一種焚燒骨骼的DN A提取方法

凃 政， 石 屹， 張廣峰， 李萬水

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一種焚燒骨骼的DN A提取方法

凃 政， 石 屹， 張廣峰， 李萬水

（公安部物證鑒定中心，北京 100038）

摘要：本文介紹了一種針對燒骨的DNA有效提取方法。對燒骨進行研磨制成骨粉，對骨粉進行大體系脫鈣和裂解， 采用Amicon?Ultra-15 離心過濾器對獲得的脫鈣、裂解上清液進行濃縮，提高DNA的回收率，使用硅膠膜法對濃縮后的DNA溶液進行純化，并經復合STR擴增檢驗。使用上述方法成功完成兩起嚴重焚燒骨骼案件的檢驗，確定了受害人身源。

關鍵詞：法醫遺傳學；燒骨；DNA提取；純化；短串聯重復序列

骨骼的STR檢驗是當前鑒定未知名尸骸身份的一種有效手段。但是在實際辦案中經常會遇到焚尸的案件，犯罪分子往往會通過焚燒尸體來達到毀尸滅跡的目的，此類案件中死者尸體的軟骨等軟組織已經完全消失，骨骼開裂碎片化，骨骼內的DNA經過高溫燃燒，破壞降解十分嚴重，DNA含量大大降低，難以進行檢驗。本文介紹了一種燒骨的DNA提取方法，并已在個案中得到成功的應用。

1 試劑與方法

1.1 試劑、儀器

脫鈣液0.5 mol/L EDTA pH 8. 0（Promega，美國），蛋白酶K溶液（20 mg/mL），DTT溶液 （1 mol/ L），骨骼裂解液（Promega，美國），QIAquick?PCR純化試劑盒（Qiagen，德國），PowerPlex?21擴增試劑盒（Promega，美國），Identifiler?Plus擴增試劑盒（Thermo Fisher，美國）。Amicon?Ultra-15 10K離心過濾器（Millipore，德國），SPEX 6770冷凍研磨機（SPEX SamplePrep，美國）。

1.2 方法

提取方法參考文獻［1，2］，并在其基礎上進行改進。

樣品預處理 挑選焚燒程度相對較輕、厚度較厚的骨骼，用手術刀去除燒骨表面層和污垢，用純水沖洗干凈，在 5% （ W/V） 次氯酸鈉溶液中浸泡15 min，純水洗滌3 次后依次用無水乙醇、乙醚各浸泡10 min，于通風櫥中干燥用干凈濾紙包裹后砸成骨粉或用研磨機研磨成粉。……