通腦疏脈丸毒理學及藥效學實驗研究

楊小源，殷建峰甘肅省中醫院，甘肅蘭州730050；2慶陽市中醫醫院

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通腦疏脈丸毒理學及藥效學實驗研究

楊小源1，殷建峰2△
1甘肅省中醫院，甘肅蘭州730050；2慶陽市中醫醫院

目的：觀察通腦疏脈丸的急性毒性反應、對血瘀證模型大鼠血液流變學的影響、對大鼠血小板聚集和解聚的影響。方法：對通腦疏脈丸進行小鼠急性毒性實驗，因未測出小鼠致死劑量，無法測定LD50，故改測最大給藥量；藥效學實驗采用通腦疏脈丸高劑量組、低劑量組分別灌胃通腦疏脈丸7.5 g/kg（體質量）、2.5 g/kg（體質量）。結果：小鼠灌胃給藥通腦疏脈丸，未發現明顯毒性反應，1日最大給藥量為67.9g/kg（體質量），是臨床人日用量的136倍；通腦疏脈丸高、低劑量可使經腎上腺素和冰水處理后造成的血瘀證模型大鼠全血黏度及血漿黏度明顯降低（P＜0.05），與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。通腦疏脈丸高、低劑量對ADP誘導大鼠全血血小板聚集有明顯抑制作用，能明顯降低1、6分鐘電阻值，與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論：通腦疏脈丸1日內劑量過大口服是安全的，能明顯降低大鼠全血及血漿黏度，抑制血小板聚集和促進血小板解聚，有改善血液流變學異常的作用。

通腦疏脈丸；毒理學；藥效學

通腦疏脈丸系慶陽市中醫醫院科研攻關課題，純中藥制劑，項目編號：慶陽市科技計劃項目KZ2015-29。通腦疏脈丸由麻黃、細辛、桂枝、當歸、干姜、川芎、葛根、赤芍、桃仁、紅花、甘草等11味中藥組成，其主要功效為溫通振陽、化瘀通絡。用于治療缺血性腦中風引起的半身不遂，肢體麻木，言語不利，口眼歪斜等癥狀。本文就通腦疏脈丸毒理學、藥效學進行了實驗研究。

1　材料與方法

1.1實驗藥物通腦疏脈丸（甘肅省慶陽市中醫院提供生產，批號：150401）；復方丹參片（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產，批號：G4A040）；鹽酸腎上腺素注射液（上海禾豐制藥有限公司生產，批號：150411）；肝素鈉注射液（2 mL/支（12500單位），江蘇萬邦生化醫藥股份有限公司生產，批號：1503102）。

1.2實驗動物小鼠，BALB/c，SPF級，雌雄各辦，體質量18～22 g，蘭州大學實驗動物中心提供，動物許可證號：SCXK（甘）2013-0002，醫用動物合格證號：62000800000063；Wistar大鼠，SPF級，雌雄各半，體質量180～220 g，蘭州大學實驗動物中心提供，生產許可證號：SCXK（甘）2013-0002，醫用動物合格證號：62000800000066。

1.3實驗儀器NXE-1B型錐板粘度計（成都儀器廠提供）；WNG-201型紅外血漿黏度計（成都儀器廠提供）；BS110S型sartorius電子天平（北京賽多利斯天平有限公司提供）；QX-200全血血小板聚集儀（上海醫大儀器廠提供）。

1.4實驗方法

1.4.1急性毒性實驗

1.4.1.1LD50測定［1-3］預實驗：取小鼠15只，雌雄各半，隨機分為A、B、C 3組，每組5只。各組小鼠禁食不禁水16小時后分別灌胃給藥，A、B、C組分別按0.04 mL/g體質量灌胃56.6%、28.3%、14.2%的通腦疏脈，各組均給藥1次，觀察給藥后7天內小鼠死亡情況。

1.4.1.2最大給藥量測定［4］取小鼠60只，雌雄各半，隨機分為3組，每組20只。各組小鼠禁食不禁水，16小時后，按最大可給藥體積0.04 mL/g體質量灌胃56.6%（最大可給藥濃度）通腦疏脈丸，實驗各組分別于1日內給藥3次（間隔6小時）、2次（間隔6小時）、1次。觀察記錄各組小鼠給藥后7天內的反應情況，以不產生死亡的最大劑量為最大給藥量，并按下式計算相當于臨床1日給藥量倍數：

1.4.2血瘀證模型大鼠全血黏度及血漿黏度測定取正常喂養1周后的大鼠50只，隨機分為5組，分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、高劑量組、低劑量組，每組10只。各組大鼠給予普通飼料、自由飲水。正常對照組和模型對照組灌胃蒸餾水，陽性藥對照組灌胃復方丹參片0.72 g/kg（體質量）（相當于臨床用量15倍），受試藥高、低劑量組分別灌胃通腦疏脈丸7.5 g/kg（體質量）（相當于臨床用量15倍）、2.5 g/kg體質量（相當于臨床用量15倍），均為0.01 mL/g（體質量）。各組每日給藥2次，連續給藥10日。除空白對照組外，從給藥第2日起，給藥30分鐘后，其余各組大鼠皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素注射液0.000 8 mL/g（體質量），共2次，間隔4小時，在2次注射腎上腺素之間（前后各間隔2小時），將大鼠浸入4℃冰水中5分鐘，連續2日，建立血瘀型模型［3-6］。實驗前12小時禁食不禁水，各組大鼠從股動脈取血，用肝素抗凝，錐板黏度計和血漿黏度計測定大鼠全血黏度和血漿黏度。

1.4.3大鼠血小板聚集和解聚實驗［5-6］取大鼠40只，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只。通腦疏脈丸高、低劑量組分別灌胃通腦疏脈丸7.5、2.5 g/kg（體質量）；陽性藥組灌胃復方丹參片0.72 g/kg（體質量）；正常對照組灌胃生理鹽水，均為0.01mL/g（體質量）。各組每天灌胃1次，連續5天。于末次給藥1.5小時，從頸靜脈取血2 mL放入含25 U/mL肝素5 μL的試管中，混勻。取抗凝血0.5 mL，置硅化管中，加0.5 mL緩沖液，預熱5分鐘，待電阻值恒定后，以ADP（5 μmoL/L）誘導血小板聚集，讀取1分鐘電阻值。清洗并預熱電極，讀取6分鐘電阻值。

1.5統計學方法所有數據均經SPSS 15.0統計學軟件進行處理，計量資料用（χ±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結果

2.1急性毒性實驗給藥后7天后3組均未出現死亡。見表1。

表1　小鼠LD 50預實驗結果

2.2最大給藥量測定給藥后7天3組均未出現死亡，也未發現明顯毒性反應。見表2。

2.3對血瘀證模型大鼠全血黏度及血漿黏度的實驗結果通腦疏脈丸高、低劑量組可使血瘀證大鼠高、中、低切變率下的全血黏度和血漿黏度明顯降低。高劑量組與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），低劑量組與模型對照組比較，差異也有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表2　小鼠最大給藥量實驗結果

表3　通腦疏脈丸對血瘀證模型大鼠全血、血漿黏度的影響mpa·s

2.4對大鼠血小板聚集和解聚的實驗結果通腦疏脈丸高、低劑量連續給藥5天，對ADP誘導的血小板聚集有明顯抑制作用，可以顯著降低1分鐘電阻值，高、低2個劑量組與正常對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；高、低劑量組對血小板自動解聚均有明顯促進作用，可以顯著降低6分鐘電阻值，高、低2個劑量組與正常對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4　通腦疏脈丸對大鼠血小板聚集和解聚的影響

3　結論

對小鼠灌胃給藥通腦疏脈丸，未發現明顯毒性反應，1日最大給藥量為67.9g/kg（體質量），是人臨床日口服劑量的136倍。對經腎上腺素和冰水處理后造成的血瘀證模型大鼠全血和血漿黏度增高，通腦疏脈丸具有明顯降低全血和血漿黏度的作用。通腦疏脈丸還有抑制對ADP誘導大鼠全血血小板聚集和促進血小板解聚的作用。

綜上所述，通腦疏脈丸1日內劑量過大口服是安全的，其具有降低大鼠全血及血漿黏度，抑制血小板聚集和促進血小板解聚的作用。

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Experimental Study on Toxicology and Pharmacology of TongNao ShuMai Pills

YANG Xiaoyuan1，YIN Jianfeng2△
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China；2 Qingyang Municipality Hospital of Traditional Chinese Medicine

Objective：To observe acute toxic reaction of TongNao ShuMai pill and its effects on the hemorheology，platelet aggregation and depolymerization of the rat model of blood-stasis pattern.Methods：Acute toxic test of TongNao ShuMai pill was conducted on the mice，because the lethal dosage and LD50 were not detected out，maximum administration dosage was tested.In the pharmacodynamic study，the rats were divided into low dosage group and high dosage group.They accepted TongNao ShuMai pill in the concentrations of 7.5g/kg body mass and 2.5g/kg body mass respectively.Results：No obvious toxic reaction was found after the mice received intragastric administration of TongNao ShuMai pill.The maximum administration dosage was 67.9g/kg within one day，which was 136 times of human dosage；TongNao ShuMai pill in the low and high dosage could lower the blood and plasma viscosity of the rat model of blood-stasis pattern notably（P＜0.05）which were caused by adrenaline and ice water.Compared with model control group，the differences had statistical meaning（P＜0.05）.TongNao ShuMai pill in the low and high dosage could inhibit whole blood platelet aggregation of ADP-induced rats obviously，and it could obviously decrease one，six resistance values，the difference showed statistical meaning compared with the model control group（P＜0.05）.Conclusion：It's safe to take TongNao ShuMai pill orally in large dose within one day，which could obviously decrease whole blood and plasma viscosity，inhibit platelet aggregation，promote platelet depolymerization and improve abnormal hemorheology.

TongNao ShuMai pill；toxicology；pharmacology

R285.5

A

1004-6852（2016）06-0013-03

2016-02-15

楊小源（1970—），男，副主任中藥師。研究方向：中藥制劑與中藥炮制。

△殷建峰（1969—），男，副主任中藥師。研究方向：中藥制劑與中藥鑒定。