間接免疫熒光法檢測丙型肝炎抗體陽性獻血者血清自身抗體譜出現特征

劉鵬，陳紅，徐煒

(1、九江市中心血站，江西　九江332000；2、九江學院臨床醫學院附屬醫院，江西　九江332000)

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·檢驗與臨床·

間接免疫熒光法檢測丙型肝炎抗體陽性獻血者血清自身抗體譜出現特征

劉鵬1，陳紅1，徐煒2

(1、九江市中心血站，江西九江332000；2、九江學院臨床醫學院附屬醫院，江西九江332000)

摘要：目的了解丙型肝炎抗體陽性獻血者自身抗體出現特征。方法收集2014年1月1日至2015年6月30日九江市中心血站HCV抗體篩查陽性獻血者108例，另選取同期HCV抗體篩查陰性獻血者30例作為對照組。采用間接免疫熒光法檢測抗核抗體（ANA）、抗線粒體抗體（AMA）、抗平滑肌抗體（SMA）、抗肝腎微粒體抗體（LKM），抗胃壁細胞抗體（PCA）檢測，分析自身抗體分布特征。結果丙型肝炎抗體陽性獻血者自身抗體IgG陽性率為46.3%（50/108），高于對照組的3.33%（1/ 30），差異有顯著性統計學意義（P<0.01）；不同自身抗體可在同一丙型肝炎抗體陽性獻血者中檢出，但以單一抗體出現為主。五種自身抗體陽性率有顯著差異（P<0.01），其中ANA陽性率最高30.6%（33/108），其次為SMA13.9%（15/108）、AMA11.1% （12/108）及LKM4.6%（5/108）、PCA1.9%(2/108)。結論ANA和SMA是丙型肝炎獻血者最常見的自身抗體；抗體出現可呈多重性。

關鍵詞：丙型肝炎；自身抗體；抗核抗體；抗平滑肌抗體

近年來，關于丙型肝炎患者體內能檢測到自身抗體的報道越來越多，為了解丙型肝炎抗體陽性獻血者出現自身抗體特征，本實驗采用間接免疫熒光法對108例血站HCV抗體篩查陽性獻血者血清同時進行5種常見的自身抗體的檢測，包括：抗核抗體（Antinuclear antibodies，ANA）、抗線粒體抗體（Anti-mitochondrial antibody，AMA）、抗肝腎微粒體抗體(Anti-liver-kidney microsomal antibody，LKM)、抗平滑肌抗體（Anti-smooth muscle antibody，SMA）、抗胃壁細胞抗體（Anti-parietal cell antibody，PCA），同時選取30例血站HCV抗體篩查陰生獻血者血清作為對照組。了解慢性丙型肝炎獻血者自身抗體出現情況，為今后臨床醫生制定有效治療方案提供依據。

1　對象與方法

1.1對象本研究納入2014年1月1日至2015 年6月30日在九江市中心血站參加無償獻血的丙型肝炎抗體篩查陽性獻血者108例，其中男58例，女50例，年齡20~54歲，平均（37±17）歲。另選取同期HCV抗體篩查陰性獻血者30例作為對照組，年齡18~48歲，平均（33±15）歲；本研究涉及的獻血資料均經過獻血者知情同意。

1.2方法

1.2.1自身抗體檢測留取丙型肝炎抗體篩查陽性

108例和陰性30例獻血者血清于-80℃保存，統一時間檢測。采用德國毆蒙間接免疫熒光試劑盒檢測ANA、SMA、AMA、LKM、PCA。嚴格按說明書操作，采用Olympus BX-51熒光顯微鏡進行觀察。

1.2.1統計學分析采用SPSS 18.0統計軟件進行χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義，P<0.01為差異有顯著性統計學意義。

2　結果

2.1自身抗體出現特征108例丙型肝炎抗體陽性獻血者有50例檢出自身抗體陽性，陽性率46.3%，對照組有1例檢出自身抗體陽性，陽性率為3.33%，兩組比較陽性率有顯著差異（P<0.01）。丙型肝炎抗體陽性獻血者中有36例1種抗體陽性，陽性率為33.3%；14例同時出現多種抗體陽性，其中11例呈現出2種抗體陽性，陽性率為10.2%，3例3種抗體陽性，陽性率為2.8%。因此，實際檢測出陽性抗體數為67（圖1）。3組進行χ2檢驗顯示差異有統計學意義（P<0.05）。丙型肝炎抗體陽性獻血者自身抗體主要以1種抗體為主，2種同時陽性可見，3種及以上同時陽性少見。

2.25種自身抗體陽性分布特征本研究對67株自身抗體陽性分布及構成比進行了分析（表1），5種自身抗體出現的陽性率差異有顯著性統計學意義（P<0.01）。組內比較表明：ANA陽性率高于SMA（P<0.01），差異有顯著性統計學意義；而SMA陽性率高于AMA、AMA高于PCA、PCA高于LKM，但差異均無統計學意義（χ2=0.417，P=0.518、χ2= 3.301，P=0.069、χ2=1.357，P=0.244），由此可見，ANA陽性率最高，而LKM陽性率最低。

圖1　自身抗體陽性類型

表1　67株自身抗體陽性分布及構成比

2.3抗體滴度特征ANA陽性樣本中有30例滴度≥1：320，僅3例為1：100，高滴度陽性率達到90%。其他自身抗體滴度均為1：100，因此，除ANA以高滴度為主，其余自身抗體以低滴度狀態出現（表2）。

表2　ANA滴度分布

3　討論

丙型肝炎患者大多數體內會產生自身抗體，特別是自身免疫性肝病相關的自身抗體，無論是兒童還是成人[1-3]。以往研究大多數評估慢性丙型肝炎患者自身抗體的陽性率，本文首次評估具有代表性的無償獻血者人群丙型肝炎抗體陽性自身抗體出現特征，采用德國歐蒙自身抗體譜間接免疫熒光法試劑，檢測獻血者血清ANA、SMA、AMA、PCA及LKM，分析這些抗體在丙型肝炎抗體陽性獻血者中出現陽性率及分布特征。

文獻報道自身抗體在慢性丙型肝炎成人體內出現率70%以上，這些自身抗體主要包括抗核抗體、甲狀腺過氧化物酶抗體和甲狀腺抗體、胰島素相關抗體以及抗核小體抗體等[4-8]。本研究選擇的抗體檢測結果顯示，108例丙型肝炎抗體陽性獻血者有50例檢出自身抗體陽性，陽性率46.3%，與文獻報道有所不同，這與人群選擇及檢測項目有一定的關系。

本研究結果顯示，丙型肝炎抗體陽性獻血者中有36例1種抗體陽性，陽性率為33.3%；14例同時出現多種抗體陽性，其中11例呈現出2種抗體陽性，陽性率為10.2%。因此丙型肝炎抗體陽性獻血者自身抗體主要以1種抗體為主，2種同時陽性可見，3種及以上同時陽性少見，ANA和AMA陽性率較高，而LKM陽性率最低，且自身抗體除ANA以高滴度出現為主外，其余自身抗體呈現低滴度趨勢。但陽性率顯著高于對照組，提示HCV感染易引起自身免疫反應，使感染者出現多種自身抗體，反映體內免疫功能已出現紊亂，同時提示也可能有利于病毒的復制。

ANA是對細胞核抗原具有不同特異性的自身抗體的總稱，對混合結締組織病，及其他風濕性疾病的診斷具有重要意義。AMA是對原發性膽汁性肝硬化診斷具有高度靈敏度和特異性指標[9]?，F已有研究表明，引起自身免疫是HCV致病的一個重要機制，如AMA、LKM等可加重肝細胞損傷，誘發自身免疫性肝炎（AIH）、原發性膽汁性肝硬化等自身免疫性疾病，一般情況下，丙型肝炎與AIH較容易鑒別，如出現病毒感染和自身免疫現象共存時鑒別經常比較困難，由于丙型肝炎與AIH其治療方案完全不同[10，11]，因此，檢測AIH相關自身抗體對于肝臟疾病的診斷及治療具有重要作用[12-15]。鄧紀望等[16]也指出，AIH患者血清中ANA的陽性率高于丙型肝炎患者，且AIH患者ANA以高滴度為主，丙型肝炎患者則以低滴度抗體為主。因此，對HCV抗體陽性獻血者進行自身抗體檢測及對抗體分布和滴度特征的了解至關重要，為今后臨床制定有效治療方案提供依據。

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中圖分類號：R512.6+3，R446.62

文獻標識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)03-0360-03

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.030

(收稿日期2016-01-19；修回日期2016-03-21)