外周血及蛻膜組織中CD4加CD25加調節性T細胞比例與原因不明復發性流產的關系研究

李 彬， 李長忠

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外周血及蛻膜組織中CD4加CD25加調節性T細胞比例與原因不明復發性流產的關系研究

李 彬1， 李長忠2

（1.山東省禹城市人民醫院， 山東 禹城 251200 2.山東省立醫院，山東 濟南 250021）

【摘 要】目的：探討外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例與原因不明復發性流產的關系。方法：隨機選取自2012年6月到2015年6月，我院門診部與住院部的原因不明復發性流產患者62例（觀察組）和正常妊娠婦女62例（對照組）作為研究對象。采用流式細胞四色熒光法測量兩組研究對象外周血及蛻膜組織中的CD4+CD25+調節性T細胞比例。分析比較兩組研究對象外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例情況。結果：觀察組患者外周血中CD4+CD25+調節性T細胞比例低于對照組患者外周血中CD4+CD25+調節性T細胞的比例，且兩組差異具有統計學意義（t=2. 669，P=0.015）；觀察組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例低于對照組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例，兩組差異具有統計學意義（t=4.986，P=0.001）。結論：外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例在早孕期顯著升高，參與了正常妊娠的維持，有可能是調控母胎界面局部免疫耐受形成的一個重要因素；外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例降低可能與URSA的發生有關。

【關鍵詞】外周血； 蛻膜組織； CD4+CD25+調節性T細胞比例； 原因不明復發性流產

為了探討外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例與原因不明復發性流產的關系，選取了我院門診部與住院部的原因不明復發性流產患者62例和正常妊娠婦女62例作為研究對象，具體研究結果如下：

1　資料與方法

1.1 一般資料：隨機選取自2012年6月至2015年6月，我院門診與住院的原因不明復發性流產患者62例（觀察組）和正常妊娠婦女62例（對照組）作為研究對象。對照組患者62例，年齡22～38歲，平均年齡（24.8 ±4.9）歲；孕周3～18周，平均（8.5±2.9）周；觀察組患者62例，年齡20～38歲，平均年齡（24.9±4.7）歲；孕周3～19周，平均（8.3±2.8）周。對兩組患者的平均年齡、孕周進行統計學對比分析，兩組差異不具有統計學意義（P＞0.05），兩組患者具有可比性。具體情況見1。

表1　兩組患者一般資料對比（ˉx±s，n）

1.2 納入和排除標準：納入標準：①所有觀察組患者的診斷均符合中華醫學會婦產科分會制定的關于原因不明復發性流產的診斷標準［1］；②所有對照組患者均為同期在我院門診行終止妊娠的正常早孕產婦；③兩組患者均了解該研究內容，并自愿配合該研究內容中的所有檢查。排除標準：①兩組患者均排除有染色體、內分泌或者解剖結構異常；②排除合并有感染、自身免疫性疾病史者。

1.3 方法：①分別采集兩組患者的外周血和蛻膜組織，并在無菌條件下制備蛻膜及外周血的單核細胞懸液。②將其放入離心機中，離心1500rpm×5min。③分別去除上清液，加入熒光標記抗體（小鼠抗人CD4-PE -y5.5，小鼠抗人CD15-FITC）5uL混勻，裂解細胞后再加入FoxP3-PE。④置于室溫下，避光，孵化30min。⑤分別在樣品中加入PBS液1mL，然后放置于離心機中，離心1500rpm×5min。⑥離心后去除上清液，加入200ulPBS，采用流式細胞檢查儀進行檢查。

1.4 觀察指標：分別觀察比較兩組患者的外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例。

1.5 統計學分析：采用SPSS18.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以平均數±標準差表示，組間比較采用兩獨立樣本的t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2　結 果

2.1 兩組患者外周血中CD4+CD25+調節性T細胞比例：比較兩組患者外周血中CD4+CD25+調節性T細胞比例，觀察組患者外周血中CD4+CD25+調節性T細胞比例明顯低于對照組患者外周血中CD4+CD25+調節性T細胞比例，兩組差異具有統計學意義（P＜0.05）。說明原因不明復發性流產患者外周血中CD4+CD25+調節性T細胞比例低于正常妊娠婦女。見表2。

表2　兩組患者外周血中CD4+CD25+調節性T細胞比例比較（%，xˉ±s）

2.2 兩組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例：比較兩組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例，觀察組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例明顯低于對照組患者蛻膜組織中 CD4+ CD25+調節性T細胞比例，兩組差異具有統計學意義（P＜0.05）。說明原因不明復發性流產患者蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例低于正常妊娠婦女。見表3。

表3　兩組患者蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例比較（%，xˉ±s）

3　討 論

妊娠的過程類似于同種異體移植的過程，因為胎兒所攜帶父親的一半的HLA抗原可以刺激孕婦產生免疫應答，同時為了保證妊娠繼續，該刺激作用使孕婦的免疫抑制細胞數量也相應增加，使胎兒能在母體的免疫應答和免疫抑制動態平衡中存活至分娩［2］。生殖免疫專家認為，一旦這種免疫耐受與免疫應答機制的動態平衡被打破，正常妊娠將無法繼續，最終會導致流產的發生［3］。近些年來越來越多的免疫學專家認為，不明原因復發性流產與免疫學密切相關。

CD4+CD25+調節性T細胞是一類具有重要免疫功能的T細胞亞群，具有免疫抑制功能，在母胎免疫耐受中發揮著重要的作用［4］。目前CD4+CD25+調節性T細胞的作用機制尚未清楚，多數專家認為其主要通過兩種機制發揮免疫調節作用：①CD4+CD25+調節性T細胞可以分泌多種免疫抑制因子（IL-10、TGF-β等），間接的發揮免疫抑制作用，保護胚胎的生長；②CD4+CD25+調節性T細胞通過直接或間接接觸，參與人體自身免疫耐受的調節，同時其種植類似同種異體移植以及腫瘤免疫調節，維持人體內環境的穩定。國外有研究報道［5］，通過增加調節性T細胞的功能和數量可以治療自身免疫性疾病、變態反應性疾病等。

該研究通過檢測兩組患者外周血以及蛻膜組織的CD4+CD25+調節性T細胞比例可知：觀察組患者外周血CD4+CD25+調節性T細胞比例明顯低于對照組患者外周血中CD4+CD25+調節性T細胞比例，兩組差異具有統計學意義（P＜0.05），說明原因不明復發性流產患者外周血中的D4+CD25+調節性T細胞比例低于正常妊娠孕婦，與國內外專家學者的報道一致；另外觀察組患者蛻膜組織CD4+CD25+調節性T細胞比例低于對照組患者蛻膜組織CD4+CD25+調節性T細胞的比例，兩組差異具有統計學意義（P＜0.05），說明正常妊娠孕婦的蛻膜組織中的D4+CD25+調節性T細胞比例高于原因不明復發性流產患者，這與國外專家學者的報道一致。而且正常妊娠者蛻膜組織中的CD4+CD25+調節性T細胞比例高于外周血，說明CD4+CD25+調節性T細胞在蛻膜組織中有更高的表達。

綜上所述，外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例在早孕期升高，參與了正常妊娠的維持，有可能是調控母胎界面局部免疫耐受形成的一個重要因素；外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調節性T細胞比例降低可能與原因不明習慣性流產的發生有關。

【參考文獻】

［1］ 李成，張強.復發性流產患者外周血調節性T細胞檢測及臨床意義［J］.安徽醫學，2009，30（11）：1340～1342.

［2］ 劉長明.CD4+T輔助細胞中Treg及Th17在原因不明性復發性流產發病中作用的探討［D］.安徽醫科大學，2012.

［3］ 馮曉玲，鮑薇薇，張素冰，等.CD4+CD25+調節T細胞與原因不明復發性流產研究進展［J］.中國醫療前沿（上半月），2011，6（5）：27～28.

［4］ 王文娟.CD4+T細胞在原因不明復發性流產中的研究進展［J］.國際婦產科學雜志，2013，40（6）：525～529.

［5］ 章衛國，張蔚卿，陳葆國，等.原因不明復發性流產病理妊娠患者外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3mRNA的表達［J］.全科醫學臨床與教育，2011，9（4）：368～371.

【文章編號】1006-6233（2016）07-1065-03

【文獻標識碼】A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.07.04

【基金項目】山東省自然科學基金資助項目，（編號：ZR2013HM165）

Peripheral Blood and Decidua Tissue Proportion of CD4+CD25+Regulatory T Cells in Relations with Unexplained Recurrent Abortion

LI Bin， et al
（The People＇s Hospital of Yucheng City，Shandong Yucheng251200，China）

【Abstract】Objective：To explore the relationship between the proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in the peripheral blood and decidua tissue and unexplained recurrent abortion.Methods：Randomly selected from June 2012 to June 2015 in our hospital outpatient and hospitalization of patients with unexplained recurrent abortion，62 cases（observation group）and 62 cases of normal pregnant women（control group）as the research objects.Using flow cytometry four-color fluorescence method to measure the CD4+CD25+regulatory T cells proportion of peripheral blood and decidua tissue.Comparative analysis of two groups of peripheral blood and decidua tissue proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in case.Results：The CD4+CD25+regulatory T cells proportion of peripheral blood and decidua tissue of observation group patients were significantly lower than control group in patients.The difference between the two groups was statistically significant（T=2. 669，p=0.015，p＜0.05）；The proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in decidual tissue of observation group patients was significantly lower than that in the control group patients.There was obvious difference between the two groups，with a statistical significance（T=4.986，p=0.001，p＜0.05）.Conclusion：The proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in peripheral blood and decidua tissue has a significant rise in early pregnancy.It should involve in maintaining normal pregnancy.It is possible that local immune tolerance control of maternal-fetal interface formed an important factor；The lower of the proportion of CD4+CD25+regulatory T cells in peripheral blood and decidua tissue may be associated with the occurrence of URSA.

【Key words】Peripheral blood； Decidual tissue； CD4+CD25+regulatory T cells； Unexplained recurrent miscarriage