秩邊透水道技術對催產素致痛經大鼠下丘腦5-羥色胺調控機制的實驗研究

郝裕峰，溫進中，金曉飛

（山西中醫學院，山西太原030024）

秩邊透水道技術對催產素致痛經大鼠下丘腦5-羥色胺調控機制的實驗研究

郝裕峰，溫進中，金曉飛

（山西中醫學院，山西太原030024）

目的：觀察傳統針刺與針刺秩邊透水道對催產素致痛經大鼠下丘腦5-羥色胺（5-HT）含量的影響。方法：20只雌性SD大鼠隨機分為對照組、模型組、關元組、秩邊透水道組，制備催產素痛經大鼠模型，觀察各組大鼠的扭體次數，通過放射免疫分析檢測大鼠下丘腦5-HT含量。結果：秩邊透水道組大鼠扭體發生率明顯低于模型組，下丘腦5-HT含量顯著高于模型組（P＜0.05），與對照組、關元組比較差異無統計學意義。結論：秩邊透水道技術能提高大鼠中樞5-HT的合成率與利用率，加強抑制性神經遞質的釋放，起到中樞鎮痛作用，從而有效緩解痛經。

原發性痛經；秩邊透水道技術；5-HT

秩邊透水道技術作為傳統中醫學針灸的一種療法，在臨床治療原發性痛經方面療效顯著、經濟、簡便，但其作用機制尚不明確。為深入探討秩邊透水道技術的治療機制，本實驗以傳統針刺作為對照療法，各設對照組與模型組，通過觀察大鼠的扭體發生率及測量下丘腦5-HT的含量，探討其治療痛經的調控機制，從而提供臨床秩邊透水道技術治療原發性痛經的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

健康雌性SD大鼠20只，體質量（230±15）g，由北京動物研究院動物室提供。苯甲酸雌二醇注射液（批號110202511），縮宮素注射液（批號H3402474），一次性針灸針，低速離心機，免疫分析試劑盒（由北京海科瑞生物生物技術中心提供），其余實驗器材均由山西醫科大學實驗室提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組與造模采用隨機數字表法將動物隨機分為4組：對照組、模型組、關元組、秩邊透水道組，每組5只。采用縮宮素致大鼠子宮劇烈收縮模擬痛經。模型組、關元組、秩邊透水道組大鼠股部皮下注射苯甲酸雌二醇連續10 d，第1天、第10天0.5mg/只，第2天～第9天0.2mg/只，末次給藥1 h后，腹腔注射縮宮素2 U/只。對照組大鼠每日股部皮下注射同等劑量的生理鹽水。

1.2.2 干預方法從造模開始第1天即給予干預治療，對照組、模型組僅抓取固定5min，連續3 d；關元組于每天造模后針刺關元穴，深度為8～10mm，行平補平瀉手法，留針5min，每日1次，連續3 d；秩邊透水道組于每天造模后即進行秩邊透水道干預，俯臥位固定大鼠，用針灸針迅速刺入秩邊穴，針尖朝同側水道穴方向，深度為8～10 mm，行平補平瀉手法，留針5min，每日1次，連續3 d。

1.2.3 指標檢測大鼠一般情況的觀察、在實驗過程中觀察各實驗組大鼠的毛發色澤、動作行為、精神狀態、體質量等，并做好相關記錄。

大鼠扭體次數：第10天腹腔注射縮宮素，誘發扭體反應為子宮收縮（痛經）的指標，觀察并記錄30min內每只大鼠的扭體次數。

大鼠下丘腦及血漿5-HT測定：各組大鼠的扭體記錄完成后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉后快速斷頭，在無菌工作臺冰盤上取大鼠下丘腦組織，立即用預冷生理鹽水沖洗1～2次，用濾紙拭干后用分析天平稱重，處理后勻漿、離心取上清夜，-70℃保存備用。由于勻漿（提取）過程中會產生一定的系統誤差，需對其進行較正，可根據測其上清液中蛋白濃度進行較正。之后按照ELISA試劑盒的說明書進行試劑的準備、加樣、保溫、洗滌、顯色和比色等正確操作，最后進行結果的判定。

2 結果

2.1 一般狀態

對照組大鼠一般狀況良好，毛色順滑，動作靈敏，精神良好，體質量增長，未見明顯異常。模型組大鼠毛色暗淡萎黃，精神變差，動作遲緩，體質量下降。關元組與秩邊透水道組大鼠毛色略暗淡萎黃，精神尚可，體質量稍下降。

2.2 各組大鼠扭體反應比較

對照組大鼠未出現扭體反應，模型組、關元組及秩邊透水道組大鼠全部發生扭體反應。模型組大鼠扭體反應較明顯，大鼠腹部收縮內凹，軀干與后肢伸展，臀部與一側肢體內旋。與對照組比較，其余各組大鼠扭體次數增加，差異有統計學意義（P＜0.01），說明痛經模型造模成功。與模型組比較，關元組及秩邊透水道組大鼠30min內扭體反應次數明顯減少，差異有統計學意義（P＜0.01）。結果見表1。

表1 各組大鼠扭體次數比較

2.3 各組大鼠下丘腦5-HT含量比較

結果見表2。

表2 各組大鼠5-HT含量比較（ng/g，±s）

表2 各組大鼠5-HT含量比較（ng/g，±s）

注：與對照組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05

組別n下丘腦5-HT對照組5 63.53±8.33模型組5 50.62±5.561）關元組5 61.86±6.312）秩邊透水道組5 63.35±4.082）

與對照組比較，模型組大鼠下丘腦5-HT含量明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05），說明造模后大鼠中樞5-HT含量降低；關元組、秩邊透水道組與模型組相比，大鼠下丘腦組織5-HT含量升高，差異有統計學意義（P＜0.05）；且關元組、秩邊透水道組與對照組比較，大鼠下丘腦組織5-HT含量差異無統計學意義。說明針刺關元治療或是秩邊透水道治療能夠提高下丘腦組織中5-HT含量，對痛經均有一定的緩解鎮痛效果。

3 討論

據研究發現針灸鎮痛主要通過調節下丘腦-垂體-腎上腺皮質神經體液系統來實現，而神經體液調節系統是通過復雜的化學遞質活動來完成的。下丘腦5-HT是人體內重要的神經遞質和調節生理功能的物質，與多方面的生理功能有關，是實現針刺鎮痛效應的重要環節。實驗證明，電針可促使大鼠全腦5-HT的合成率增加43%，利用率增加26%，以致全腦、腦干或下丘腦的5-HT含量增高。使用5，6-雙羥色胺選擇性損毀5-HT能神經纖維，隨著有關腦內的5-HT含量下降，針刺鎮痛效應也明顯減弱。與此相反，給動物注射5-HT的前體5-HT酸或應用優降寧等單膠氧化酶抑制劑阻斷5-HT的降解，均可使腦內5-HT含量增高，同時針刺鎮痛效應也顯著增強［1-2］。

疼痛與其他感覺一樣，是由一定的刺激作用于外周感受器，傷害性感受器經換能后轉變成神經沖動（傷害性信息），循相應的感覺傳入通路（傷害性傳入通路）進入中樞神經系統，經脊髓、丘腦中繼后到大腦皮質，通過三級中樞整合后產生疼痛感覺和疼痛反應，其形成機制包括外周神經機制和中樞神經機制兩個方面。5-HT是腦干下行抑制系統參與鎮痛作用的主要神經活性物質，許多研究表明中樞5-HT受體的激活可以產生痛覺抑制作用，引起抑制性神經遞質的釋放，起到鎮痛的作用。實驗研究表明動物體內分布于中樞神經系統與痛及鎮痛有關的腦區的嗎啡樣物質與疼痛關系密切，穴位針刺可促使嗎啡樣物質的釋放，并作用于阿片受體而產生鎮痛效果。嗎啡樣物質在針刺鎮痛過程中起重要的作用，而腦內嗎啡樣物質的釋放和利用與5-HT之間關系密切［3-4］。

本實驗表明，秩邊透水道技術能夠明顯降低催產素所致痛經大鼠的扭體次數，能提高大鼠中樞5-HT的合成率與利用率，并加強抑制性神經遞質的釋放，起到中樞鎮痛作用，從而有效緩解痛經。本實驗初步探討了秩邊透水道技術對痛經大鼠的中樞鎮痛機制，今后還需要從其他方面對其鎮痛機制做進一步的研究。

［1］徐崇權.電針對原發性痛經模型大鼠鎮痛效應及免疫機制的研究［D］.廣州：廣州中醫藥大學，2009.

［2］冀海明.外周5-羥色胺2A受體：治療慢性炎性痛及神經病理性痛的重要靶點［D］.福州：福建師范大學，2008.

［3］陳雪嬌.外周神經組織5-羥色胺2A受體在炎性疼痛中的作用［D］.福州：福建師范大學，2007.

［4］蔡巧燕.外周組織5-羥色胺2A受體在角叉萊膠誘發的炎性痛維持過程中的作用機制［D］.福州：福建師范大學，2008.

（編輯：張世霞）

Study on Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）on 5-HT content in dysmenorrhea rats induced by oxytocin

Hao Yufeng，Wen Jinzhong，Jin Xiaofei
（ShanxiCollege of TCM，Taiyuan Shanxi030024）

Objective：To observe the change of 5-HT content in the hypothalamus of dysmenorrhea rats induced by oxytocin to exploremechanism of the treatmentmethod of Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）.Methods：20 female SD rats were randomly divided into control group，model group，Guanyuan group，Zhibian through Shuidao group.Beside the control group，the other groups′s ratswere given oxytocin tomake the dysmenorrheamodel.Guanyuan group and Zhibian through Shuidao group were given corresponding treatment.The writhing occurrence rates and the 5-HT content in the hypothalamus were observed.Results：The incidence rate of writhing in rats with Zhibian group was significantly lower than that inmodel group.The content of 5-HT in hypothalamus of Zhibian through Shuidao group was significantly higher than that inmodel group（P＜0.05）.Conclusion：The Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）can improve the synthesis rate and utilization rate of 5-HT in central nervous system，strengthen the release of inhibitory neurotransmitter and play a central analgesic effect so as to effectively relieve dysmenorrhea.

dysmenorrhea；Zhibian（BL54）through Shuidao（ST28）；5-HT

R285

A

1671-0258（2016）06-0011-03

國家科技支撐計劃（2013BAI05B08）

郝裕峰，在讀碩士，E-mail：694397180@qq.com

金曉飛，碩士研究生導師，E-mail：47355033@qq.com