腫瘤患者下呼吸道感染流感嗜血桿菌的臨床分布及耐藥性分析

嚴　瑾，李煒煊

(廣東省佛山市第一人民醫院檢驗科　528000)

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腫瘤患者下呼吸道感染流感嗜血桿菌的臨床分布及耐藥性分析

嚴瑾，李煒煊

(廣東省佛山市第一人民醫院檢驗科528000)

摘要:目的分析腫瘤患者下呼吸道感染流感嗜血桿菌的臨床分布及耐藥性，為臨床合理使用抗菌藥物提供參考依據。方法采用含0.5 mg/mL萬古霉素的巧克力培養基分離培養流感嗜血桿菌，應用梅里埃Vitek2-Compact全自動細菌鑒定分析儀鑒定菌種，采用頭孢硝噻吩紙片法檢測菌株產β-內酰胺酶情況，藥敏試驗采用紙片擴散(K-B)法。結果從2014年1月至2015年12月本院住院腫瘤患者下呼吸道的合格痰標本中分離出72株流感嗜血桿菌，β-內酰胺酶陽性率為34.7%(25/72)；藥敏試驗的耐藥分別為：氨芐西林43.1%(31/72)、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶47.2%(34/72)、頭孢克洛19.4%(14/72)、四環素19.4%(14/72)、氨曲南16.7%(12/72)和氯霉素16.7%(12/72)，而對頭孢呋辛、頭孢吡肟、環丙沙星、阿奇霉素、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦和美羅培南敏感率均高于90%。 結論流感嗜血桿菌對臨床常用抗菌藥物的耐藥率相差很大，β-內酰胺酶陽性株對氨芐西林和磺胺甲噁唑/甲氧芐啶的耐藥率較高(>80%)，不宜用于流感嗜血桿菌的經驗用藥。

關鍵詞:腫瘤；流感嗜血桿菌；β-內酰胺酶；耐藥性

流感嗜血桿菌是口腔、鼻咽部的正常菌群，屬于條件致病菌，引起感染的機會與機體的免疫力密切相關，是呼吸道感染的重要病原菌之一。惡性腫瘤患者由于免疫力低下，加上手術、化療、放療、激素、廣譜抗菌藥物等各種治療，較易發生下呼吸道感染[1]，成為腫瘤患者常見的并發癥。本研究使用含0.5 mg/mL萬古霉素的巧克力培養基進行流感嗜血桿菌的培養，分離出72例不同腫瘤患者下呼吸道的流感嗜血桿菌，采用紙片擴散(K-B)法檢測菌株的耐藥特征，為臨床治療提供參考依據，現研究報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1菌株來源自2014年1月至2015年12月本院確診為腫瘤患者的下呼吸道合格痰標本(以痰中白細胞超過25個/低倍視野,上皮細胞少于10個/低倍視野為合格標本)，對同一患者同一來源標本的重復培養結果以第1次結果進行統計。共2 766份標本中分離出72株流感嗜血桿菌。

1.1.2儀器與試劑法國生物梅里埃Vitek2-Compact 全自動細菌鑒定分析儀及奈瑟菌-嗜血桿菌NH鑒定卡，購自生物梅里埃中國有限公司，專用含0.5 mg/mL萬古霉素的嗜血桿菌巧克力培養基。頭孢硝噻吩紙片、抗菌藥敏紙片均為英國Oxiod公司產品。

1.1.3質控菌株流感嗜血桿菌ATCC49247、大腸埃希菌ATCC2922、金黃色葡萄球菌ATCC25923，購于國家衛生和計劃生育委員會臨床檢驗中心。

1.2方法

1.2.1菌株分離與鑒定按照《全國臨床檢驗操作規程(第3版)》進行標本接種、細菌培養。采用含0.5 mg/mL萬古霉素的嗜血桿菌巧克力培養基進行流感嗜血桿菌的培養，做Ⅴ、Ⅹ因子和Ⅴ+Ⅹ因子試驗，結果完全符合再通過法國生物梅里埃Vitek2-Compact全自動細菌鑒定分析儀進行菌種鑒定，鑒定符合率均在93%以上。

1.2.2藥敏試驗采用K-B紙片擴散法測定菌株對氨芐西林、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶、頭孢克洛、頭孢呋辛、四環素、頭孢吡肟、環丙沙星、氨曲南、氯霉素、哌拉西林/他唑巴坦、美羅培南、左氧氟沙星和阿奇霉素的敏感性，結果判斷按美國臨床實驗室標準學會(CLSI)2013年版標準判讀。采用頭孢硝噻吩紙片法檢測β-內酰胺酶。

1.3統計學處理使用WHO耐藥性監測組提供的細菌耐藥性軟件WHONET 5.6進行數據統計，采用SPSS11.5軟件進行分析。計數資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1流感嗜血桿菌臨床分布檢出的72株流感嗜血桿菌，主要來自肺癌患者(分離出28株，占38.9%)，其次是鼻咽癌患者(分離出18株，占25.0%)，其余癌癥類型依次為：食管癌(5株，6.9%)、乳腺癌(3株，4.2%)、淋巴瘤(3株，4.2%)、胸腺瘤(2株，2.8%)、胃癌(2株，2.8%)、直腸癌(2株，2.8%)和多發性骨髓瘤(2株，2.8%)，還有其他不同類型癌癥共8株，占11.1%。

表1　　72株流感嗜血桿菌中β-內酰胺酶陰性株與陽性株耐藥率比較

2.2β-內酰胺酶檢測采用頭孢硝噻吩紙片法檢測β-內酰胺酶，72株流感嗜血桿菌中產β-內酰胺酶25株，產酶率為34.7%。25株產β-內酰胺酶株對氨芐西林的藥敏耐藥率為100.0%。

2.3藥物敏感試驗采用K-B紙片擴散法測定菌株的敏感性，藥敏結果依據CLSI 2013年版標準判讀。藥敏結果顯示，72株流感嗜血桿菌中25株β-內酰胺酶陽性株對氨芐西林、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶、氯霉素、四環素、氨曲南的耐藥率明顯高于44株陰性株，差異有統計學意義(P<0.05)。對二代頭孢菌素耐藥率呈上升趨勢，多數抗菌藥物對該菌保持良好的抗菌活性，見表1。

3討論

嗜血桿菌主要定植于上呼吸道黏膜，在呼吸道感染疾病中占極為重要的地位，嗜血桿菌由于繁殖誘導炎癥介質釋放和表達，導致炎癥細胞浸潤引起肺炎、下呼吸道感染等嚴重疾病，其中致病性最強是流感嗜血桿菌[2]。腫瘤患者在治療期間有放、化療史的，接受侵襲性操作等致使免疫功能下降，因而容易發生感染性疾病，而下呼吸道感染是常見的感染性疾病，占感染性疾病的30%～40%[3]。往往感染后病情加重，容易誘發呼吸衰竭，甚至導致多臟器功能衰竭。因此，臨床對腫瘤患者呼吸道感染流感嗜血桿菌應引起高度重視。本研究統計了2014年1月至2015年12月本院腫瘤患者入院當天送檢合格痰標本中檢出的流感嗜血桿菌共72株，排除了院內感染的可能。流感嗜血桿菌對生長環境和營養要求較高，檢出率通常較低。由于流感嗜血桿菌在普通培養基上不生長，要有Ⅹ、Ⅴ因子，且在5%～10% CO2條件下才能生長[4]。本研究采用專用含0.5 mg/mL萬古霉素的嗜血桿菌巧克力培養基，加0.5 mg/mL萬古霉素可抑制革蘭陽性菌株和其他細菌的生長，可提高標本中的流感嗜血桿菌的檢出率。在分離的72株流感嗜血桿菌中，來自肺癌患者最多，占38.9%，與文獻[5]報道一致，但存在不同的是，鼻咽癌患者(占25.0%)位居第二，這可能與疾病地域性相關。本院下呼吸道感染的腫瘤患者以中老年人多發，放療、化療可能導致他們的白細胞數量減少,機體抗感染能力下降；腫瘤組織自身、抗腫瘤藥物影響、各種穿刺術和插管等侵入性操作與治療等造成皮膚和黏膜的正常屏障完整性被破壞。

本院腫瘤患者呼吸道感染標本中分離出的72株流感嗜血桿菌，有25株β-內酰胺酶陽性，陽性率為34.7%，與江秀愛等[6]結果接近。這25株β-內酰胺酶陽性株的氨芐西林是100.0%耐藥。究其主要機制，是由于β-內酰胺酶可以改變氨芐西林分子結構上的β-內酰胺環，導致氨芐西林失去活性而耐藥。臨床仍常以其作為治療流感嗜血桿菌感染的首選藥物，是因為氨芐西林對腫瘤患者的不良反應少。因此，使用氨芐西林治療流感嗜血桿菌時應當注意β-內酰胺酶檢測結果。但對陰性株，氨芐西林耐藥率僅為12.7%，仍保持較好的抗菌活性。另外，本組藥敏試驗結果顯示，25株β-內酰胺酶陽性株對磺胺甲噁唑/甲氧芐啶、四環素、氨曲南、頭孢克洛、氯霉素的耐藥率依次為80.0%、36.0%、36.0%、32.0%、32.0%，顯著高于47株β-內酰胺酶陰性株，差異有統計學意義(P<0.05)，對頭孢呋辛、頭孢吡肟、環丙沙星、阿奇霉素、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦和美羅培南的耐藥率差異無統計學意義(P>0.05)。25株β-內酰胺酶陽性株與47株陰性株對氨芐西林、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶和氯霉素的耐藥率相差較大，這與其他類似試驗結果基本相符。耐氨芐西林的流感嗜血桿菌往往同時伴有對氯霉素、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶的多重耐藥，是由于對氯霉素耐藥大多由于有氯霉素乙酰轉移酶的產生，而流感嗜血桿菌可同時產生乙酰轉移酶和β-內酰胺酶，導致其對氯霉素和氨芐西林雙重耐藥[7]；對磺胺甲噁唑/甲氧芐啶的耐藥可能由于細菌過度產生雙氫葉酸還原酶導致對磺胺類藥物磺胺甲噁唑/甲氧芐啶耐藥[8]。因此，治療流感嗜血桿菌感染不宜選用磺胺甲噁唑/甲氧芐啶。由于四環素、左氧氟沙星、氯霉素不良反應較大，臨床用藥時應慎重使用。首選藥物治療流感嗜血桿菌感染推薦選用第三代頭孢菌素、阿奇霉素和β-內酰胺酶/抑制劑類抗菌藥物[9]。本次調查還同時進行了頭孢呋辛、頭孢吡肟、環丙沙星、阿奇霉素、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦和美羅培南的藥敏試驗，經統計其敏感率均高于90%，具有較高的抗菌活性，是適合治療腫瘤患者呼吸道感染嗜血桿菌的敏感抗菌藥物。

臨床通常采用經驗用藥治療流感嗜血桿菌感染，容易存在不合理使用抗菌藥物，從而導致其耐藥率升高。本調查分析表明，流感嗜血桿菌對臨床常用抗菌藥物的耐藥率相差很大，β-內酰胺酶陽性株對氨芐西林和磺胺甲噁唑/甲氧芐啶的耐藥率較高(>80%)，不宜用于流感嗜血桿菌的經驗用藥；雖對二代頭孢菌素耐藥率呈上升趨勢，但多數抗菌藥物對該菌保持良好的抗菌活性。因此，加強呼吸道嗜血桿菌的分離鑒定和耐藥譜監測，合理使用抗菌藥物,繼續開展不間斷的完整的耐藥監測，對于控制耐藥菌株快速增加至關重要[10]。腫瘤患者下呼吸道感染是最常見的感染性疾病，嚴重影響患者基礎疾病的治療和預后。因此，及時采集和送檢驗合格痰標本，提高檢出流感嗜血桿菌檢出率，有助于臨床醫生對疾病作出正確診斷；同時及時了解藥物的敏感性情況，加強耐藥性監測，可根據藥敏結果的流行特點有效指導臨床應規范使用抗菌藥物。臨床合理使用抗菌藥物，對預防惡性腫瘤患者下呼吸道感染的發生及判斷預后具有重要意義。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.055

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)14-2025-03

(收稿日期：2016-01-11修回日期：2016-03-18)