金蕎麥藥酒對膠原誘導關節炎模型大鼠IL-22、IL-18及TNF-α的影響

萬進軍　潘朝旺

鄂州職業大學醫學院，湖北　鄂州　436000

?

金蕎麥藥酒對膠原誘導關節炎模型大鼠IL-22、IL-18及TNF-α的影響

萬進軍潘朝旺

鄂州職業大學醫學院，湖北鄂州436000

【摘要】目的：觀察金蕎麥藥酒對膠原誘導關節炎大鼠模型血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響。方法：將Wistar大鼠隨機分成6組，空白組、模型對照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組，建立Ⅱ型膠原誘導關節炎大鼠模型，檢測血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α的含量。結果：與空白組比較，模型對照組血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α明顯升高；與模型組比較，各給藥組的上述指標均得到改善。結論：金蕎麥藥酒治療類風濕關節炎的機制可能與降低IL-22、IL-18、TNF-α有關。

【關鍵詞】金蕎麥藥酒；膠原誘導關節炎；白細胞介素-22；白細胞介素-18；腫瘤壞死因子-α

金蕎麥別名苦蕎麥、蕎麥當歸、蕎麥三七、金鎖銀開、賊骨頭、鐵拳頭、土茯苓等；其性涼，味辛、苦，具有清熱解毒、活血化瘀、健脾利濕的作用。金蕎麥藥酒在民間用于治療類風濕關節炎(RA)效果明顯，課題組前期研究也證明金蕎麥藥酒具有明顯的鎮痛抗炎作用[1]，但尚未見關于抗RA作用的研究。實驗旨在研究金蕎麥藥酒對Ⅱ型膠原誘導關節炎模型(CIA)大鼠血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響，探討其抗RA免疫作用機制，為金蕎麥應用于RA提供理論依據。

1儀器與材料

1.1藥物雷公藤多苷片(批號：20131114，浙江得恩德制藥有限公司)；金蕎麥藥酒，以金蕎麥根莖及塊根計，每毫升藥酒相當于0.4g原藥材，本院自制。

1.2動物Wistar大鼠60只，體重(200±20)g，SPF級，雌雄各半，合格證號：SCXK(鄂)2011-0012，由三峽大學實驗動物中心提供。

1.3試劑完全弗氏佐劑(FCA)、雞Ⅱ型膠原(CⅡ)由sigma 公司提供；白細胞介素-22(IL-22)、白細胞介素-18(IL-18)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)測定試劑盒由上海酶聯生物科技有限公司提供。1.4儀器UV754紫外可見分光光度計(上海佑科儀器儀表有限公司)；臺式冷凍離心機(上海安亭科學儀器公司)。

2方法

2.1動物造模及分組給藥隨機抽取10只大鼠，為空白組，其余50只建立Ⅱ型膠原誘導關節炎模型[2-3]。用0.2%醋酸將CⅡ溶解，使其濃度為2mg/ml，放置過夜(4℃條件下)，與FCA按1∶1比例混合，在冰浴中乳化，得到CⅡ乳劑，對每只大鼠右后肢足趾、背部及尾根部3點皮內共注射0.4ml，在相同部位3點對空白組注射生理鹽水0.1ml。所有造模大鼠7d后加強免疫1次，即按原方法注射CⅡ乳劑0.2ml。將造模大鼠隨機分為5組，即模型對照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組。空白組，模型對照組于造模后給予生理鹽水15ml/(kg·d)，雷公藤多苷組給予雷公藤多苷片0.03g/(kg·d)，金蕎麥高、中、低劑量組分別給予金蕎麥藥酒5.40、2.70、1.35ml /(kg·d)，相當于原生藥2.16、1.08、0.54g/(kg·d)，連續給藥21d。

2.2血清TNF-α、IL-22、IL-18的測定末次給藥2h后，將大鼠用3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，固定，腹總動脈取血，離心，制備血清，按試劑盒說明測定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。2.3滑膜細胞TNF-α、IL-22、IL-18的測定取大鼠后肢右膝關節，分離出滑膜，剪碎，用生理鹽水1∶20勻漿，按試劑盒說明測定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。

3結果

3.1對血清TNF-α、IL-22、IL-18的影響與空白組比較，模型對照組小鼠血清TNF-α、IL-22、IL-18含量升高，差異有統計學意義(P<0.01)；雷公藤多苷組和金蕎麥藥酒各劑量組與模型組相比，血清TNF-α、IL-22、IL-18含量降低，除低劑量組IL-22無明顯差異外，其他組別和指標差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

組別劑量/g/kgTNF-α/ng/LIL-22/ng/LIL-18/ng/L空白組生理鹽水268.46±83.50**136.29±21.06**258.36±23.09**模型對照組生理鹽水473.54±102.69210.35±28.64365.31±35.60雷公藤多苷組0.03302.34±89.28**148.09±19.28**272.05±28.64**金蕎麥高劑量組2.16296.76±83.51**146.35±24.98**275.32±22.92**金蕎麥中劑量組1.08312.0±75.24**154.36±24.69**278.32±23.57**金蕎麥低劑量組0.54332.18±94.72*184.82±33.57296.12±38.38*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2對滑膜細胞TNF-α、IL-22、IL-18的影響與空白組比較，模型對照組小鼠血清TNF-α、IL-22、IL-18含量升高，差異有統計學意義(P<0.01)；雷公藤多苷組和金蕎麥藥酒各劑量組與模型組相比，血清TNF-α、 IL-22 、IL-18含量降低，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表2。

組別劑量/g/kgTNF-α/ng/LIL-22/ng/LIL-18/ng/L空白組生理鹽水37.4±12.5**22.8±3.5**15.3±2.0**模型對照組生理鹽水57.5±15.631.2±4.926.1±3.6雷公藤多苷組0.0342.3±13.2**24.5±5.3**17.0±2.6**金蕎麥高劑量組2.1641.7±15.1**24.3±4.7**17.3±2.4**金蕎麥中劑量組1.0843.0±13.4**26.3±3.6*18.5±2.9**金蕎麥低劑量組0.5447.1±14.2*26.8±4.7*19.1±3.5*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3討論

RA是一種以關節滑膜炎癥為主要表現的自身免疫性疾病。研究表明，NK細胞在RA發病過程中發揮重要作用[4]，NK-22細胞是不同表型的NK細胞之一，RA患者血液和滑液中NK-22細胞明顯高于正常人[5]。IL-22是NK-22細胞分泌的細胞因子之一，能促進類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞增殖，是促成纖維樣滑膜細胞增生的細胞因子[6]，在RA的病理過程中發揮重要作用。IL-18作為一種新型IL家族促炎細胞因子，主要與IL-18受體結合發揮效應。實驗表明，RA患者血清IL-18明顯升高，其水平與病情呈正相關[7]，提示IL-18參與RA病情的活動，其作用與促進T細胞增殖和NK細胞的細胞毒作用，誘導以Th1細胞為主的細胞免疫反應，使病變組織 Th1/Th2比例失衡有關[8]。TNF-α是一種免疫調節和前炎性因子，在病變關節中可促進前列腺素E2(PGE2)等多種炎癥介質釋放，引起關節軟骨的吸收破壞，促進成纖維細胞的增生；且TNF-α常與IL-1β一起合成與釋放，是致病機制中一對重要的促炎癥細胞因子，參與了RA發生、發展的全過程。

在RA患者病變關節滑膜內，巨噬細胞數量明顯增多，其不僅與關節疼痛數、壓痛數、血沉、C 反應蛋白等反應RA病情程度的指標呈明顯的正相關，還與X線關節破壞的侵蝕積分和狹窄積分呈明顯的正相關[9]，可能與其釋放IL-22、IL-18、TNF-α等炎性因子有關。

本實驗研究表明，金蕎麥藥酒對CIA大鼠免疫功能有明顯影響，可降低血清和滑膜細胞IL-22、IL-18、TNF-α含量，這些可能是其治RA的作用機制之一。

參考文獻

[1] 程友斌，潘洪林. 金蕎麥抗炎活性部位篩選研究[J]．時珍國醫國藥，2009，20(9)：2219-2220．

[2] 徐琦，尹抗抗，譚達全，等.麻黃加術湯對大鼠類風濕性關節炎模型作用機制的研究[J]．湖南中醫藥大學學報，2011，31(5)：13-15．

[3] 馬艷苗，王永輝，李艷彥，等. 風濕寧膠囊對膠原誘導性關節炎大鼠滑膜細胞超微結構及細胞凋亡相關基因表達的影響[J]．中醫雜志，2013，54(4)：326-328．

[4] Ahern DJ,Brennan FM. The role of Natural Killer cells in the pathogenesis of rheumatoid arthritis: major contributors or essential homeostatic modulators [J]. Immunol Lett,2011,136(2):115-121.

[5] Ren J,Feng Z,Lv Z,et al. Natural killer-22 cells in the synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis are an innate source ofinterleukin 22 and tumor necrosis factor-α[J].J Rheumatol,2011,38(10):2112-2118.

[6] 任潔，周毅，吳會霞，等. NK-22細胞及IL-22相關功能分子在類風濕關節炎滑膜細胞增殖中的作用[J]．南方醫科大學學報，2014，34(1)：20-24．

[7] 任敏，武加標，湯麗，等. 類風濕關節炎患者外周血單核細胞TLR4的表達與血清IL-18水平變化的相關性研究[J]．中華臨床免疫和變態反應雜志，2013， (1)：22-26．

[8] Pay S，Erdem H，Pekel A，et al.Synovial proinflammatory cytokines and their correlationw ithmatrix metalloprote inase-3 expression in Behcets′ disease Does interleuk in-1 beta play a major role in Behcets′ synovitis [J]. Rheumatol, 2006, 26(7):608-613.

[9] 戴冽，湯美安，尹培達，等. 滑膜巨噬細胞與類風濕關節炎病情活動及關節破壞的相關性[J]．中華風濕病學雜志，1999，3(4)：229-231．

基金項目：湖北省教育廳科學技術研究項目(B2014176)；鄂州職業大學科研重點項目(2015zd06)。

作者簡介：萬進軍(1971-)，男，湖北鄂州人，副教授，主要從事藥學的教學與科研。

【中圖分類號】R285.5

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)10-0016-02

(收稿日期：2016.03.27)

Influence of Fagopyrum Dibotrys Medicinal Liquor on IL-22，IL-18 andTNF-α of Collagen-induced Arthritis Model Rats

WAN JinjunPAN Chaowang

Ezhou Polytechnic,Ezhou 436000,China

Abstract:Objective To observe the influence of fagopyrum dibotrys medicinal liquor on IL-22，IL-18 and TNF-αof collagen-induced arthritis model rats.Methods 60 wistar rats were divided into 6 groups at random：blank group, model group,high dose fagopyrum dibotrys group， low dose fagopyrum dibotrys group，and glucosidorum tripterygll totorum group. The rat model of Ⅱ collagen-induced arthritis (CIA) was established. The IL-22，IL-18，TNF-α of the serum and synoviocytes were determined. Results The serum and synoviocytes IL-22，IL-18，TNF-α were increased，compared with blank group. The above index were ameliorated in treatment groups.Conclusion The mechanism of fagopyrum dibotrys medicinal liquor for rheumatoid arthritis maybe related to adjust IL-22，IL-18，TNF-α.

Key words:fagopyrum dibotrys medicinal liquor；collagen-induced arthritis；IL-22；IL-18；TNF-α