不同產(chǎn)地白花蛇舌草中東莨菪亭和耳草酮B的含量分析比較

劉 紅（青島第八人民醫(yī)院藥品采購(gòu)辦，山東 青島 266000）

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不同產(chǎn)地白花蛇舌草中東莨菪亭和耳草酮B的含量分析比較

劉 紅
（青島第八人民醫(yī)院藥品采購(gòu)辦，山東 青島 266000）

目的 建立HPLC法對(duì)不同產(chǎn)地白花蛇舌草藥材中東莨菪亭和耳草酮B含量進(jìn)行了考察研究，為藥材的開(kāi)發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。方法 應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，色譜柱：Agilent Eelipse XDB-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)：385 nm；柱溫：30 ℃；流速：10 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。結(jié)果 江西產(chǎn)白花蛇舌草藥材中東莨菪亭和耳草酮B含量均高于其他產(chǎn)地，其次為湖北、安徽，廣西產(chǎn)含量最低。結(jié)論 不同產(chǎn)地的白花蛇舌草中東莨菪亭和耳草酮B的含量有較大的差異，通過(guò)方法學(xué)考察驗(yàn)證，該方法精密度高、穩(wěn)定性良好，方法可行。

白花蛇舌草；東莨菪亭；耳草酮B；含量測(cè)定

白花蛇舌草具清熱解毒，活血利尿之功效。臨床用于治療扁桃體炎、咽喉炎、尿路感染、盆腔炎、肝炎、菌痢、闌尾炎、毒蛇咬傷等病癥療效顯著。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，白花蛇草可增強(qiáng)機(jī)體免疫力，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎球菌等多鐘致病菌均有不同程度的抑制作用［1］。本研究在前人研究工作基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜方法對(duì)不同產(chǎn)地白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B含量進(jìn)行了測(cè)定，通方法學(xué)考察驗(yàn)證，該方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率試驗(yàn)良好，方法可行，為今白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B的研究提供了依據(jù)，同時(shí)也為藥材的開(kāi)發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1藥材：白花蛇舌草藥材購(gòu)于同仁堂，醫(yī)藥大廈等，經(jīng)鑒定所購(gòu)藥材均為茜草科植物白花蛇舌草 Hedyotis diffusa Willd. 的干燥全草。白花蛇舌草產(chǎn)地見(jiàn)表1。

表1　白花蛇舌草藥材來(lái)源

1.2試劑：東莨菪亭標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110753-201314，耳草酮B標(biāo)準(zhǔn)品為實(shí)驗(yàn)室分離純化所得，甲醇為色譜純，水為超純水，冰醋酸、乙醇等其他試劑均為分析純。

1.3儀器：Agilent高效液相色譜儀（美國(guó)惠普安捷倫公司）；TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；AB-135型萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；色譜柱： Agilent Eelipse XDB-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)：385 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

甲醇為流動(dòng)相A，0.1%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫方法見(jiàn)表2。

2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備：精密稱(chēng)取東莨菪亭和耳草酮B對(duì)照品，加適量甲醇配制成每1 mL含東莨菪亭80 μg、耳草酮B60 μg的混合對(duì)照品溶液。

表2　梯度洗脫方法

2.3供試品溶液制備：取白花蛇舌草藥材，粉碎過(guò)120目篩。精密稱(chēng)取白花蛇舌草樣品粉末1.0 g，加入帶有塞得錐形瓶中，量取甲醇溶液100 mL，加入至錐形瓶中，稱(chēng)定重量，超聲30 min，取出，放至室溫，再稱(chēng)定重量，加入甲醇不足減少的重量，混勻，過(guò)濾，量取濾液10 mL，加入50 mL棕色容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混勻，即得供試品溶液［2］。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別精密量取上述東莨菪亭和耳草酮B標(biāo)準(zhǔn)品溶液4 μL、8 μL、10 μL、14 μL、16 μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積數(shù)值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到線性回歸方程為東莨菪亭：Y=383555X+508227，r=0.9998；耳草酮B：Y=271976X+916648，r=0.9996。結(jié)果表明，東莨菪亭在0.047～0.544 μg范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。耳草酮B在0.058～0.924 μg范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。線性關(guān)系見(jiàn)圖1。

圖1　線性關(guān)系圖

2.4.2精密度試驗(yàn)：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果顯示，東莨菪亭和耳草酮B標(biāo)準(zhǔn)品和樣品RSD值分別為0.32%、2.08%，表明儀器精密度良好。

2.4.3穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取供試品溶液，每隔2 h測(cè)定一次峰面積，測(cè)定12 h，根據(jù)測(cè)得東莨菪亭和耳草酮B峰面積，計(jì)算東莨菪亭和耳草酮B含量的平均值及RSD值。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示，在12 h內(nèi)RSD值分別為1.02%、1.58%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱(chēng)取白花蛇舌草供試品溶液6份，分別測(cè)定峰面積值。計(jì)算總東莨菪亭和耳草酮B的含量及RSD值，重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示，東莨菪亭和耳草酮B含量的RSD值分別為1.83%、1.65%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.4.5回收率試驗(yàn)：精密稱(chēng)取同一批次白花蛇舌草供試品溶液，精密加入東莨菪亭和耳草酮B標(biāo)準(zhǔn)品，依次測(cè)定，計(jì)算回收率、RSD值。結(jié)果顯示，所有供試品回收率均介于95%～105%，樣品的平均回收率為99.98%，RSD值為0.092%，＜3%，說(shuō)明本法準(zhǔn)確性較好，方法可行。

2.4.6含量測(cè)定：取不同產(chǎn)地的白花蛇舌草供試品，測(cè)定相應(yīng)樣品的峰面積，根據(jù)對(duì)照品與樣品的峰面積計(jì)算東莨菪亭和耳草酮B含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　不同產(chǎn)地白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B含量（μg/g）

3　討 論

以往研究中較常用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定白花蛇舌草中所含成分含量，本研究應(yīng)用高效液相色譜儀，建立HPLC法對(duì)江西、湖北、安徽等不同產(chǎn)地的白花蛇舌草藥材進(jìn)行了東莨菪亭和耳草酮B含量測(cè)定研究，為今白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B的研究提供了依據(jù)，測(cè)量前取東莨菪亭和耳草酮B對(duì)照品、供試品及空白溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行光譜掃描。供試品和對(duì)照品在385 nm處有最大吸收，而空白溶液無(wú)吸收，測(cè)得數(shù)據(jù)與查詢(xún)相關(guān)報(bào)道文獻(xiàn)接近。白花蛇舌草藥材提取液東莨菪亭和耳草酮B最大吸收波長(zhǎng)與對(duì)照品最大吸收波長(zhǎng)一樣，所以將385 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。測(cè)定結(jié)果表明，不同產(chǎn)地白花蛇舌草藥材中東莨菪亭和耳草酮B的含量有較大的差異，江西白花蛇舌草東莨菪亭和耳草酮B含量最高，分別達(dá)到9.7 μg/g、15.3 μg/g；其次是湖北、安徽；含量最低的是廣西的藥材，東莨菪亭和耳草酮B含量為3.2 μg/g、0.7 μg/g。分析存在這種差異的原因，可能是由于不同地區(qū)的氣候差異、人為環(huán)境等因素引起的［3］。相信隨著對(duì)白花蛇舌草研究的跟進(jìn)一步的研究，白花蛇舌草一定會(huì)在醫(yī)藥領(lǐng)域、化妝品領(lǐng)域、食品等相關(guān)領(lǐng)域發(fā)揮越來(lái)越大的作用。

［1］ 楊嫻,劉汝青,杜德榮,等.白花蛇舌草總黃酮對(duì)黑色素瘤A375和B16細(xì)胞增殖抑制作用的研究［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,6 （10）：844-846.

［2］ 溫麗榮,姚志紅,陳妍,等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定白花蛇舌草中6個(gè)成分的含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志,2014,49（5）：406-411.

［3］ 馮穎,何俊,劉虹,等.不同產(chǎn)地桑葉中6種化學(xué)成分含量的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用同時(shí)測(cè)定［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2013,24（3）：572-574.

R282.710.3

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1671-8194（2016）20-0040-02