除率，結(jié)果見表3。可見長白山野生香薷中揮發(fā)油對DPPH·也有很強的清除作用，隨著揮發(fā)油的濃度增加，對DPPH·的清除作用越明顯。揮發(fā)油對DPPH·的清除活力隨揮發(fā)油濃度的增加而增強，但隨著濃度增加，清除率增速變緩。

3結(jié)論

為了合理應(yīng)用長白山區(qū)野生香薷寶貴資源，通過水蒸氣蒸餾技術(shù)提取香薷中的揮發(fā)油，并對其抗氧化性進行了研究。結(jié)果表明，長白山野生香薷中揮發(fā)油對DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥基自由基均有顯著的清除效果，表明長白山野生香薷中揮發(fā)油具有較強的抗氧化性，是一種天然的抗氧化劑，對疾病的治療及化妝品產(chǎn)業(yè)均有開發(fā)利用價值。

目前，長白山野生香薷主要用作野菜為人們食用，研究結(jié)果可為長白山野生香薷寶貴資源在藥用價值和綜合利用等方面提供數(shù)據(jù)支持。

參考文獻：

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