肝動脈栓塞聯合T細胞克隆技術治療結腸癌肝轉移臨床研究

陳文生　馮　燕　郝忠臣　侯傳偉　王振奇　趙　雷　孫慶春吉化集團公司總醫院介入科，吉林吉林　132022

肝動脈栓塞聯合T細胞克隆技術治療結腸癌肝轉移臨床研究

陳文生馮燕郝忠臣侯傳偉王振奇趙雷孫慶春
吉化集團公司總醫院介入科，吉林吉林132022

目的探討肝動脈栓塞（TACE）聯合T細胞克隆技術治療結腸癌肝轉移的臨床療效。方法選擇2010年1月～2014年12月結腸癌肝轉移患者64例的臨床資料進行回顧性分析，33例患者給予肝動脈栓塞治療為對照組，31例患者在此基礎上給予T細胞克隆技術治療為研究組。比較兩組的臨床療效及治療后外周血T細胞亞群。結果研究組總有效率顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。研究組治療后總T細胞亞群、CD4+T細胞亞群、CD8+T細胞亞群顯著高于對照組，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。結論肝動脈栓塞聯合T細胞克隆技術治療結腸癌肝轉移能夠改善患者的預后。

肝動脈栓塞；T細胞克隆技術；結腸癌；肝轉移

［Abstract］Objective To discuss clinicalefficacy of hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology in the treatment of livermetastasis from colon cancer.M ethods Clinical data of 64 cases with liver metastasis from colon cancer from Jan 2010 to Dec 2014 were respectively analyzed.33 cases of control group were treated with hepatic arterial embolization，and 31 cases of study group were treated with hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology.Clinical efficacy and peripheral blood T cell subsets after treatment of two groups were compared. Results Total effective rate of study group was higher than control group（P＜0.05）.After treatment，the total T cell subsets CD4+T cell subsets and CD8+T cell subsets in study group were higher than control group（P＜0.01）.Conclusion Hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology in the treatment of liver metastasis from colon cancer can improve the prognosis.

［Key words］Hepatic artery embolization；T cell cloning technology；Colon cancer；Livermetastasis

結腸癌是臨床常見的惡性腫瘤，一旦發生肝轉移，具有較高的死亡率，是導致治療失敗的主要原因。結腸癌無肝臟轉移的患者5年的生存率較有肝臟轉移的患者要高。提高發生肝臟轉移結腸癌患者的生存率是治療的關鍵。肝動脈介入治療是治療結腸癌肝臟轉移的主要方法。T細胞克隆技術，能夠促進增殖，提高殺瘤活性，并且殺瘤譜廣［1，2］。自體細胞免疫治療成為治療晚期結腸癌的重要方法，并且具有毒性低的優點［3，4］。本文采用肝動脈栓塞聯合T細胞克隆技術治療結腸癌肝轉移取得了較好的效果。現將結果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2010年1月～2014年12月在我院治療的結腸癌肝轉移患者64例的臨床資料進行回顧性分析。納入標準：所有患者均符合臨床診斷標準，結腸癌腺癌，肝轉移診斷明確，KPS評分70分及以上，臨床資料完整。排除標準：合并其他系統內科疾病的患者，腎功能、心功能異常的患者。其中男38例，女26例，年齡41～77歲，平均（48.4±9.7）歲。根據患者的治療方法分為對照組和研究組。對照組33例，其中男18例，女15例，平均年齡（47.8±8.9）歲；研究組31例，其中男20例，女11例，平均年齡（48.9±9.3）歲。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究通過醫院醫學倫理會同意。

1.2治療方法

1.2.1肝動脈栓塞所有患者均給予TACE治療，應用Seldinger技術，局麻下行股動脈穿刺，插入導管，造影，觀察腫瘤組織血供，明確主要供血動脈，插入導管至供血動脈內，栓塞腫瘤供血動脈注入化療藥物，常用藥物奧沙利鉑、亞葉酸鈣、替加氟、絲裂霉素等。結束后拔出導管，局部加壓包扎，制動24 h。常規心電監護，觀察生命體征，觀察是否有病情變化、保肝等治療。

1.2.2T細胞克隆技術研究組在TACE術后大約1周行T細胞克隆生物治療。患者在術前采集外周血進行T細胞培養。每次TACE+T細胞克隆序貫治療間隔時間為4～6周，隨訪6個月～1年，每個治療周期后評價病情。經病理、影像等相關檢查證實的結腸癌肝轉移患者，行規律肝動脈化療栓塞治療，并且控制穩定后，所有患者治療前采靜脈血進行免疫評估，并行免疫功能重建，再根據不同免疫情況對T細胞行培養增殖，回輸入患者體內，連續3個療程。具體過程如下：（1）外周血單個核細胞的分離：采集患者靜脈血80mL，用聚蔗糖400（Lympholyte-H，Cedarlane產品）分離單個核細胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs），經生理鹽水洗滌細胞3次后備用。（2）DC細胞的分離及體外培養：PBMCs懸浮于DC培養基后，在培養皿內37℃貼壁培養3 h，懸浮細胞用于T細胞培養，貼壁細胞培養于DC培養基中并添加GM-CSF 1000 U/mL和IL-4 1000 U/mL，培養第4天添加相應腫瘤抗原提取物，培養第5天添加TNF-α1 ng/mL，培養第7天后對DC細胞表型（CD80/CD83/CD86/HLADR）進行檢測分析，微生物及內毒素檢驗合格后收集DC，按方案回輸至患者皮下。（3）T細胞的體外培養和擴增：將貼壁處理后的懸浮細胞用T細胞培養基懸浮并調細胞密度為2×106/mL，添加IL-2 1000 U/mL、CD3McAb 50 ng/mL。此后每2天計數細胞并適當補充新鮮培養基。分別在培養的第10天、第12天和第14天進行細胞表型、微生物及內毒素檢測，各項指標符合要求后收集T細胞、洗滌，按方案回輸至患者靜脈內。主要材料及儀器：日本泰爾茂公司提供的RH導管及1.5 m超滑導絲，北京醫療設備廠提供的電熱恒溫水浴鍋，日本奧林巴斯（Olympus）公司提供的BX41顯微鏡，上海安亭科學儀器廠提供的LXJ-B離心機，上海安亭科學儀器廠提供的TGL-16B高速離心機，日本三洋電器集團提供的MC0-15AC二氧化碳培養箱，美國Thermo公司提供的1300 series B2 100%外排生物安全柜，成都金鳳液氮罐廠提供的YDS-35-80液氮罐，上海之信儀器有限公司提供的LX200手掌型離心機，美國奧林巴斯Olympus公司提供的CKX31顯微鏡，丹麥NUNC公司提供的96孔細胞培養板，美國Axygen公司提供的微量加樣槍頭，美國Eppendorf公司提供的離心管，美國ABI公司提供的ABI3730DNA分析儀及GeneMapper軟件。

1.3評價方法

臨床療效判斷［5］：包括完全緩解（CR）：所有目標病灶消失；部分緩解（PR）：基線病灶長徑總和縮小超過30%；無變化（SD）：基線病灶長徑總和有縮小但未達PR或有增加但未達PD；進展（PD）：基線病灶長徑總和增加超過20%或出現新病灶。完全緩解+部分緩解=總有效。采用流式細胞術分析T細胞亞群評估患者免疫功能情況，所有熒光標記的流式細胞抗體均購自美國BD公司，細胞表面標記分析和細胞內標記分析按說明書操作。

1.4統計學處理

采用SPSS15.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料采用［n（%）］表示，采用χ2檢驗，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組臨床療效比較

見表1。與對照組比較，研究組總有效率更高，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表1　兩組臨床療效比較［n（%）］

2.2兩組患者治療后外周血T細胞亞群變化

見表2。與對照組比較，研究組治療后總T細胞亞群、CD4+T細胞亞群、CD8+T細胞亞群高于對照組，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。

表2　兩組患者治療后外周血T細胞亞群變化［n（%）］

3　討論

結腸癌容易發生肝臟轉移，部分患者在確診時已經發生肝轉移。發生肝轉移后雖然部分患者可通過肝切除術獲得一定的5年生存率，但是手術適應證要求較嚴格，并且術后容易發生復發。手術并不能根本上解決結腸癌。保守治療包括全身化療以及其他的姑息性治療，但毒副作用較大，并且效果較差，影響患者的生存質量。經肝動脈介入化療能夠直接將化療藥物送至病變處，具有更高的針對性，效果優于全身化療，并且全身毒副作用較小，兩者聯合，效果優于單純使用全身化療。生物治療已經成為惡性腫瘤治療的第四種模式。自體T細胞過繼免疫治療作為生物治療中最主要的方法之一已經廣泛應用于臨床的治療，該治療符合生理低毒高效的特點，有著巨大的治療潛力和生命力，是未來腫瘤治療的發展方向。雖然近年自體T細胞過繼免疫治療技術取得了長足的發展，但由于缺乏客觀評價方法，導致體外培養的細胞不能被有效地質控監測，回輸至患者體內后其療效又不能被準確和及時地評價，而阻礙了這項新技術規范化與標準化的實施。過繼性免疫治療是腫瘤生物治療的方法之一。

研究證實，腫瘤的發生與發展與機體的免疫功能狀態密切相關，腫瘤患者外周血T淋巴細胞亞群的比例常發生變化［6-8］。而且在結腸癌肝轉移中也不例外。本研究中經自體T細胞過繼治療后，24例總T淋巴細胞比例升高，CD4+T淋巴細胞比例獲顯著改善者22例，CD8+T淋巴細胞亞群比例升高者21例。這些結果說明自體T細胞過繼治療確實能改善患者體內淋巴細胞比例，也提示該療法可以不同程度地提高患者抗腫瘤免疫應答能力。因為CD8+T細胞是殺傷腫瘤細胞的主力，CD4+T細胞對于維持長期免疫記憶十分重要［9，10］。還有其他一些淋巴細胞亞群的變化也可能作為評價免疫功能指導臨床工作的指標，如檢測輔助性純真、記憶T細胞亞群，殺傷性純真、記憶T細胞亞群可以了解機體內免疫應答基礎及活躍程度［11-13］。檢測免疫效應T細胞亞群，如CD4+/CD8+/CD45RA+/CD45RO+/ CD62L+，可以了解腫瘤的負荷情況和抗腫瘤細胞免疫應答的活躍程度［14，15］。另外，檢測調節性T細胞亞群（CD4+/CD25+/Foxp3+及CD8+/CD28+），可以了解體內抗腫瘤細胞免疫應答受到抑制的情況，這些T淋巴細胞亞群有待于今后臨床應用的實踐。

綜上所述，肝動脈栓塞聯合T細胞克隆治療結腸癌肝轉移能夠改善患者的預后，改善患者的免疫狀態，有利于腫瘤細胞的清除。

［1］張志強，王梓瑛，鄭爽，等.DC-CIK細胞免疫治療聯合替吉奧化療治療老年晚期胃癌的療效觀察［J］.中國現代藥物應用，2016，10（3）：144-145.

［2］王蘭榮，趙丹，曹旸，等.DC-CIK聯合化療加靶向治療在晚期結腸癌中的應用觀察［J］.國際醫藥衛生導報，2016，22（1）：42-44.

［3］鄧新娜，吳海江，高飛，等.DC-CIK細胞聯合中藥治療晚期非小細胞肺癌的研究［J］.現代中西醫結合雜志，2015，24（36）：4000-4002.

［4］林曉純，廖劍鋒，林純旋，等.DC-CIK或CIK聯合導管肝動脈化療栓塞術治療原發性肝癌的Meta分析［J］.中華臨床醫師雜志（電子版），2015，9（24）：118-122.

［5］孫燕，石遠凱.臨床腫瘤內科手冊［M］.第5版.北京：人民衛生出版社，2007：7.

［6］秦亞光，程傳耀，王亞秋，等.DC-CIK療法聯合化療治療晚期非小細胞肺癌［J］.腫瘤基礎與臨床，2015，28（6）：497-500.

［7］曲雅靜，李廣欣，徐麗君，等.DC-CIK聯合化療治療中晚期非小細胞肺癌臨床效果評價［J］.解放軍醫藥雜志，2015，27（11）：72-76.

［8］楊林珠，洪志鵬，余慶鶴，等.DCs-CIK細胞免疫治療聯合化療治療晚期非小細胞肺癌的療效觀察［J］.現代生物醫學進展，2015，20（31）：6146-6149.

［9］黃麗紅，舒暢.介入療法聯合DC-CIK生物療法治療中心型非小細胞肺癌的臨床效果觀察［J］.中國醫藥指南，2015，13（30）：49.

［10］成建初，徐懿.自體DC-CIK細胞免疫療法治療非小細胞肺癌的效果［J］.中國醫藥導報，2015，12（32）：94-96.

［11］李金瑞，鐘鑫平.射頻消融聯合DC-CIK治療中晚期肝細胞癌的療效評價［J］.檢驗醫學與臨床，2015，12（19）：2830-2833.

［12］趙偉鋒，陳雪姣，溫一陽，等.DC-CIK聯合化療加靶向治療對晚期結腸癌效果探討［J］.中國繼續醫學教育，2015，7（26）：93-95.

［13］鄭培浩，劉毅，岑堅，等.DC-CIK免疫治療對急性白血病患者外周血T淋巴細胞亞群及細胞因子的影響［J］.山東醫藥，2015，55（38）：72-74.

［14］高正興，童朝暉，張征，等.化療聯合DC-CIK治療多發性骨髓瘤的療效及其對VEGF、IL-2及TNF-α的影響［J］.湖南師范大學學報：醫學版，2015，12（3）：47-49.

［15］呂然，胡榮鵬，馮慶亮，等.自體DC-CIK細胞回輸在MWA聯合化療治療局部晚期腺細胞肺癌中的作用［J］.實用腫瘤雜志，2015，30（4）：359-363.

Clinical study of hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology in the treatment of liver metastasis from colon cancer

CHENWensheng FENG Yan HAO Zhongchen HOU Chuanwei WAGN Zhenqi ZHAO Lei SUN Qingchun
Interventional Section，the General Hospital of Jilin Chemical Group Company，Jilin 132022，China

R735.35

B

1673-9701（2016）15-0009-03

吉林省衛生計生委科研計劃（2013Z096）

2016-03-25）