福州地區健康兒童外周血淋巴細胞亞群及主要活化相關指標正常參考范圍的建立

林珊，高虹，李晶，林潔，張忠龍，林世光，陳新弟

(1、福建省福州兒童醫院，福建福州350005；2、福州市婦幼保健院，福建　福州350005)

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福州地區健康兒童外周血淋巴細胞亞群及主要活化相關指標正常參考范圍的建立

林珊1，高虹2，李晶1，林潔1，張忠龍1，林世光1，陳新弟1

(1、福建省福州兒童醫院，福建福州350005；2、福州市婦幼保健院，福建福州350005)

摘要：目的建立福州地區健康兒童外周血淋巴細胞亞群及活化的正常參考范圍。方法選取福州地區0～18歲健康兒童593例為研究對象，按年齡分為新生兒組（0～28d）、嬰兒組（～12個月）、幼兒組（～3歲）、學齡前組（～7歲）、學齡組（～12歲）和少青組（～18歲），采集外周血以美國BD公司生產的四色熒光抗體進行標記，以FACSCalibur流式細胞儀測定T淋巴細胞亞群CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、B淋巴細胞亞群CD3-CD19+、NK細胞CD3-CD16+CD56+及淋巴細胞活化指標CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+、CD8+CD38+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和絕對計數，以MultiSET軟件獲取數據并分析結果，SPSS 10.0軟件進行統計分析。以百分位數法，采用95%可信區間確定正常參考值范圍。結果除CD3-CD16+56+絕對計數在各年齡組間無差異外，淋巴細胞亞群及淋巴細胞活化指標在不同年齡組之間的差異均有統計學意義，表現為CD3+絕對計數、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和絕對計數、CD4+/CD8+比值隨著年齡的增長呈降低趨勢。CD4+Anti-HLA-DR+的百分率隨著年齡的增長呈增高趨勢。新生兒組CD3+、CD3+CD4+、CD4＋CD38＋、CD8＋CD38＋的百分率和絕對計數及CD4＋/CD8＋比值明顯高于其它年齡組，CD3-CD19＋、CD8＋Anti-HLA-DR＋的百分率和絕對計數明顯低于其它年齡組。在不同性別之間CD3+CD4+和CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4＋Anti-HLA-DR＋和CD8＋CD38＋的百分率和絕對計數的差異有統計學意義，表現為女童明顯低于男童。兒童淋巴細胞亞群絕對計數的參考值高于成人。結論健康兒童淋巴細胞免疫表型的分布存在性別和年齡差別，由于這種差別細微，可以在同一種族同一區域建立統一的正常參考值范圍。本研究成功建立福州地區健康兒童淋巴細胞亞群及活化的正常參考范圍。

關鍵詞：淋巴細胞亞群；淋巴細胞活化；流式細胞術；兒童；正常參考值

目前國內尚沒有統一的健康兒童外周血淋巴細胞亞群的正常參考值，臨床工作中主要參考由儀器試劑供應商提供的國外數據[1]，可能會對中國兒童疾病狀態下免疫功能的判斷造成一定的偏差。隨著感染性疾病、免疫性疾病及各種腫瘤的發病率的上升，人們對發病機制、病程發展、治療效果進行深入研究，發現疾病的發生與機體免疫功能狀態密切相關[2，3]，淋巴細胞是構成免疫系統和執行免疫功能的主要細胞群體。進行淋巴細胞亞群分析，對于了解機體免疫功能狀態有重要的臨床意義，為此，本研究對593例健康兒童外周血淋巴細胞亞群進行分析，以建立福州地區健康兒童外周血淋巴細胞亞群及活化的正常參考范圍，現報告如下。

1　對象與方法

1.1研究對象選取在福建省福州地區進行健康體檢或術前查體（均為對免疫功能影響不大的疾病如腹股溝斜疝、包莖、鞘膜積液等）的0～18歲健康兒童為研究對象，所有研究對象均符合以下標準：外周血細胞計數、肝腎功能、X線檢查均正常，無明顯的心、腦血管疾病，無先天性免疫缺陷性疾病和自身免疫性疾病，近期無感染性疾病，無急性時相反應，無HBV、HCB、HIV和梅毒等慢性感染性疾病，近期未使用過影響免疫系統的藥物。根據《諸福棠實用兒科學》[4]，按年齡分為新生兒組（0～28d）83例、嬰兒組（～12個月）97例、幼兒組（～3歲）98例、學齡前組（～7歲）106例、學齡組（～12歲）103例和少青組（～18歲）106例，共593例，其中男308例，女285例。采集外周靜脈血2ml，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝。

1.2檢測方法⑴儀器：美國BD公司的FACSCalibur型流式細胞儀。⑵試劑：采用美國BD公司的淋巴細胞亞群分析試劑，熒光標記4色單克隆抗體，CD3 -FITC/CD8 -PE/CD45 -PerCP/CD4 -APC、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC，CD8-FITC/CD38-PE/CD3-PerCP/Anti-HLA-DRAPC、CD4-FITC/CD38-PE/CD3-PerCP/Anti-HLADR-APC，使用配套的溶血劑(FACS Lysing Solution)，熒光校正微球（CaliBRITEBeads）分別為：Unlabeled Beads、APC Beads、FITC Beads、PE Beads、PerCP Beads。⑶標本制備：按照試劑使用說明書的要求，每份樣本用流式細胞儀專用試管，分別加入20μl MultiTEST單抗試劑于TruCONT管中，加入50μl EDTA抗凝全血，混勻在室溫暗處放置15min，加入450μl10%FACS溶血素，混勻在室溫暗處放置15min，上機獲取標本數據。⑷儀器校正：上機前使用BD公司專用的熒光校正微球對流式細胞儀進行校正，包括光電倍增管電壓的調節、熒光補償的調節，以及靈敏度的測試等，使流式細胞儀處于最佳的運行狀態。⑸結果分析：應用Multi-SET軟件測定淋巴細胞亞群包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16+56+的百分率和絕對計數及CD4+/CD8+比值；用CellQUEST Pro軟件測定淋巴細胞活化指標CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+，CD8+CD38+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和絕對計數并分析結果。⑹質量控制：數據均由同一技術人員（本文第一作者）在同一標準下進行讀取，數據分析和離群值的剔除則由本文3名作者共同完成。

1.3統計學分析采用SPS 10.0軟件進行統計學分析，檢測結果用均數±標準差（x±s）表示，兩組間均數差異比較采用t檢驗，多組間均數比較采用方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。以百分位數法確定95%可信區間建立正常值范圍。

2　結果

2.1不同年齡組健康兒童淋巴細胞亞群及活化結果淋巴細胞亞群及淋巴細胞活化指標除CD3-CD16+56+絕對計數在各年齡組間無差異（P>0.05）外，其余各個指標在不同年齡組之間的差異均有統計學意義（P<0.05），但各年齡組各種免疫表型均數與合并年齡組后的總體差別無統計學意義（P> 0.05），結果見表1、表2。結果顯示，CD3+絕對計數、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和絕對計數、CD4+/ CD8+比值隨著年齡的增長呈降低趨勢，CD4+Anti-HLA-DR+的百分率隨著年齡的增長呈增高趨勢。新生兒組CD3+、CD3+CD4+、CD4+CD38+、CD8+CD38+的百分率和絕對計數及CD4+/CD8+比值明顯高于其它年齡組，CD3-CD19+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和絕對計數明顯低于其它年齡組。

表1　不同年齡組健康兒童T淋巴細胞亞群免疫表型結果（±s）

表1　不同年齡組健康兒童T淋巴細胞亞群免疫表型結果（±s）

CD3＋CD3＋CD4＋CD3＋CD8＋年齡組　例數　百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）CD3＋CD4＋CD8＋CD3-CD19＋CD3-CD16＋56＋絕對計數（個/μl)新生兒組嬰兒組幼兒組學齡前組學齡組少青組合計F值P值83 97 98 106 103 106 593 78.5±7.0 64.6±7.0 66.8±5.6 67.6±5.9 66.4±5.5 65.2±7.1 67.5±7.4 43.0 <0.05 4484±1130 4691±1741 3590±1093 2566±671 2178±715 2030±705 3053±1428 111 P<0.05 54.5±7.6 40.9±6.4 37.4±5.8 34.1±5.9 31.5±5.6 31.9±5.5 36.8±9.1 145 <0.05 3111±831 2970±1181 2006±681 1289±372 1037±426 993±368 1724±1031 175 <0.05 22.9±7.3 21.1±6.4 24.1±4.6 26.2±5.7 27.2±6.7 27.39±6.1 25.2±6.5 14.8 <0.05 1330±564 1549±887 1299±477 1008±363 879±335 850±325 1110±556 28.4 <0.05百分比（%）0.45±0.50 0.92±0.29 0.05±0.26 0.02±0.13 0.11±0.37 0.14±0.38 0.13±0.38 4.8 <0.05絕對計數（個/μl) CD4＋/CD8＋百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）絕對計數（個/μl) 27.9±14.7 20.2±18.1 11.1±13.9 7.7±5.6 8.8±9.1 10.3±8.1 13.1±14.6 33.9 <0.05 2.61±0.99 2.16±0.91 1.63±0.49 1.39±0.54 1.20±0.34 1.24±0.40 1.60±0.80 74.7 <0.05 11.1±4.2 26.1±6.8 21.9±4.8 19.8±10.3 16.1±4.5 15.4±4.1 18.5±7.7 53.1 <0.05 641±255 1894±796 1165±395 726±284 548±310 489±212 872±615 148 <0.05 8.7±6.1 7.3±4.3 7.8±4.6 8.8±4.0 11.2±4.9 16.1±6.8 10.3±6.0 39.9 <0.05 542±515 557±508 431±316 330±178 376±218 513±281 443±340 2.2 >0.05

表2　不同年齡組健康兒童淋巴細胞活化結果（±s）

表2　不同年齡組健康兒童淋巴細胞活化結果（±s）

年齡組　例數　百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）絕對計數（個/μl) CD4＋CD38＋CD4＋Anti-HLA-DR＋新生兒組嬰兒組幼兒組學齡前組學齡組少青組合計F值P值83 97 98 106 103 106 593 52.1±5.8 44.8±8.1 35.1±6.6 27.8±6.0 22.9±6.1 19.3±5.7 31.3±12.5 320.5 <0.05 3101±902 2824±1020 1777±659 1050±309 852±627 616±285 1506±1088 216 <0.05 2.09±1.88 2.17±1.40 2.19±0.97 2.18±0.82 2.31±0.80 2.73±1.11 2.30±1.16 4.2 <0.05 CD8＋CD38＋CD8＋Anti-HLA-DR＋126±121 128±76 110±65 87±59 88±102 87±46 101±80 5.1 <0.05 21.5±6.5 21.4±6.0 21.9±5.6 18.5±4.5 16.0±3.9 12.9±4.0 18.3±6.0 51.7 <0.05 1307±560 1341±656 1067±419 699±274 554±278 402±187 828±528 87.2 <0.05百分比（%）1.39±2.33 4.38±4.07 5.69±3.55 4.94±2.37 5.78±4.26 5.83±2.76 4.96±3.57 18.0 <0.05絕對計數（個/μl) 90±140 287±352 287±226 186±106 192±152 182±106 208±200 11.4 <0.05

2.2不同性別淋巴細胞亞群及活化結果CD3+CD4+、CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+和CD8+CD38+的百分率和絕對計數在不同性別組之間的差異有統計學意義（P<0.05），表現為女童明顯低于男童，但男女分別與合并性別后的總體差別無統計學意義（P>0.05），結果見表3、表4。

2．3福州地區健康兒童淋巴細胞亞群及活化指標參考值范圍盡管性別和年齡對健康兒童淋巴細胞亞群及活化指標分布有差別，由于這種差別細微，可以建立統一的參考值范圍。本研究以百分位數法，采用國際臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦的95%可信區間確定參考值，結果見表5、表6。

2．4國內外不同地域健康人淋巴細胞亞群參考值比較本研究建立的健康兒童淋巴細胞亞群參考值與BD公司提供的歐美人以及國內外文獻建立的正常成人或兒童的參考值比較，表現為各項目的百分率范圍及CD4＋/CD8＋的比值均較一致，而絕對計數均高于文獻中的成人范圍，與以兒童為研究對象[9，18]的結果接近，結果見表7。

3　討論

本研究采用美國BD公司的流式細胞儀及配套的四色淋巴細胞亞群分析試劑盒，該試劑盒具有良好的穩定性，并應用MultiSET軟件以CD45-SSC點圖設門（Gating）測定淋巴細胞亞群，應用CellQuest Pro軟件以CD3-SSC點圖設門測定淋巴細胞的活化指標。上機前使用專用的熒光校正微球對流式細胞儀進行校正，使儀器各項指標在質控允許值范圍，保證了數據產生的一致性和可靠性。流式細胞術的發展使細胞免疫功能的檢測邁上了一個新臺階，目前，臨床使用流式細胞術檢測淋巴細胞亞群靈敏度高、重復性好，是一種快速、準確的評估和檢測機體免疫狀態的方法[5]。

受生態環境、社會經濟等多種因素影響，不同地區、不同種族、不同年齡、不同性別正常人群淋巴細胞亞群存在差異。Klose等研究比較發現，德國布基那法索地區、新加坡和坦桑尼亞地區正常成年人CD3+、CD4+及CD19+絕對計數有顯著差異[6]；浙江省與北京地區健康成年人相比，CD3+絕對值有顯著差異，這種差異也存在于國內其它地區

表3　不同性別健康兒童淋巴細胞免疫表型結果（±s）

表3　不同性別健康兒童淋巴細胞免疫表型結果（±s）

CD3＋CD3＋CD4＋CD3＋CD8＋年齡組　例數　百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）CD3＋CD4＋CD8＋CD3-CD19＋CD3-CD16＋56＋絕對計數（個/μl)男女合計308 285 593 t（男～女）值t（男～合）值t（女～合）值P（男～女）值P（男～合）值P（女～合）值67.9±7.6 67.1±7.1 67.5±7.4 1.33 3073±1476 2852±1349 3053±1428 1.90 37.5±9.2 36.0±8.9 36.8±9.1 2.02 1.08 1.24 <0.05 >0.2 >0.2 1845±1055 1590±988 1731±1044 3.03 1.54 1.57 <0.005 >0.1 >0.1 25.2±6.3 25.3±6.6 25.2±6.5 0.19絕對計數（個/μl) CD4＋/CD8＋百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）絕對計數（個/μl) 1178±525 1035±458 1110±556 0.002 >0.05>0.05>0.05百分比（%）0.14±0.38 0.11±0.39 0.13±0.38 0.97 14.6±6.6 14.5±5.5 13.1±14.6 0.2 1.63±0.79 1.57±0.71 1.60±0.75 0.5 9.8±6.0 10.7±5.9 10.3±6.0 1.84 449±352 437±328 443±340 0.29 >0.05>0.2 >0.2>0.5 19.2±8.7 17.7±6.1 18.5±7.7 2.44 1.19 1.67 <0.01 >0.2 >0.05 950±679 786±522 872±614 3.3 1.69 1.95 <0.01 >0.05 >0.05 >0.05>0.05

表4　不同性別健康兒童淋巴細胞活化結果（±s）

表4　不同性別健康兒童淋巴細胞活化結果（±s）

性別　例數　百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）絕對計數（個/μl)百分比（%）絕對計數（個/μl) CD4CD38CD4Anti-HLA-DR男女合計308 285 593 t（男～女）值t（男～總）值t（女～總）值P（男～女）值P（男～總）值P（女～總）值32.3±12.4 29.7±12.4 31.3±12.5 2.55 1.14 1.78 <0.05 >0.2 >0.05 1605±1093 1399±1074 1506±1088 2.32 1.29 1.38 <0.05 >0.1 >0.1 2.43±1.17 2.17±1.13 2.30±1.16 2.12 1.19 1.22 <0.0 >0.2 >0.05 CD8CD38CD8Anti-HLA-DR 108±85 93±73 101±80 2.34 1.25 1.45 <0.05 >0.2 >0.1 19.0±6.4 17.5±5.5 18.3±6.0 3.07 1.59 1.72 <0.05 >0.1 >0.05 884±556 767±489 828±528 2.7 1.45 1.68 <0.05 >0.1 >0.05百分比（%）5.17±3.95 4.73±3.09 4.96±3.57 1.71 1.10 1.27 >0.05 >0.2 >0.2絕對計數（個/μl) 220±219 194±176 208±200 1.60 0.84 1.02 >0.1 >0.2 >0.2＋＋＋＋＋＋＋＋

表6　福州地區0～18歲健康兒童淋巴細胞活化指標正常參考范圍（百分位數法確定95%可信區間）

[7，8，11]。年齡和性別也存在差異，由于兒童處于生長發育階段，其免疫系統經歷逐漸成熟的過程，不同的生長發育階段淋巴細胞亞群分布亦不同，國外研究表明[10]，淋巴細胞亞群分化及抗原表達與年齡緊密相關，嬰幼兒期表達CD4+和CD3-CD19+的百分率與絕對計數高于成人，且隨年齡增加而減低；而CD8+和CD3-CD16+CD56+的百分率與絕對計數高于成人，并隨著年齡增加而增加。肖婧等報道[8]兒童淋巴細胞亞群分布存在明顯年齡和性別的差異，男女兒童各年齡組間外周血淋巴細胞亞群分布總體上有顯著差異，而男女性別間CD3+、CD3+CD4+和CD3-CD56+的百分率和絕對值比較差異均有統計學意義。因此不同地區的不同人群應建立本地區統一的正常參考值范圍。但是由于使用流式細胞術調查外周血淋巴細胞亞群正常參考值的成本較高等因素，目前尚無中國健康兒童不同年齡外周血淋巴細胞亞群較為科學的參考范圍，只有為數不多的實驗室建立了自己的參考值[7-9，11，12]，大多數實驗室使用的都是國外的參考值，顯然不適合中國人的疾病診斷和治療。T細胞活化是T細胞特異性識別抗原提呈細胞所提呈的抗原肽-組織相容性復合物分子，并被激活和發生增殖，進而分化為效應細胞的過程，與病毒感染有關，活化指標比常規使用的T細胞亞群更敏感，可用于監測抗病毒治療后患者是否出現全面的免疫重建，健康兒童淋巴細胞活化指標的調查及正常參考范圍國內未見報道。活化淋巴細胞的標志表達在T細胞活化的不同時期[13，14]，CD38表達在胸腺細胞、活化T淋巴細胞等免疫系統中，CD38分子通過對激活信號的轉導，促進T細胞的激活，在T、B淋巴細胞分化的早期表達，在成熟中期丟失，在成熟晚期又出現，被認為是常用的活化淋巴細胞標志物；HLA-DR是MHCⅡ類抗原，表達在B細胞、單核細胞、巨噬細胞、活化T細胞、活化NK細胞和人祖細胞，HLA-DR是T細胞晚期活化的標志。文獻報道[15，16]，在兒童常見感染性疾病中，EB病毒(EBV)感染后患兒急性期CD3+、CD8+、CD3+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+和CD8+CD38+比例明顯增高，CD3+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+、CD8+CD38+比例與患兒體溫呈負相關，巨細胞病毒(CMV)感染患兒CD8+CD38+比例顯著高于肺炎支原體(MP)感染患兒，MP感染患兒急性期淋巴細胞CD3+細胞比例顯著低于正常兒童，CD8+CD38+細胞比例顯著低于柯薩奇病毒(COX)感染患兒。SARS患者CD4+CD38+的表達降低[17]，降低的水平與SARS病情嚴重程度相關，CD4+CD38+的表達的檢測有助于SARS與肺炎支原體感染的鑒別。為此，本研究對593例健康兒童外周血淋巴細胞亞群及T細胞部分活化指標CD38、HLA-DR進行了檢測，以建立福州地區健康兒童外周血淋巴細胞亞群及活化正常參考范圍，以便為臨床研究機體的免疫功能以及免疫相關性疾病提供可靠的診斷依據。

表7　國內外文獻建立淋巴細胞亞群參考值比較

本結果顯示健康兒童各年齡組之間淋巴細胞亞群及活化指標除CD3-CD16+56+絕對計數外，其余各項指標CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+的百分率和絕對計數以及CD3-CD16+56+的百分率差異均有統計學意義，CD3+絕對計數、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和絕對計數、CD4+/CD8+比值隨著年齡的增長呈降低趨勢，與國內報道[8，12]一致。本研究顯示CD3＋CD8+、CD4+Anti-HLA-DR+的百分率隨著年齡的增長呈增高趨勢。本研究同時顯示不同性別之間淋巴細胞亞群及活化結果，CD3+CD4+、CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+和CD8+CD38+的百分率和絕對計數的差異有統計學意義，表現為女童明顯低于男童，與國內報道[8]一致，但男女分別與合并性別后的總體差別無統計學意義。CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD16+56+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和絕對計數在不同性別組之間無顯著性差異。本研究建立的健康兒童淋巴細胞亞群參考值與BD公司提供的歐美人以及國內外不同地區文獻[7-12]建立的正常成人或兒童的參考值比較，表現為各項目的百分率范圍及CD4+/CD8+的比值均相近，而絕對計數均高于文獻中的成人范圍，但與以兒童為研究對象的廣州地區[9]及美國芝加哥Thomas[18]的報道一致，而少青組的絕對計數接近成人水平，我們認為主要與兒童期尤其是7歲以前淋巴細胞生理性增多有關，同時提示存在種族及地區差異，也與不同實驗室使用流式細胞儀不同和選擇參考值統計學方法不同有關。由于新生兒自身的免疫功能尚未完全的生理特點，本研究特色之處在于收集了83例新生兒分析淋巴細胞亞群及活化，國內未見此年齡組的相關報道。結果顯示，新生兒組CD3+、CD3+CD4+、CD4+CD38+、CD8+CD38+的百分率和絕對計數及CD4+/CD8+比值明顯高于其它年齡組，與國外報道[13]相似，但百分率的中位數（比國外）CD3+（78%比83%）、CD3+CD4+（55%比63%）均低于國外報道。而CD3-CD19+、CD8+Anti-HLA-DR＋的百分率和絕對計數明顯低于其它年齡組，與Maurice[19]報道在新生兒和成人之間CD8+Anti-HLA-DR+水平及B淋巴細胞的比例沒有差異不同。由于收集新生兒標本難度，本組雖然例數相對較少，但研究中產生的正常范圍應該為新生兒淋巴細胞亞群及活化的變化的評估提供了一個有意義的新工具。

通過以上分析，本文認為不同地域、不同種族、不同性別、不同年齡間健康兒童外周血淋巴細胞亞群及活化指標存在著差異，由于這種差別細微，可以在同一種族同一區域建立統一的正常參考值范圍。本研究所得結果基本能反映本地區健康兒童外周血淋巴細胞亞群及活化指標的水平，本研究成功建立福州地區健康兒童淋巴細胞亞群及活化的正常參考范圍作為正常范圍參考值，對監測和評價機體免疫功能，對疾病的診斷分期、治療評價、和預后判斷有重要指導意義。

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中圖分類號：R446.62

文獻標識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)03-0298-06

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.013

基金項目：福州市科技計劃項目（編號2013－S－127－4）

作者簡介：林珊，1968年2月出生，女，主任技師，主要從事臨床血液免疫學檢驗研究。

(收稿日期2016-03-10；修回日期2016-05-04)

Establishment of the reference ranges for normal values of peripheral blood lymphocyte subsets and the main related pa -rameters of activation for healthy children in Fuzhou areas

LIN Shan，GAO Hong，LI Jing，et al. Department of Clinical labo-ratory，Fujian Province Fuzhou Children Hospital，Fuzhou 350005，Fujian Province，China.

Abstract：Objective To establish the reference range of peripheral blood Lymphocyte subsets and the main related parameters of activation for healthy children in Fuzhou areas. Methods A total of 593 peripheral blood samples were collected from healthy children aged from 0 to 18 years in the study. The included children were divided into newborn group(0-28d)，infant group (28d-12m)，toddler age group(1-3y)，preschool age group(3-7y)，school age group(7-12y) and adolescence age group(12-18y). The percentages and absolute counts of lymphocyte subsets of T cell CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，B cell CD3-CD19+，NK cell CD3-CD16+CD56+and activated T cells CD4+CD38+，CD4+Anti-HLA-DR+，CD8+CD38+，CD8+Anti-HLA-DR+were detected by flow cytometry with four-color fluorescent monoclonal antibody. MultiSET software was used to collect and analyze data，and statistical analysis was performed using SPSS 10.0. 95% confidence interval was used to determine normal reference values. Results Except for the absolute counts of CD3-CD16+56+，percentages and absolute counts of all the lymphocyte subsets and lymphocyte activation index showed significant differences between different age groups. Absolute counts of CD3+T cell，lymphocyte percentages and absolute counts of CD3+CD4+，CD4+CD38+and the ratio of CD4+/CD8+were declined with age. CD4+Anti-HLA-DR+percentage was increased with age. The percentages and absolute counts of CD3+，CD3+CD4+，CD4+CD38+，CD8+CD38+and the ratio of CD4+/CD8+in newborn group showed significantly higher than those in other age groups，while the percentages and absolute counts of CD3-CD19+and CD8+Anti-HLA-DR+showed significantly lower than those in other age group. The percentages and absolute counts of CD3+CD4+，CD3-CD19+，CD4+CD38+，CD4+Anti-HLA-DR+and CD8+CD38+showed significant differences between males and females，and those in females were significantly lower than males. The absolute counts of lymphocyte in children were higher than in adults. Conclusions The distribution of immunophenotype of peripheral blood lymphocyte in healthy children showed slight differ-ence in gender and among different age groups，so the uniform reference range of Lymphocyte subsets and activated T cells in healthy children could be established in the same area and the same race. The reference ranges of lymphocyte subsets and activated T cells could be proposed by the present study for healthy children in Fuzhou Areas.

Key words:Lymphocyte subsets；Activated lymphocyte；Flow cytometry；Child；Normal reference value