黃芫花特征圖譜研究

郝晶晶，甄會賢，史正文，郭云，張府君

（山西藥科職業學院，山西太原030031）

黃芫花特征圖譜研究

郝晶晶，甄會賢，史正文，郭云，張府君

（山西藥科職業學院，山西太原030031）

●中醫藥學在世界上首先發現了中藥并首創了方劑，醫方是“除疾保性命之術”，而劑則有“調百藥齊，和之所宜”之功。采用現代藥物制劑技術重新研究并升華古典方劑之術，開創未來藥物制劑技術和新劑型藥物研究的全新思維和方向。

目的：建立黃芫花藥材及制劑的HPLC特征圖譜對照測定法，為黃芫花質量控制提供參考。方法：采用Agilent高效液相色譜儀、島津2010高效液相色譜儀，甲醇-水為流動相梯度洗脫，測定黃芫花藥材的HPLC特征圖譜，分別從化學成分對不同產地黃芫花的HPLC特征圖譜進行定性與定量相似性評價。結果：建立黃芫花藥材及制劑的HPLC特征圖譜測定條件分離良好、專屬性強、可用于黃芫花質量的比較與控制。結論：以特征對照品為參照進行黃芫花藥材及制劑特征圖譜相似性評價，重復性和耐用性良好。因此，黃芫花藥材的質量和安全性亟待提高。

黃芫花；特征圖譜；木犀草素

1 儀器與試藥

Agilent高效液相色譜儀，島津2010高效液相色譜儀，紫外檢測器。對照品木犀草素（供含量檢測用；批號為：MUST-11051001），購于北京恒元啟天化工技術研究院。黃芫花樣品來自采集和采購共計10批。甲醇為色譜純，水為純化水，磷酸及其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備

取本品適量，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇10 mL，密塞，稱定重量，超聲處理1 h（250W，33 KHz），放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2 對照品溶液的制備

黃芫花經HPLC分析出現多個色譜峰，木犀草素可以通過對照品確認，且相對穩定，因此選用木犀草素峰作為參照物峰中的S峰。

取木犀草素對照品，精密稱取10.22 mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。精密量取儲備液0.5mL，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每毫升含木犀草素0.05mg的對照品溶液［2］。

2.3 檢測方法

依照高效液相色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VID），結合指紋圖譜要求測定。

2.3.1 流動相的確定在進行流動相考察時用水代替0.1%磷酸溶液，無論分離度還是色譜峰的峰形均比較差，故選擇0.1%磷酸溶液為流動相的成分之一。

實驗過程中共選擇了以下流動相系統，結果見表1。

表1 流動相系統的選擇

通過該流動相系統對供試品溶液進行出峰的篩查，可大致判斷出峰時的流動相比例，通過該系統可知在流動相比例為（30∶70）時才有色譜峰的出現，而在比例變為甲醇100%時也再未出現其他色譜峰［4］，故采用表2進行梯度洗脫。

表2 梯度洗脫程序

結果表明，以表2進行梯度洗脫為最佳，譜圖上各個色譜峰的分離度較好，保留時間適中，因此選此流動相作為黃莞花的HPLC指紋圖譜檢測的流動相。

2.3.2 檢測波長的選擇文獻中木犀草素的測定波長有260 nm、328 nm、340 nm、349 nm、355 nm等，對木犀草素的甲醇溶液進行紫外光譜掃描，在254 nm和350 nm有最大吸收，且350 nm處吸收強度大于254 nm處，故選擇350 nm為檢測波長。

2.3.3 色譜柱的選擇實驗過程中選擇了迪馬色譜柱進行考察：DM C18（5μm，4.6mm×250mm），從結果看，多個色譜峰且分離效果較好。綜合考慮，選定DM C18（5u m，4.6mm×250mm）為色譜柱。

通過選擇，選定如下色譜條件為黃莞花特征圖譜的測定色譜條件。

色譜柱：DM C18（5u m，4.6 mm×250 mm）色譜分析柱；甲醇-0.1%磷酸溶液（30：70）為流動相，依表2進行梯度洗脫，檢測波長：350 nm，流速：1 mL/min；檢測方法：分別精密吸取參照物溶液10 μL、供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀。按中藥色譜特征圖譜操作要求，供試品色譜中以木樨草苷為參比標準峰，另外兩個色譜峰的保留時間與參比峰保留時間進行比值，算出其相對保留時間，作為判斷依據。

2.4 方法學考察

2.4.1 精密度試驗取同一供試品（批號：H-JX）溶液，同一進樣量，連續進樣6次，按實驗條件依法測定，計算其相對保留時間，結果見表3。

表3 精密度試驗結果（min）

結果顯示，黃莞花的制備樣品通過HPLC分析結果穩定，精密度RSD分別為0.61%，0.46%。結果表明，精密度良好。

2.4.2 穩定性試驗取同一供試品（批號：H-JX）溶液，在24 h內不同時間進樣5次，按實驗條件依法測定，并按計算相對保留時間，供試品相對保留時間與參比對照保留時間比值，結果見表4。

表4 穩定性試驗結果（min）

以上結果顯示，黃莞花的制備樣品在24 h內通過HPLC分析結果穩定，穩定性的RSD分別為0.76%，0.57%。結果表明，樣品溶液在24 h內穩定性良好。

2.4.3 重現性試驗取同一批號的供試品（批號：H-JX）6份，按上述方法進行制備并進行檢測，并進行計算，圖譜及相似度結果見圖1及表5。

圖1 S木犀草苷參比峰

表5 黃芫花指紋圖譜重復性的相似度（min）

以上結果顯示，6份供試品中相對保留時間的RSD均為0.24。結果表明其重現性良好。

3 結論

通過對12批不同產地藥材的考察，選用保留時間為19 min和21 min附近的色譜峰作為共有峰，而已知的木犀草素保留時間為37 min作為參照峰，用相對保留時間計算，得出黃芫花的特征圖譜的相對保留時間的區間，結果見表6。

表6 不同藥品指標峰保留時間考察（min）

通過相對保留時間的評價得出，分別在0.511 min、0.570min相對保留時間為特征圖譜，并設定（0.511±5）%、（0.570±5）%作為一個相對保留時間的判定區間。即相對保留時間比例在0.485～0.537min，0.542～0.598min范圍內即可。標準特征圖譜見圖1。

［1］秦永祺.黃芫花有效成分的研究［J］.植物學報，1982（6）：558-561.

［2］國家藥典委員會.中國藥典［M］.北京：化學工業出版社，1977：514-516.

［3］山西省衛生廳.山西省中藥材標準［M］.太原：山西省衛生廳，1987：47-49.

［4］王成瑞.抗生育有效成分河朔蕘花素的分離與鑒定［J］.中草藥，1981（12）：2-4.

［5］謝宗萬，余友芩.全國中草藥名鑒（上）［M］.北京：人民衛生出版社，1996：302-303.

［6］《中國植物志》編輯委員會.中國植物志52（1）［M］.北京：中國科學技術出版社，2004：322-324.

［7］《山西植物志》編輯委員會.山西植物志4［M］.北京：中國科學技術出版社，2004：264-266.

［8］南京中醫藥大學.中藥大詞典（下）［M］.上海：上海科學技術出版社，2006：2 843-2 845.

［9］康少文，于永芳，李麗華，等.黃芫花中期引產有效成分的研究［J］.承德醫學院學報，1984（1）：5-6.

［10］董倩.芫花及其炮制品的質量評價［D］.沈陽：遼寧中醫藥大學，2010.

［11］魚愛和.黃芫花乙醇液的毒性及質量標準研究［J］.中成藥，1999（3）：119-121.

［12］冉先德.中華藥海（上冊）［M］.哈爾濱：哈爾濱出版社，1993：567-569.

［13］國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草（5）［M］.上海：上海科學技術出版社，1999：420-422.

（編輯：張世霞）

Study on specific chromatogram of flower of Lowdaphne stringbush

Hao Jingjing，Zhen Huixian，Shi Zhengwen，Guo Yun，Zhang Fujun
（Shanxi Pharmaceutical Vocational College，Taiyuan Shanxi030031）

Objective：To establish HPLC specific chromatogram control determination method to provide the reference on quality control of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf.Methods：Qualitative and quantitative similarity were evaluated by both qualitative and quantitative aspects of chemical composition of HPLC specific chromatogram of different origin of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf.Result：The establishment of HPLC specific chromatogram of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf and preparation conditions for determination of separation，good specificity can be used to compare and control quality of Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf.Conclusion：The features were used as reference for Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf medicinal materials and preparations of feature similarity evaluation，good repeatability and durability.Therefore，the quality and safety of Lowdaphne Stringbush Flower and Leafneeds to be improved.

Lowdaphne Stringbush Flower and Leaf；specific chromatogram；luteolin

R285

A

1671-0258（2016）06-0016-03

郝晶晶，E-mail：94581403@qq.com