棘孢木霉ACCC30536葡聚糖酶基因的克隆及表達1)

孔祥鵬　劉志華　劉雪峰　刁桂萍

(東北林業大學，哈爾濱，150040)

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棘孢木霉ACCC30536葡聚糖酶基因的克隆及表達1)

孔祥鵬劉志華劉雪峰刁桂萍

(東北林業大學，哈爾濱，150040)

摘要以棘孢木霉(Trichoderma asperellum)ACCC30536菌株為試材，采用聚合酶鏈式反應(PCR)技術克隆獲得葡聚糖酶GH71基因的全長cDNA序列。結果表明：此基因的cDNA 編碼區序列全長1 296 bp，編碼區可編碼431個氨基酸。經BlastP相似性分析，其屬于GH99～GH71超家族，與深綠木霉(T. atroviride)氨基酸序列XP_013941146的同源性最高，達到94%。7種不同誘導條件下，GH71基因的表達量變化明顯。在2種病原菌細胞壁的誘導下，GH71基因的表達均呈先上升后下降又上升的趨勢，在培養的12 h時達到最大值，分別為未誘導時的24.3倍和23.9倍。而在這2種病原菌發酵液的誘導下，GH71基因的表達均呈先下降后上升的趨勢。在山新楊莖與葉的誘導下，GH71基因的表達量在24 h最大，分別為未誘導的25.4倍和25.2倍；在山新楊根的誘導下，GH71基因的表達量在48 h達到最大，是未誘導的28.1倍。

關鍵詞棘孢木霉；葡聚糖酶；誘導表達

木霉菌(Trichodermaspp.)因其能抑制多種病原真菌、促進植物生長、誘導其免疫能力，且兼具降解土壤中鹽類化合物、農藥殘留物及重金屬離子等功能，而被廣泛應用于農林業中[1-2]。經研究發現，木霉菌中含有種類豐富的葡聚糖酶，包括α-1,3葡聚糖酶、β-1,3葡聚糖酶和β-1,6葡聚糖酶[3]。這些葡聚糖酶是木霉產生的非常重要的抑菌蛋白之一，它們通過與其它酶類或是抗生素的協同作用起到抑菌的功效。有研究表明，綠色木霉(Trichoderma virens)中的β-1,3葡聚糖酶TvBgn2和β-1,6葡聚糖酶TvBgn3，能提高木霉對多種病原真菌的拮抗能力[4-5]。……