HPV L1殼蛋白表達與宮頸上皮瘤變及HPV分型的關系*

梁麗霞，肖　燕，高　瑋

(廣東省深圳市南山區計劃生育服務中心檢驗科　518052)

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HPV L1殼蛋白表達與宮頸上皮瘤變及HPV分型的關系*

梁麗霞，肖燕，高瑋

(廣東省深圳市南山區計劃生育服務中心檢驗科518052)

摘要:目的分析HPV L1殼蛋白的表達與宮頸上皮病變的關系及其在HPV分型中的分布情況。方法對4 320例婦女進行宮頸液基細胞學(LCT)和HPV分型檢測，對LCT≥無明確診斷意義的非典型鱗狀上皮細胞(ASC-US)或HPV陽性者行HPV L1檢測，并對LCT≥ASC-US且HPV陽性者行陰道鏡下組織病理學檢查。結果對LCT≥ASC-US或HPV陽性者(共401例)進行HPV L1檢測，HPV L1陽性率為34.9%(140/401)。對LCT≥ASC-US且HPV陽性者129例進行組織病理學檢查，LCT與組織病理學診斷符合率為79.2%。HPV L1在LCT診斷為ASC-US、低度鱗狀上皮內病變(LSIL)、高度鱗狀上皮內病變(HSIL)的患者中陽性率分別為40.2%(29/72)、69.2%(18/26)、9.0%(2/22)。386例HPV感染者中，單一型別感染率居前四位的是HPV52、58、16、18型，其HPV L1陽性率分別為53.3%、28.9%、12.2%、5.6%。結論HPV L1陽性率隨宮頸病變級別增高呈下降趨勢，LCT聯合HPV L1檢測可為宮頸病變預后判定提供參考依據。

關鍵詞:人乳頭瘤病毒；HPV L1殼蛋白；宮頸上皮內病變；基因分型

流行病學和分子生物學研究已證明人乳頭瘤病毒(HPV)感染是發生宮頸癌的直接原因和必要因素，但感染HPV的女性并不全都發展為宮頸癌或相關病變[1]。臨床研究顯示HPV感染具有自限性，約90%的感染者能清除HPV而自愈，僅有不到10%的HPV感染者發展為明確病變[2]。HPV是一類對皮膚及黏膜上皮細胞具有特殊嗜性的雙鏈環狀DNA病毒，能合成一系列蛋白質，包括自身結構蛋白和致瘤蛋白。HPV L1蛋白是HPV的主要衣殼蛋白，由HPV DNA的晚期基因轉錄區L1編碼合成，為晚期蛋白，與病毒的增殖有關，近年來國外一些研究發現HPV Ll蛋白具有增強機體細胞免疫應答的功能，是一個判定預后的標記物[3-4]。本項目旨在研究HPV L1殼蛋白的表達與HPV分型及宮頸上皮病變的關系，探討HPV L1殼蛋白表達在宮頸癌篩查中的作用，為宮頸病變預后判斷提供參考和借鑒。

1資料與方法

1.1一般資料從2015年1～6月來深圳市南山區計劃生育服務中心進行宮頸癌篩查的4 320例婦女(有性生活史、年齡在19～65歲)進行宮頸液基細胞學(LCT)和HPV分型檢測，對LCT≥無明確診斷意義的非典型鱗狀上皮細胞(ASC-US)或HPV陽性者行HPV L1檢測，并對LCT≥ASC-US且HPV陽性者行陰道鏡下組織病理學檢查。

1.2標本采集要求篩查人員避開月經期，最好在經期過后3～5 d，檢查前3 d避免性生活、陰道上藥和陰道沖洗，檢查時先排尿。使用一次性宮頸脫落細胞采集器，將其放入宮頸口處，單方向旋轉4～5周以獲得足量的上皮細胞標本，取出后放入液基細胞保存液中。

1.3方法

1.3.1HPV分型檢測通過攝取、擴增、雜交(采用PCR-反向點雜交技術)、洗膜、顯色和讀片等步驟檢測23種基因(高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82，低危型HPV6、11、42、43、81、83)，檢測試劑盒由亞能生物技術公司提供。

1.3.2LCT檢測采用深圳長海益生物科技有限公司生產的細胞保存液，采用美國進口的AutouCyte PRE液基細胞系統進行制片，采用TBS報告系統進行判斷。

1.3.3HPV L1檢測試劑來源于美國愛迪旺思醫療賽泰-細胞/組織人乳頭瘤染色試劑盒，HPV L1診斷以免疫組織/細胞化學技術和非同位素標記核酸分子雜交技術為基礎，同時采用核酸水平和免疫水平雙重檢測人乳頭瘤病毒殼蛋白(HPV L1)，僅有1個被染色的細胞核呈紅色即可作出陽性診斷(見圖1)。

圖1　　　　　免疫細胞化學方法檢測HPVL1殼蛋白陽性細胞(10×10)

1.4統計學處理采用SPSS13.0軟件包進行統計學處理，率的比較采用χ2檢驗，雙側檢驗水平α=0.05，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1HPV L1殼蛋白在宮頸上皮內病變及組織病理學檢查中的表達情況4 320例篩查人群中，對LCT≥ASC-US或HPV陽性者共401例進行HPV L1檢查，其中LCT≥ASC-US且HPV陽性者129例，單一HPV陽性者257例，單一LCT≥ASC-US者15例。LCT≥ASC-US且HPV陽性者129例中，ASC-US 72例、不典型鱗狀細胞不除外高度病變(ASCUS-H) 9例、低度鱗狀上皮內病變(LSIL)26例、高度鱗狀上皮內病變(HSIL)22例，其組織病理學診斷為炎癥者45例，宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)1～3級者分別有46、24、14例，不同組織病理學診斷結果患者中，HPV L1陽性率分別為37.8%(17/45)、63.0%(29/45)、12.5%(3/24)、7.1%(1/14)。根據組織病理學檢查結果上、下相差一級為符合的原則，宮頸細胞學與組織病理檢查結果總符合率為79.2%(38/48)，低度病變與高度病變的符合率分別為73.1%與86.3%。在LCT診斷為ASC-US、LSIL、HSIL的患者中，HPV L1表達率分別為40.2%(29/72)、69.2%(18/26)、9.0%(2/22)，三者間差異有統計學意義(P<0.05)，見表1；組織病理學結果為炎癥、CIN1級、CIN2級、CIN3級的患者中，HPV L1表達率分別為37.8%、63.0%、12.5%、7.1%，四者間差異也有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表1　　129例不同LCT病變級別患者HPV L1表達情況[n(%)]

表2　　129例不同LCT病變級別患者的組織病理學檢查及HPV L1表達情況(n)

2.2HPV L1蛋白在HPV不同亞型之間的表達情況4 320例篩查人群中，HPV陽性386例，感染率為8.94%，單一型別感染311例，占80.6%(311/386)，合并感染75例，占19.4%(75/386)。單一型別感染中，感染率居前四位的亞型是HPV52、58、16、18型，共269例，占69.7%。HPV L1殼蛋白在上述4種亞型中的表達情況見表3。HPV52、58、16、18型感染者中，HPV L1陽性者共有90例，陽性率為33.4%(90/269)；HPV16、18型的HPV L1陽性率明顯低于HPV52、58型(P<0.05)，提示HPV16、18型感染者宮頸惡性病變的傾向性更強。

表3　　HPV52、58、16、18型感染者中HPV L1的分布[n(%)]

3討論

高危型HPV感染是宮頸癌的主要致病因素。宮頸HPV感染是普遍存在的，但大多數可以自愈，有文獻報道，約60%的HPV感染可以在1年內被自身免疫系統清除，90%可以在3年內被清除[5]。HPV L1殼蛋白為HPV的主要殼蛋白，是生產HPV疫苗的主要抗原，HPV L1殼蛋白表達與HPV的早期復制和感染密切相關，但在病毒整合到宿主DNA上以后逐漸消失，而HPV整合到宿主DNA上是引發宮頸惡性病變的重要環節[6]。

129例LCT≥ASC-US且HPV陽性患者的HPVL1陽性在ASC-US、ASCUS-H、LSIL、HSIL分別為40.3%、11.1%、69.2%、9.1%；其對應的組織病理學中的陽性率在炎癥、CIN1級、CIN2級、CIN3級分別為37.8%、63.0%、12.5%、7.1%，同樣顯示HPVL1的陽性率隨著病變級別的升高呈下降趨勢。這與國內張佳立等[7]研究結果相符合。表明體內有HPVL1的存在，病變有被自身免疫清除的可能，對于存在ASC-US、LSIL等宮頸病變而HPVL1呈陽性的患者，是否可以暫不做創傷性的檢查與過度治療，而作為跟蹤

隨訪的對象，為探討宮頸癌篩查的手段提供更合理的建議。

在386例HPV陽性人群中，單一型別HPV感染居前四位的是HPV52、58、16、18型，共269例，占69.7%(269/386)，4種亞型單一感染例數分別為134、60、51、24例，HPV52、58亞型的感染例數明顯高于HPV16、18型，這與國內其地方報道HPV16型感染最多不符，這可能與HPV區域性感染不一有關；其對應HPV L1陽性表達率分別為53.3%、28.9%、12.2%、5.6%。HPV52、58型感染者中HPV L1陽性率明顯高于HPV16、18型。HPV16、18型導致宮頸惡性病變的傾向高于HPV52、58型，這與國內報道相符[8]。

綜上所述，HPV L1檢測聯合LCT和HPV分型不僅能了解機體HPV的感染狀態，還能了解機體的免疫狀態。HPV L1的陽性率都隨病變級別的增加而呈下降趨勢，提示HPV L1的表達有重要的預測價值；而且檢測宮頸病變脫落細胞中HPV L1蛋白不需重新取材，可直接在LCT涂片上染色，操作簡單，敏感性高，穩定性好，有望成為預測宮頸病變程度及惡性進展趨勢的生物學標志物。

參考文獻

[1]郎景和．婦科手術筆記[M]．北京：中國科學技術出版社，2001．

[2]Nobbenhuis MA,Walboomers JM,Helmerhorst TJ,et al.Relation of human papillomavirus status to cervical lesions and consequences for cervical-cancer screening:a prospective study[J].Lancet,1999,354(9172):20-25.

[3]Mehlhorn G,Obermann E,Negri G,et al.HPV L1 detection discriminates cervical precancer from transient HPV infection:a prospective international multicenter study[J].Mod Pathol,2013,26(7):967-974.

[4]Xiao W,Bian ML,Ma L,et al.Immunochemical analysis of human papillomavirus L1 capsid protein in Liquid-Based cytology samples from cervical lesions[J].Acta Cytol,2010,54(5):661-667.

[5]Forcier M,Musacchio N.An overview of human papillomavirus infection for the dermatologist:disease,diagnosis,management,and prevention[J].Dermatol Ther,2010,23(5):458-476.

[6]Melsheimer P,Kaul S,Dobeck S,et al.Immunocytochemical detection of HPV high-risk type L1 capsid proteins in LSIL and HSIL as compared with detection of HPV L1 DNA[J].Acta Cytol,2003,47(2):124-128.

[7]張佳立，郜紅藝，張江宇，等．宮頸液基細胞HPV L1殼蛋白表達的臨床意義[J]．診斷病理學雜志，2010，17(6)：456-459．

[8]彭雅亞,許淑媛,金霞,等.宮頸上皮內瘤變和宮頸癌與HPV16、18關系的研究[J].標記免疫分析與臨床,2010,17(1):48-49.

* 基金項目：廣東省深圳市南山區衛計委科研項目(南科研衛2014014號)。

作者簡介：梁麗霞，女，主管檢驗技師，主要從事臨床檢驗研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.017

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)14-1944-03

(收稿日期：2016-01-20修回日期：2016-04-11)

Relationship of HPV L1 capsid protein expression with cervical squamous imtraepithelial lesiong and HPV typing*

LIANGLixia，XIAOYan，GAOWei

(DepartmentofClinicalLaboratory,FamilyPlanningServiceCenterofNanshanDistrict,Shenzhen,Guangdong518052,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the relation between HPV L1 capsid protein expression with cervical squamous intraepithelial lesions and its distribution situation in HPV typing.Methods A total of 4 320 women were performed the liquid based cytology test(LCT) and HPV typing.The cases of LCT ≥ no diagnostic sense of atypical squamous epithelial cells(ASC-US) or HPV positive were performed the HPV L1 detection.Then the cases of LCT ≥ASC-US and HPV positive were performed the colposcopic histopathological examination.ResultsA total of 401 cases of LCT≥ASC-US or HPV positive were performed the HPV L1 detection,the HPV L1 positive rate was 34.9%(140/401).One hundred and twenty-nine cases of LCT ≥ASC-US and HPV positive were performed the histopathological examination,the coincidence rate of LCT and histopathological examination was 79.2%.The positive rates of HPV L1 in ASC-US,LSIL and HSIL by LCT were 40.2%(29/72),69.2%(18/26) and 9.0%(2/22)respectively.Among 386 cases of HPV infection,the top 4 of single genotype infection were HPV 52,58,16 and 18,their HPV L1 positive rates were 53.3%,28.9%,12.2% and 5.6% respectively.ConclusionThe HPV L1 positive rate shows the decreasing trend with the cervical lesion grade increase.LCT combined with HPV L1 detection can provide reference basis for judging the prognosis of cervical lesion.

Key words:HPV；HPV L1 capsid protein;cervical squamous intraepithelial lesions;genotype