深綠木霉1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸脫氨酶基因的克隆及表達(dá)1)

刁桂萍　李松陽　王志英

(東北林業(yè)大學(xué)，哈爾濱，150040)

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深綠木霉1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸脫氨酶基因的克隆及表達(dá)1)

刁桂萍李松陽王志英

(東北林業(yè)大學(xué)，哈爾濱，150040)

摘要以深綠木霉(Trichoderma atroviride)ACCC30153為試材，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)克隆獲得1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸脫氨酶ACCD基因的cDNA全長。結(jié)果表明：此基因的cDNA編碼區(qū)序列全長1 083 bp，編碼區(qū)可編碼360個(gè)氨基酸。經(jīng)BlastP相似性分析，其屬于Try-synth-beta-Ⅱ家族，與里氏木霉(T. reesei)氨基酸序列XP-006967764的同源性最高，達(dá)到91%。在5種不同誘導(dǎo)條件下，ACCD基因的表達(dá)量均有明顯變化。在C、N饑餓培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)8 h與16 h時(shí)，ACCD基因表達(dá)量達(dá)到最大值，為未誘導(dǎo)時(shí)的22.7倍與22.4倍；在山新楊葉粉與莖粉的誘導(dǎo)下，ACCD的表達(dá)量分別在培養(yǎng)的24 h與2 h達(dá)到最大，為未誘導(dǎo)的22.6倍與27.3倍。

關(guān)鍵詞深綠木霉；脫氨酶；誘導(dǎo)表達(dá)

1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸脫氨酶(ACC脫氨酶)廣泛存在于多種微生物中，它能催化乙烯前體分解來降低植物體內(nèi)乙烯的合成，從而減少過量乙烯對(duì)植物自身生長造成的不良影響[1]。大量研究發(fā)現(xiàn)，土壤中微生物產(chǎn)生的ACC脫氨酶能促進(jìn)植物根部的生長發(fā)育[2-4]；而近年來研究也發(fā)現(xiàn)，ACC脫氨酶能減輕非生物因素(如干旱、重金屬、鹽堿等)對(duì)植物的危害[5-7]。此外，部分研究證明，含有ACC脫氨酶的細(xì)菌能減輕植物病害[8-9]，但ACC脫氨酶與病原菌的作用機(jī)制還不清楚。

木霉菌(Trichodermaspp.)是一種極具應(yīng)用價(jià)值的生防菌，不僅能抑制多種病原真菌，還能促進(jìn)植物生長、誘導(dǎo)其免疫能力，更是具有降解土壤中鹽類化合物、農(nóng)藥殘留物及重金屬離子等的功能[10]。然而，對(duì)于木霉菌中ACC脫氨酶生防功能的研究尚不多見。……