DcR3蛋白在鼻咽癌組織中表達(dá)的臨床意義及其與EB病毒關(guān)系的研究

杜玉曉+王彩紅+王軍+陳炳強(qiáng)+劉翠

【摘要】 目的 研究誘捕受體3（DcR3）蛋白在鼻咽癌中表達(dá)的臨床意義， 并探討在鼻咽癌組織中DcR3與EB病毒（EBV）的關(guān)系。方法 采用免疫組化SABC法檢測(cè)40 例鼻咽鱗狀細(xì)胞癌組織中DcR3蛋白的表達(dá)情況， 同時(shí)應(yīng)用癌旁正常組織和40例鼻咽正常組織做對(duì)照。并用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)40例鼻咽癌組織中EBV的陽(yáng)性率， 探討兩者之間的關(guān)系。結(jié)果 鼻咽癌組織中DcR3蛋白的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于癌旁正常組織及正常鼻咽組織（P<0.05）， 癌旁正常組織與正常鼻咽組織中DcR3的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；DcR3的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分級(jí)有關(guān)（P<0.05）， 與患者年齡和性別無(wú)關(guān)（P>0.05）；鼻咽癌組織中EBV的陽(yáng)性率為72.50%， DcR3在EBV陽(yáng)性的鼻咽癌組織中呈高表達(dá)， 在鼻咽癌陰性的組織中呈低表達(dá)， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 DcR3蛋白在鼻咽癌組織的高表達(dá)， 可作為判斷鼻咽癌分化、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)， 其與EBV共同作用促進(jìn)了鼻咽癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后。

【關(guān)鍵詞】 鼻咽腫瘤；誘捕受體3；EB病毒

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.20.028

DcR3是腫瘤壞死因子受體（TNFR）超家族的新成員。EBV是一雙鏈DNA病毒， 屬于皰疹病毒科。在鼻咽癌中DcR3的表達(dá)及與EBV的關(guān)系國(guó)內(nèi)外鮮見(jiàn)報(bào)道， 本文作者采用免疫組化SABC法對(duì)鼻咽癌中的DcR3蛋白進(jìn)行檢測(cè)， 并用RT-PCR的方法檢測(cè)EBV的陽(yáng)性率， 探討DcR3在鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展中的作用， 及其與EBV的關(guān)系， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 40例鼻咽癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織取自2010年1月～2015年12月在平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科住院活檢的鼻咽癌患者， 40例鼻咽正常組織來(lái)源于行鼻內(nèi)窺鏡手術(shù)的非腫瘤患者。術(shù)前均未接受放、化療， 診斷均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)。

1. 2 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備 ABI 7300 Real Time PCR system， Benchmark XT 全自動(dòng)免疫組化染色儀。

1. 3 方法

1. 3. 1 免疫組織化學(xué)SABC法主要試劑：一抗， 鼠抗人免疫球蛋白（Ig）G 型 DcR3蛋白單克隆抗體（美國(guó)eBioscience公司）。即用型廣譜SABC組化試劑盒及顯色試劑盒均購(gòu)自武漢博士德公司；具體操作按照試劑盒上的操作完整。DcR3陽(yáng)性表達(dá)為胞漿著棕黃色。無(wú)著色或著色<25%為陰性（-）， 著色范圍25%～50%為陽(yáng)性（+）， 著色范圍>50%為強(qiáng)陽(yáng)性（++）。所有切片由病理科醫(yī)生協(xié)助閱片判讀。

1. 3. 2 RT-PCR方法：總DNA抽提試劑盒購(gòu)于凱杰公司， 熒光定量PCR試劑盒購(gòu)于中山達(dá)安公司。具體操作按照試劑盒上操作完成。所有檢測(cè)結(jié)果均由具備衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心PCR上崗證的工作人員協(xié)助判讀。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)法。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 DcR3在鼻咽癌組織、癌旁正常組織和正常鼻咽黏膜組織中的表達(dá) 鼻咽癌組織中DcR3蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織和正常鼻咽組織（P<0.05）。見(jiàn)表1。DcR3在各鼻咽組織中的表達(dá)見(jiàn)圖1， 圖2， 圖3。

2. 2 DcR3在鼻咽癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

DcR3的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分級(jí)有關(guān)（P<0.05）， 與患者年齡和性別無(wú)關(guān)（P>0.05）。見(jiàn)表2。

2. 3 DcR3表達(dá)與EBV的關(guān)系 鼻咽癌組織中EBV的陽(yáng)性率為72.50%， DcR3在EBV陽(yáng)性鼻咽癌組織呈高表達(dá)， 在鼻咽癌陰性組織呈低表達(dá)， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

DcR3是一種新發(fā)現(xiàn)的TNFR超家族成員， 屬于分泌性的非膜聯(lián)接的蛋白分子， 廣泛存在于腫瘤組織中， 能抑制細(xì)胞凋亡， 并參與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。文獻(xiàn)報(bào)道[1]， DcR3蛋白及基因在人類的許多惡性腫瘤如肝癌、胃腸道腫瘤、胰腺癌、乳腺癌等呈高度表達(dá)狀態(tài)， 提示DcR3具有高度的腫瘤特異性。Weissinger 等[2]研究發(fā)現(xiàn)在腎細(xì)胞癌中DcR3與integrinα4、MMP7、uPA均陽(yáng)性表達(dá)， 與腎細(xì)胞癌的臨床病理參數(shù)密切相關(guān)， 導(dǎo)致了腎細(xì)胞癌的局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后， 證實(shí)DcR3是通過(guò)PI3K/AKT途徑導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本次研究顯示DcR3在鼻咽癌組織中呈高表達(dá)， 在其臨近組織中無(wú)表達(dá)或偶爾低表達(dá)。DcR3與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及病理分化程度等臨床病理參數(shù)密切相關(guān)， 與年齡和性別無(wú)關(guān)。

在一些病毒相關(guān)性腫瘤中， DcR3過(guò)度表達(dá)尤為顯著。自1996年Old等首先在鼻咽癌患者血清中檢測(cè)到EBV以來(lái)， 逐漸證實(shí)EBV在鼻咽癌的發(fā)病因素中的重要作用， 其拷貝數(shù)與其TNM分期密切相關(guān)。本次研究顯示在鼻咽癌組織中EBV的陽(yáng)性率為72.50%， 在EBV陽(yáng)性組織中DcR3的表達(dá)明顯高于EBV陰性組織， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 說(shuō)明DcR3與EBV共同作用促進(jìn)了鼻咽癌局部浸潤(rùn)。這與Ho等[3]關(guān)于鼻咽癌中DcR3及EBV的研究結(jié)果相一致。其可能機(jī)制為EBV轉(zhuǎn)錄激活RTA， 通過(guò)結(jié)合到其啟動(dòng)子上調(diào)DcR3的表達(dá)。也可能是EBV膜蛋白1 （LMP1） 通過(guò)NF-кB及PI3K途徑上調(diào)DcR3導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生[2]。

綜上所述， DcR3在鼻咽癌組織中高表達(dá)， 其與EBV共同促進(jìn)了鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。DcR3在許多惡性腫瘤組織及血清中呈陽(yáng)性表達(dá)， 而其單克隆抗體的制備也在研究中， 本研究為鼻咽癌預(yù)防、生物治療提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] Zhou J， Song S， Li D， et al. Decoy receptor 3 （DcR3） overexpression predicts the prognosis and pN2 in pancreatic head carcinoma. World J Surg Oncol， 2014， 12（1）：1-7.

[2] Weissinger D， Tagscherer KE， Macher-Gppinger S， et al. The soluble Decoy Receptor 3 is regulated by a PI3K-dependent mechanism and promotes migration and invasion in renal cell carcinoma. Molecular Cancer， 2013， 12（1）：3365-3370.

[3] Ho CH， Chen CL， Li WY， et al. Decoy receptor 3， upregulated by Epstein-Barr virus latent membrane protein 1， enhances naso?pharyngeal carcinoma cell migration and invasion. Carcinogenesis， 2009， 30（8）：1443-1451.

[收稿日期：2016-04-20]