水稻苗期稻瘟病抗性鑒定

楊永紅康敏龔建華張學(xué)文洪亞輝

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院湖南長(zhǎng)沙4100002.株洲市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所湖南株洲412000）

水稻苗期稻瘟病抗性鑒定

楊永紅1，2康敏1，2龔建華2張學(xué)文1洪亞輝1

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院湖南長(zhǎng)沙4100002.株洲市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所湖南株洲412000）

水稻稻瘟病（rice blast）是水稻生產(chǎn)上的主要病害之一。它是一種真菌（Magnaporthe oryzae）病害，分布范圍及廣，流行速度極快，對(duì)水稻的危害極大。根據(jù)稻瘟病發(fā)生的時(shí)期和部位，可分為苗瘟、葉瘟、節(jié)瘟、頸瘟和粒瘟。以葉瘟發(fā)生最早，在秧苗時(shí)期就可以發(fā)生，并可以進(jìn)行鑒定。

雖然有些品種具有高度抗稻瘟病的特性，但是由于病源菌的生理小種變異頻繁，抗病品種的抗性容易喪失，很快會(huì)變?yōu)楦胁⌒汀＿@些并非是品種抗病性的改變，而是由于病源菌生理小種的頻繁變化所致。必須不斷了解病原菌的變化，并不斷選育出新的抗病品種用于生產(chǎn)，才能有效地控制病害。本文就稻瘟病的鑒定方法進(jìn)行了闡述。

水稻；苗期；稻瘟病；抗性

引言

稻瘟病發(fā)生和流行的環(huán)境條件，溫度以25～28℃最為適宜，空氣相對(duì)濕度為96%以上最為適宜。這時(shí)菌絲發(fā)育和分生孢子形成均有利。分生孢子的萌發(fā)還要求有水滴存在。光照對(duì)孢子的形成、萌發(fā)、浸入都有抑制作用。分生孢子萌發(fā)后，浸入組織，經(jīng)4d的潛育期就可出現(xiàn)病班，稻株易感病的生育時(shí)期是四葉期、分蘗期和穗期。偏施氮肥和排灌不良易導(dǎo)至稻瘟病的發(fā)生和流行。

1 稻瘟病的鑒定

稻瘟病的鑒定方法分為人工接種鑒定和自然鑒定兩種。前者常用于苗瘟和葉瘟的鑒定，后者可用于苗瘟、葉瘟、枝梗瘟和頸病等的鑒定。

所需用品：

（1）材料

①抗感稻瘟病特性不同的水稻品種材料數(shù)個(gè)。

②供試稻瘟病菌種。從當(dāng)?shù)厥占植紡V、致病力強(qiáng)的主要稻瘟菌代表性生理小種，將不同小種分別進(jìn)行培養(yǎng)繁殖，接種時(shí)混合使用。

（2）儀器和用品

高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)，酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱，三角瓶、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、搪瓷盤、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、紗布、普通噴霧器或醫(yī)用噴頭噴霧器、注射器、橡膠管、保溫保濕遮陽(yáng)用品等。

（3）藥品

可溶性淀粉、酵母、瓊脂、大麥或高梁種子、無(wú)菌水等。

2 操作方法

2.1 人工接種鑒定法

2.1.1 制備菌種——采用酵母淀粉瓊脂培養(yǎng)基

將瓊脂10～15g放入1000mL水中加熱溶化，再加入可容性淀粉（或蔗糖）10g，酵母2g，分裝入試管中，進(jìn)行高壓滅菌。取出后制成斜面，接入所采集的稻瘟菌菌種，放在26～28℃恒溫箱中培養(yǎng)3～4d后，搖動(dòng)三角瓶中的大麥粒，使菌絲均勻生長(zhǎng)。待菌絲體長(zhǎng)滿大麥粒并變黑時(shí)，用自來(lái)水沖洗大麥粒上的菌絲，再將大麥粒薄攤于搪瓷盤中，用1～2層紗布覆蓋以保濕，置于25～28℃下培養(yǎng)48h，即可產(chǎn)生出大量孢子，可供接種之用。應(yīng)注意在擴(kuò)大繁殖時(shí)搪瓷盤內(nèi)的濕度不宜保持過高，否則只長(zhǎng)大量菌絲，而產(chǎn)孢子很少。

2.1.2 育秧

將各供試水稻材料的種子進(jìn)行粒選，各取30～40粒種子，經(jīng)消毒、沖洗、催芽后，在盛有肥沃泥土的搪瓷盤中育秧。每個(gè)盤中最好同時(shí)安排有感病和抗病品種作對(duì)照。在幼苗2葉期定株，每個(gè)材料選留10株生長(zhǎng)一致的秧苗。定株后酌施2～3次氮肥，最后一次施氮肥應(yīng)在接種前3～4d施用，使幼苗生長(zhǎng)嫩綠。一般在3～4葉期接種。如采用注射接種鑒定法，可在秧田中育秧，移植于大田后進(jìn)行接種鑒定。

要注意以下幾點(diǎn)：

適時(shí)播種：既要考慮到在自然條件下的濕度和溫度，最利于病菌的浸入，發(fā)病與流行，又要使供試材料正是最易感病的生育時(shí)期，一般在3～4葉期，日平均氣溫25～28℃和陰雨高濕，葉面長(zhǎng)時(shí)間（12h以上）常有水珠的時(shí)期，最有利于發(fā)病。

育秧方式：采用育秧盤育秧，每盤中最好都安排感病品種對(duì)照，整個(gè)鑒定材料中還應(yīng)安排品種對(duì)照。采用注射接種方法，可以在秧田育秧，后移植于本田。

苗床要增施氮肥：（接種前4～5d），以利于發(fā)病。

2.1.3 接種

噴霧接種：當(dāng)秧苗達(dá)3～4葉期時(shí)，先按病菌小種分別配制孢子懸浮液，用100倍顯微鏡檢孢子密度，平均每個(gè)視野應(yīng)有孢子20～25個(gè)（孢密度則為20～25萬(wàn)個(gè)/mL）。然后將不同生理小種的孢子懸浮液混合，用于接種。采用專用噴霧器噴霧接種。噴霧時(shí)要將葉片充分均勻濕潤(rùn)。接種后，在26～28℃下，用薄膜覆蓋保濕24h。然后移至室外，在20～30℃下保持高濕，培養(yǎng)7d，進(jìn)行病情鑒定。

孢子懸浮液的配制：將上述產(chǎn)生孢子的大麥粒放入盛有自來(lái)水的燒杯中經(jīng)攪拌制成孢子懸浮液，其孢子濃度在100倍顯微鏡下觀察，平均每個(gè)視野20～25個(gè)/mL，隨后將不同小種的孢子懸浮液混合成混合孢子懸浮液。

接種：用專用的普通噴霧器或醫(yī)用喉頭噴霧器噴霧接種。噴霧時(shí)要使葉片上布滿均勻的霧點(diǎn)。接種最好是在專用接種室內(nèi)進(jìn)行，便于保濕保溫。

保溫、保濕和遮強(qiáng)光：噴霧接種后，秧苗應(yīng)在26～28℃和保持葉片上有水珠的濕度條件下24h，而后移于室外，在20～30℃下，經(jīng)4d左右即可見發(fā)病。

注射接種：

孢子懸浮液的配制：與“噴霧接種”相同。

接種：一般在水稻6～7葉期分蘗進(jìn)行，接種的分蘗必須有一張未展開的嫩心葉，使用醫(yī)用皮下注射器從葉鞘外側(cè)注入孢子懸浮液，直到多余菌液從心葉中冒出為止。接種后7d調(diào)查植株的發(fā)病情況。

注意：這種方法把菌液直接注射到葉鞘內(nèi)，使心葉較長(zhǎng)時(shí)間處于浸漬狀態(tài)，保證了濕度，因此，發(fā)病往往較噴霧法重，一般條件的情況下采用。

2.2 自然誘發(fā)法

選擇稻瘟病重病區(qū)，在多霧天氣和陰雨的條件下，種植鑒定材料，采用自發(fā)誘發(fā)抗病鑒定。

將鑒定材料種植在重病區(qū)肥沃土壤上，施氮水平略高于當(dāng)?shù)刎S產(chǎn)田。如有必要可進(jìn)行人工田間接種，以誘導(dǎo)發(fā)病。每個(gè)鑒定材料一般栽植10～20叢，可移栽或直播，重復(fù)三次。以當(dāng)?shù)乜埂⒏衅贩N作對(duì)照。在鑒定區(qū)周圍應(yīng)種植若干行咸感病的品種作誘發(fā)行，以增加感染強(qiáng)度。保持高濕條件。

對(duì)于數(shù)量較大的世代材料，每個(gè)株系種植2～5行，每行10株（叢），每隔10個(gè)株系種植一個(gè)抗、感病品種作對(duì)照。當(dāng)感病品種達(dá)到高度發(fā)病時(shí)，即可進(jìn)行病情鑒定。

3 病情鑒定

一般在接種后7d左右進(jìn)行病情鑒定。

病情鑒定的方法可按全國(guó)稻瘟病鑒定分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（表1）逐株進(jìn)行，分別記錄每株鑒定的結(jié)果，然后計(jì)算各品種的病情指數(shù)。

表1 苗瘟和葉瘟抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

苗瘟和葉瘟抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（IRRI）。

表2

S511

A

1004-7344（2016）30-0204-02

國(guó)際水稻所將稻瘟病的抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為10級(jí)（表2）。

2016-9-30