血清白血病抑制因子在體外受精-胚胎移植中的預測價值

俞 佳

血清白血病抑制因子在體外受精-胚胎移植中的預測價值

俞 佳

體外受精；胚胎移植；輔助生殖技術；白血病抑制因子

體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET）是輔助生殖技術的核心部分，也是治療不孕癥的有效方法之一，但IVF-ET存在低妊娠率及高流產率。白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）是一種分泌型糖蛋白，在分泌期的中、晚期子宮內膜中，LIF呈短暫性、爆發性增高，水平增至增生期的4～5倍。LIF在大量表達的同時，伴隨胚泡白血病抑制因子受體（LIFR）的表達，這有利于胚泡與子宮內膜的結合。在著床過程中，LIF和LIFR結合激發著床，還可刺激滋養層細胞分泌纖連蛋白，使胚泡容易與子宮內膜接觸、黏附，且同時形成物質交換的通道，促進胚胎著床的成功。因此，通過檢測LIF，及早有效預測IVF-ET結局，對防治先兆流產，及早診斷異位妊娠，改善妊娠結局，降低自然流產率具有重要的臨床意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料2013年1月—2014年12月在我院生殖醫學科就診的體外受精-胚胎移植患者。據胚胎移植后14天血人絨毛膜促性腺激素（HCG）水平，將入組的患者分為妊娠組（HCG≥10IU/L）、未妊娠組（HCG＜10IU/L），各30例。妊娠組年齡20～35歲，平均（28.11±2.23）歲；不孕病程1～9年，平均（3.71± 1.51）年；既往生育0～1個，平均生育（0.21±0.04）個。移植后14天血HCG 259.5～902.2IU/L，平均血HCG（421.01±55.67）IU/L。未妊娠組年齡21～34歲，平均（27.69±2.54）歲；不孕病程1～8年，平均（3.90±1.67）年；既往生育0～1個，平均生育（0.22±0.03）個。移植后14天血HCG 0.1～9.3IU/L，平均血HCG（2.2± 1.48）IU/L。兩組既往無肝臟、心臟、腎臟和腦原發疾病，近6個月未使用過免疫抑制藥物，無中毒及自身免疫性疾病史者。

1.2 診斷標準體外受精-胚胎移植西醫診斷標準參照《婦產科學》[1]相關內容制定：從婦女卵巢內取出卵子，在體外與精子受精并培養一階段（包括卵細胞漿內單精子注射），再將發育到一定時期的胚胎移植到宮腔內，使其著床發育成胎兒的全過程。

1.3 納入、排除標準納入標準符合上述診斷標準，患者知情并同意進入觀察隨訪者。排除標準：生殖器官發育異常者；未按規定來院隨訪，無法判斷結果，或者資料不全無法判斷結果者；參加其他臨床試驗的患者。

2 治療方法

患者體外受精-胚胎移植后予黃體酮針40mg，1天2次，肌肉注射，地屈孕酮片10mg，1天2次，口服；補佳樂片3mg，1天2次口服治療。

觀察指標：于胚胎移植后7天、14天抽取靜脈血5mL，采用ELISA法檢測LIF水平。比較妊娠組與未妊娠組間胚胎移植后7天、14天血LIF水平。隨訪妊娠組患者，比較異位妊娠組與正常宮內妊娠組間胚胎移植后7天、14天血LIF水平。人白血病抑制因子（LIF）ELISA試劑盒由上海將來實業有限公司提供（批號201408，微孔板號140827002-LIF）。

統計學方法：應用SPSS17.0統計軟件進行處理數據，計量資料以均數±標準差（x±s） 表示。組間比較采用成組t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

妊娠組與未妊娠組移植后7天LIF比較，差異有統計學意義（P＜0.05），兩組間移植后14天LIF比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。兩組移植后7天與14天LIF比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。正常宮內妊娠組與異位妊娠組移植后7天LIF比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；兩組14天LIF比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。兩組移植后7天與14天LIF比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表1 妊娠組、未妊娠組移植后7天、14天血LIF比較（x±s）

表2 正常宮內妊娠組、異位妊娠組移植后7天、14天LIF比較（ng/L，x±s）

4 討論

體外受精-胚胎移植技術經過幾十年的快速發展，隨著臨床促排卵方案及實驗室胚胎培養體系的不斷進步與完善，IVF-ET成功率從最初20%提高到目前的50%[2]。但因其流產率較高，活產率低，對IVF-ET患者的精神心理及經濟上都有極大的負擔。

LIF是白細胞介素-6家族中的一員。研究證實，LIF的異常表達與腫瘤、異位妊娠等多種疾病的發病有著密切的關聯[3]。究其原因在于LIF不僅能抑制白血病細胞的增殖，還能調節包括原始生殖細胞、胚胎干細胞、肝細胞以及內皮細胞等在內的多種細胞其生長、發育、分化及著床等過程[4]。LIF與受體結合后，激活了細胞膜上gpl 30蛋白，從而形成二聚體。它能讓細胞內一群非受體的酪氨酸激酶磷酸化，同時激活下游的轉錄因子，促進滋養細胞分泌及內細胞團生長[5]。轉基因動物實驗證實，敲除LIF基因的小鼠能產生胚泡，但不能著床，如將此胚泡植入到野生型假孕小鼠體內，則能著床并成功發育[6]。因此，在輔助生殖技術中，LIF表達峰值與著床時間的一致，是著床的關鍵因素，影響著體外受精-胚胎移植的最終結局。

本研究通過觀察LIF在IVF-ET結局中的預測價值，嘗試探討其作用機制。研究中，妊娠組與未妊娠組分別在胚胎移植后7天、14天的LIF值比較均有統計學意義（P＜0.05）。一般情況下，在胚胎移植入宮腔后會游走2～3天，尋找適合著床的位置，在此過程中，亦會游走至子宮體以外的部位著床，異位妊娠因此發生。妊娠組胚胎移植后7天、14天血LIF值明顯高于未妊娠組，且差異有統計學意義，說明在妊娠組患者中，血清LIF表達率較高，胚胎著床率較高。妊娠組移植后7天與14天比較差異無統計學意義，這說明LIF在移植后7天已處于一個較高表達的狀態，這與胚胎著床的時間相一致。對照未妊娠組，移植后7天、14天血LIF均處于一個較低的水平，LIF分泌不足，也間接印證了LIF的表達與胚胎著床息息相關。胚胎著床后，著床部位很大程度上決定了妊娠的走向。本研究發現，正常宮內妊娠組，移植后7天與14天血LIF均處于一個較高且較穩定的水平，這在一定程度上提示胚胎的后續發育良好。異位妊娠組，移植后7天LIF同正常宮內妊娠組一樣，處于一個較高水平，移植后14天時數值較前下降，但差異無統計學意義。移植后14天正常宮內妊娠組LIF與異位妊娠組相比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。異位妊娠患者血LIF水平低，這與Wegner等[7]研究結果相似。晏長榮等[8]研究亦發現，血清LIF在正常宮內妊娠組水平最高，先兆流產組次之，異位妊娠組最低。這可能是因為異位妊娠時受精卵植入環境惡劣，即便在著床前期異位妊娠部位產生LIF較正常的水平高，但其血清的LIF水平與正常宮內妊娠比較，仍偏低。而且在胚胎著床以后，異位妊娠組的LIF下降與宮內妊娠組比較更明顯。上述結果提示我們，隨著妊娠的持續進行，異常部位的妊娠不能引起LIF的持續高表達，這能在一定程度上預測胚胎移植的結局，及早進行干預及處理，改善妊娠結局，同時避免在異位妊娠中出現包塊破裂、大出血、甚至危及生命等情況。

本研究結果表明，LIF能在一定程度上預測胚胎移植后的結局，這與LIF參與胚胎生長、發育、分化及著床等過程有密切關系。但其對自然流產率、活產率等數據的預測價值，仍需進一步的研究。（本研究受到杭州市紅十字會醫院院內課題研究項目資助[（No.hhyn201202）]

［1］樂杰，謝幸，林仲秋，等.婦產科學［M］.第7版.北京：人民衛生出版社，2008：354.

［2］鄧偉民，趙彥鵬，葛明曉，等.益氣血補肝腎中藥對再次體外受精-胚胎移植妊娠率的影響［J］.廣州中醫藥大學學報.2011，28（2）：20-23.

［3］Shin JE，Su HP，Jang YK.Epigenetic up-regulation of leukemia inhibitory factor（LIF）gene during the progression to breast cancer［J］.Molecules&Cells，2011，31(2)：181-189.

［4］鐘富琴，劉榮華.白血病抑制因子在輸卵管妊娠的表達及其在診斷方面的意義［J］.中國婦幼保健，2006，23（21）：3287.

［5］Wanggren K，Lalitkumar PG，Hambiliki F，et aI.Leukaemia inhibitory factor receptor and gpl30 in the human fallopian tube and endometrium before and after mifepristone treatment and in the human preimplantation embryo［J］.Mol Hum Reprod，2007，13（6）：391-397.

［6］Aghajanova L，AItmae S，Bjuresten K，et aI．Disturbances in the LIF pathway In the endometrium among women with unexplained infertility［J］.Fertil Steril，2009，91（6）：2602-2610.

［7］Wegner NT，Mcrshon JL.Evaluation of leukemia inhibitory factor as a marker of ectopic pregnancy［J］.Am J Obstet Gynecol.2001，184（6）：1074-1076.

［8］晏長榮，陳硯芬，郭青平.血清E2、P及LIF在異位妊娠早期診斷中的作用［J］.山西醫科大學學報，2014，45（7）：615-617.

（收稿：2016-06-05修回：2016-07-05）

杭州市紅十字會醫院生殖醫學科（杭州310003）

俞佳，Tel：13588150156；E-mail：cruzj@163.com