高效液相色譜法測定通便和減肥類保健食品中橙黃決明素的含量

方 燦， 馬 瑩， 龐秀清， 伍 曦， 趙 麗

(貴州省食品藥品檢驗所,貴州貴陽 550004)

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高效液相色譜法測定通便和減肥類保健食品中橙黃決明素的含量

方 燦， 馬 瑩， 龐秀清， 伍 曦， 趙 麗

(貴州省食品藥品檢驗所,貴州貴陽 550004)

摘要[目的] 建立高效液相色譜法測定通便和減肥類保健食品中主要功效成分決明子中橙黃決明素的含量。[方法] 色譜條件：采用C18柱，柱溫30 ℃，檢測波長284 nm，流速為1 mL/min，乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60)為流動相。[結果]橙黃決明素在0.040 2～0.321 6 μg(r=0.999 9)范圍內呈良好的線性關系，平均加樣回收率為99.87%，RSD為1.32%。[結論]該試驗所建立的方法準確、重現性好，可用于通便和減肥類保健食品的質量控制。

關鍵詞保健食品；通便；減肥；橙黃決明素；高效液相色譜法

決明子在大多數通便和減肥類保健食品中作為主要原料被廣泛使用，主要功效成分決明子為歷版藥典收載品種，為豆科植物決明(CassiaobtusifoliaL.)或小決明(CassiatoraL.)的干燥成熟種子，具有潤腸通便的功效[1]，其專屬性成分為橙黃決明素[2]，還含有大黃酚、大黃素等多種成分。目前多采用高效液相色譜法測定決明子藥材或中藥中決明子的橙黃決明素、大黃酚、大黃素成分[1-8]，也有采用高效液相色譜法測定保健食品中蒽醌類成分[9-10]，鮮見同時對通便和減肥類保健食品中決明子橙黃決明素檢測方法的文獻報道。

筆者選取了以決明子為主要成分制成的4個通便類、6個減肥類保健食品進行檢測，產品均為膠囊和茶的固體制劑。以對減肥膠囊產品中橙黃決明素含量測定的方法學研究為基礎，建立了采用高效液相色譜法測定通便和減肥類保健食品的主要功效成分決明子中橙黃決明素含量的方法，為評估通便和減肥類保健食品的功效作用、安全性和質量控制提供參考。

1材料與方法

1.1材料Waters e2695型高效液相色譜儀、2998二極管陣列檢測器；梅特勒 MS105DU電子天平；舒美KQ-500DA型數控超聲波清洗器。橙黃決明素對照品，中國食品藥品檢定研究院，國家藥品標準物質，批號：111900-201202；通便類保健食品產品4批：通便茶(A)，潤通茶(B)，通秘茶(C)，常潤茶(D)；減肥類保健食品產品6批：減肥膠囊(E、F、G、H)，減肥茶(I、J )。乙腈為色譜純；甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷等，均為分析純；水為超純水。

1.2方法

1.2.1標準溶液的制備。精密稱定橙黃決明素標準物質0.010 05 g，置10 mL容量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2.0 mL混合液至100 mL容量瓶中，再加無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合液稀釋至刻度，搖勻，即得標準溶液(每1 mL含橙黃決明素20.1 μg)。

1.2.2供試品溶液的制備。精密稱取樣品1.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 mL，蒸干，加稀鹽酸30 mL，置水浴上加熱水解1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣用無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合溶液使溶解，轉移至25 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取濾液，即得。

1.2.3色譜條件。十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Waters XBridgeTMC18；5 μm，4.6×250 mm)；乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60)為流動相；柱溫為30 ℃；檢測波長為284 nm；進樣量為5 μL。

1.2.4方法學考察。

1.2.4.1檢測波長的確定。取標準溶液在190～400 nm范圍內用二極管陣列檢測器檢測，標準溶液在284 nm處有最大吸收，因此該試驗選用284 nm為檢測波長。

1.2.4.2流動相的確定。橙黃決明素的含量測定方法目前主要是高效液相色譜法，根據文獻[1]報道的方法進行研究并確定乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60)為流動相，樣品中的橙黃決明素峰和其他成分峰基線分離，分離效果良好。標準物質、供試品、溶劑色譜圖分別見圖1、2、3。

圖1　橙黃決明素標準物質色譜Fig. 1　Chromatogram of standard substances of aurantio-obtusifolin

圖2　供試品色譜Fig. 2　Chromatogram of tested substances of aurantio-obtusifolin

圖3　溶劑色譜Fig. 3　Chromatogram of the solvent

1.2.4.3線性關系考察。精密吸取標準溶液注入高效液相色譜儀中測定，以峰面積A對濃度C進行線性回歸，考察兩者的線性關系。

1.2.4.4精密度試驗。取標準溶液，連續進樣6次，記錄峰面積，考察儀器精密度。

1.2.4.5重復性試驗。按“1.2.2”項下供試品溶液制備方法處理6份供試品溶液，測定，考察試驗的重復性。

1.2.4.6加樣回收率試驗。精密稱取供試品0.5 g，共6份，分別精密加入橙黃決明素標準溶液(20.1 μg/mL)3 mL，再按“1.2.2”項下供試品溶液制備方法處理，測定，計算回收率。

1.2.4.7穩定性試驗。取供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、12、16 h進樣，記錄峰面積，考察試驗的穩定性。

2結果與分析

2.1線性關系考察按“1.2.4.3”項的方法得出，標準溶液標準曲線方程Y=26 917X-6 618.5，r=0.999 9。結果表明，橙黃決明素在0.040 2～0.321 6 μg范圍內線性關系良好。

2.2精密度試驗按“1.2.4.4”項的方法得出，峰面積RSD值為0.33%，表明儀器精密度良好。

2.3重復性試驗按“1.2.4.5”項的方法得出，6份供試品溶液的橙黃決明素，平均含量為107.31 μg/g，RSD為0.79%，重復性良好。

2.4加樣回收率試驗試驗得出，含供試品的平均回收率為99.87%，RSD為1.32%，方法回收率良好。

2.5穩定性試驗按“1.2.4.7”項的方法得出，峰面積值的RSD值為0.28%，供試品溶液在16 h內穩定。

2.6樣品橙黃決明素含量測定分別取10個品種供試品的內容物1.0 g，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，測定峰面積，計算供試品中橙黃決明素含量測定結果分別為A：73.5 μg/g； B：13.6 μg/g； C：15.6 μg/g；D：18.8 μg/g；E：109.7 μg/g；F：77.3 μg/g；G：88.6 μg/g；H：9.3 μg/g；I：21.1 μg/g；J：6.2 μg/g。測定結果表明，通便類保健食品中橙黃決明素的含量范圍為13.6～73.5 μg/g，減肥類保健食品中橙黃決明素的含量為9.3～109.7 μg/g，含量差異均較大。

3結論與討論

決明子為通便和減肥類保健食品的主要功效成分之一，橙黃決明素為決明子的專屬性成分，根據相關文獻方法[1-9]，選用乙醇、甲醇等溶劑進行超聲及回流提取橙黃決明素，并對提取溶劑、提取方法、提取時間、酸水解時間、水解酸濃度、水解溫度和萃取次數進行考察。該試驗研究確定了70%甲醇回流提取2 h，10%HCl水解1 h，三氯甲烷萃取4次供試品處理方法，建立了通便和減肥類保健食品中橙黃決明素含量的HPLC測定法，方法簡便可行并具有良好的準確性和重現性，可用于通便和減肥類保健食品的質量控制。

該試驗對通便類、減肥類保健食品10個樣品中橙黃決明素含量進行了測定。檢測結果表明，通便類、減肥類保健食品中橙黃決明素含量相差最大超過10倍。分析原因認為，由于現有保健食品質量標準存在處方備注不全、未明確處方量、無生產工藝或生產工藝不完整等情況，主要功效成分決明子等原材料的投料缺乏有效監控措施，部分生產企業如未嚴格按照生產工藝生產產品，是造成不能有效控制產品質量的主要因素，需要予以規范和完善，在產品質量標準中明確成分、處方量和主要生產工藝，確定功效成分指標和檢測方法，并加強生產工藝監管力度，保障產品質量和使用安全。同時，需要評價其處方量的合理性，評估功效作用和安全性；防止使用者在無明確標示含量情況下長期大量服用對身體造成的損害，其潛在安全風險[10]有關監管部門應予以關注。

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基金項目貴州省食品、保健食品、化妝品監測檢測平臺項目(黔科平臺[2012]4001)。

作者簡介方燦(1968- )，男，安徽樅陽人，主任藥師，從事保健食品、化妝品、藥品質量控制與研究。

收稿日期2016-04-08

中圖分類號O 657.7

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)15-065-02

Determination of Aurantio-obtusifolin Content in Health Food for Catharsis and Weight Loose by HPLC

FANG Can, MA Ying，PANG Xiu-qing et al

(Guizhuo Institute for Food and Drug Control, Guiyang, Guizhou 550004)

Abstract[Objective] To set up a simple and accurate method to determine the aurantio-obtusifolin content in health food for catharsis and weight loose by HPLC. [Method] Chromatographic condition was as follows: C18column was adopted; column temperature was 30 ℃, the detection wavelength was 284 nm, flow rate was 1 mL/min, mobile phase was acetonitrile - 0.1% phosphoric acid solution (40∶60). [Result] Aurantio-obtusifolin showed good linear relationship within the range of 0.040 2-0.321 6 μg (r=0.999 9). The average recovery rate was 99.87% and RSD was 1.32%. [Conclusion] The established method is accurate, reproducible and can be used for quality control of health food for catharsis and weight loose.

Key wordsHealth food; Catharsis; Weight loose; Aurantio-obtusifolin; HPLC