宮頸癌分子病理特征與其預后的相關性

樊孝瓊

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宮頸癌分子病理特征與其預后的相關性

樊孝瓊

目的研究恩施地區宮頸癌患者的分子病理特征及其與預后的相關性。方法選取59例宮頸癌患者作為研究對象，對患者的survivin、p27、CD44v6、MMP-2、TIMP-2的蛋白表達情況和mRNA表達量與預后情況進行對比。結果患者5年總生存率為84.7%。患者survivin、MMP-2、CD44v6表達量與預后情況之間呈現負相關性(P<0.05)，TIMP-2蛋白和mRNA表達量與預后效果呈正相關(P<0.05)；p27表達量與預后效果無相關性(P>0.05)。結論恩施地區宮頸癌患者有良好的預后效果，其主要分子病理特點體現在survivin、MMP-2、TIMP-2、CD44v6的表達。

宮頸癌；分子病理特征；預后

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.07.012

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:1081～1083)

宮頸癌是婦科最為常見的1種惡性腫瘤，但臨床特征不明顯，而且其預后效果較差。近些年來宮頸癌發病呈現出低齡化的趨勢，并且患病人數還在逐年上升[1]。恩施地區的居民有著自己獨特的生活以及飲食習慣，調查顯示此地區居民飲食中攝入微量元素硒的量遠高于其他地區[2]，并且有報道指出微量元素硒以及其化合物對惡性腫瘤的增殖、浸潤有著一定的抑制作用[3]。目前為止，宮頸癌患者的分子病理特征與預后不良的分子病理之間的相關性尚不明確。有鑒于此，本研究選擇我院收治的59例宮頸癌患者作為研究組，對患者病理結果進行分析研究，現詳細報告如下。

1　材料與方法

1.1一般資料

收集我院2008年7月-2010年6月收治的59例宮頸癌患者作為研究對象。患者年齡40～65歲，平均年齡為(51.9±13.8)歲，其中處于宮頸癌Ⅰa期的患者19例，Ⅰb期15例，Ⅱa期15例，Ⅱb期10例；病理類型：46例為鱗癌，13例為腺癌。以上患者的診斷病歷資料以及病理診斷均分別由婦科及病理科醫師進行整理核對，所有診斷均由宮頸癌HE病理切片診斷標準作為最終診斷依據，使用國際婦產科聯盟制定的分期標準作為宮頸癌臨床分期的評判標準。根據臨床分期的不同采用不同的治療方法：使用廣泛子宮切除術對Ⅰa期患者進行治療，使用子宮切除術加淋巴結清掃術對處于其他分期患者進行治療。對所有患者進行長期隨訪，納入本次研究的患者均獲得長期隨訪資料。對患者的5年生存率進行統計學分析，作為評價預后的指標。

1.2研究方法

本次研究所使用的試劑盒survivin多克隆抗體、MMP-2、TIMP-2、CD44v6單克隆抗體、SP試劑盒以及DAB顯色劑均采購自福州邁新公司，實驗步驟按照試劑盒說明書要求進行操作。

定位于細胞胞質的是survivin、MMP-2、TIMP-2陽性染色，染色定位在細胞膜上的是CD44v6陽性染色。細胞陽性的判斷標準為：胞膜、胞質或者細胞核出現淡黃到棕黃色顆粒者判斷為陽性。使用圖像分析儀對陽性信號進行采集并定量分析。

使用購自德國的Leica-Q500IW自動圖像分析系統對免疫組化陽性信號進行圖像分析處理，并在放大倍數為200的鏡下隨機挑選5個視野，系統自動隨機測定每個視野中的3個不同部位，將陽性細胞提取后，測定其光密度值(OD)[4]。

1.3mRNA提取檢測

使用TrizolTM(Promega公司，美國)提取血液中總RNA，按照試劑盒說明書進行操作，并使用DNA/RNA測定儀對總RNA濃度和純度進行測定。取3 μl總mRNA，70 ℃處理10 min后加入4 μl 25 mmol/L MgCl2,2 μl 10×緩沖液，2 μl濃度為10 mmol/L的脫氧核糖核苷三磷酸混合液(dNTP)，1 μl的0.5 g/L寡聚脫氧胸苷酸(Oligo-dT15)，0.5 μl的RNAsin Ribonuclease,0.6 μl濃度為25 U/μl AM逆轉錄酶以及6.9 μl的ddH2O，將混合液充分混合后60 min 42 ℃，5 min 95 ℃。

survivin、p27、CD44v6、MMP-2以及TIMP-2引物由北京奧科生物工程公司設計合成。Survivin基因引物序列上游為5'-CCCTGCCTGGCAGCCCTTTC-3'；下游為5'-CTGGCTCCCAGCCTTCCA-3'。P27基因引物序列上游為5'-ACGGAATTCATGT-3'；下游為5'-ACGCTCGAGTTACGTTTGACGTCTTCTGA-3'。CD44v6基因引物序列上游為5'-TCCAGGCAACTCCTGTTGTCGAA-3';下游為5'-ACAGAGTACTTGCGCTCAGGGAG-3'。MMP-2基因引物序列上游為5'-CACCTACACCAAGAACTTCC-3';下游為5'-GTTCCCCACGAATCAACGAGA-3'。TIMP-2基因引物序列上游為5'-ATGCCATCCTGCGTCTG-3';下游為5'-AACACAGCCTTCTCCTCCTG-3'。以β-actin作為內參照，上游引物為：5'-CAACTTCATCCACGTTCACC-3';下游為5'-GAAGAGCCAAGGACAGGTAC-3'。在總體積為25 μl的總反應體積中加入2 μl cDNA，各1 μl上下游引物，12.5 μl的PCR,Master Mix，在加入8.5 μl的去離子水，放于PCR儀中，反應條件設定為：10 min 95 ℃的預變性，30 s 95 ℃，30 s 72 ℃，進行40個循環，最后在72 ℃下延伸10 min。反應結束后采用瓊脂糖凝膠電泳，使用軟件自動讀取灰度值。

1.4統計學方法

2　結果

2.1患者5年生存率

患者5年生存率為84.7%，其中鱗癌患者的5年生存率要高于腺癌患者，Ⅰ期患者生存率也要高于Ⅱ期患者。見表1。

表1　患者5年生存率(例，%)

2.2分子指標表達情況對比

研究組中survivin、MMP-2、CD44v6分子表達量明顯隨著分期的增高而增高(P<0.05)，TIMP-2在研究中表達量則表現出相反的趨勢(P<0.05)；p27表達量之間無明顯差異(P>0.05)。見表2。

表2　分子指標表達情況對比±s)

2.3Survivin、p27、CD44v6、MMP-2以及TIMP-2 mRNA表達對比

研究組中survivin、MMP-2、CD44v6表達量明顯隨著分期的增高而增高(P<0.05)，TIMP-2在研究中表達量則表現出相反的趨勢(P<0.05)；P27mRNA表達量之間無明顯差異(P>0.05)，見表3。

表3　Survivin、p27、CD44v6、MMP-2以及TIMP-2mRNA表達水平

3　討論

宮頸癌預后效果較差，5年生存率相對較低，目前對其原因的研究發現主要是與其組織病理學有著密切的相關性[5]。 但是通過常年的臨床觀察發現，在我院所在的恩施地區，宮頸癌患者有良好的預后效果，并且患者預后5年生存率相對較高，對此進行研究可以對其他地域患病人群具有指導意義。

在給予相同的治療方案進行治療后，患者預后效果較差主要是由于局部控制較差和遠處轉移率較高所引起的，然而這兩個因素與腫瘤的浸潤轉移和凋亡相關分子有著密切的聯系[6]。Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibition apoptosis protein,IAP)家族的同族體，其表達在惡性腫瘤中較為常見，在成人分化組織和癌旁正常組織中不表達。研究證實，其在腫瘤的發生、發展過程中有著極其重要的作用[7]。本次研究我們發現，恩施地區宮頸癌患者survivin蛋白陽性表達率明顯增高。

CD44屬于粘附分子家族，CD44v6可能是判斷腫瘤生物學行為及預后因素的重要指標[8]。在本次研究中，恩施地區宮頸癌患者CD44v6蛋白陽性表達率明顯增高，此結果提示恩施地區宮頸癌患者CD44v6蛋白具有顯著的地區特征，其有可能也是導致恩施地區宮頸癌患者預后良好的原因之一。

通過大量的臨床發現，腫瘤發生轉移以及預后效果較差與基質金屬蛋白酶的過度表達有著直接的關系，故此在判斷腫瘤預后效果以及生物學特征時，基質蛋白酶便成為了一個重要的指標[9]。其中MMPs和TIMPs之間的動態平衡的破壞是導致腫瘤繼續發展的重要因素之一，因此可以通過抑制MMP-2的活性，使其不能和TIMP-2結合，進而使得腫瘤血管的生成受到抑制，最終達到控制腫瘤浸潤的效果[10]。

[1]徐妍婷，蔡為民，耿建祥，等.健康婦女及宮頸癌患者HPV感染基因型分布的研究〔J〕.國際檢驗醫學雜志，2014,35(22)：3022-3024.

[2]張欣，牟敏，彭祚全.恩施高硒區居民膳食硒攝入量監測報告〔J〕.微量元素與健康研究，2013，30(3)：42-44.

[3]雷楊，路喜安，齊廣強，等.硒結合蛋白-1在宮頸癌中的表達及意義〔J〕.中國藥物與臨床，2010,10(3)：496-498.

[4]羅儀,王劍,趙昌銀,等.35歲以下宮頸癌患者的分子病理高危因素分析〔J〕.中國腫瘤臨床,2006,33(21):1221-1224.

[5]繼勇，陳雪蓮.青年人宮頸癌臨床病理特征和預后的研究〔J〕.臨床腫瘤學雜志，2005，10(1)：45-48.

[6]張美琴，陳鳴之.年輕婦女子宮頸癌174例臨床及預后分析〔J〕.中華婦產科雜志，2003，38(11)：689-693.

[7]Chakravarti A，Noll E，Black PM，et al.Quantitatively determined surviving expression levels are of prognostic value in human gliomas〔J〕.Clin Oncol，2002，20(4)：1063-1068.

[8]Ponta H，Sherman L，Herrlich PA.CD44：from adhesion m-

olecules to signaling regulators〔J〕.Nat Rev Mol Cell Biol，2003，4(1)：33-45.

[9]Adachi Y，Yamamoto H，Itoh F，et al.Clinicopathologic and prognostic significance of matrilysin expression at the invasive front in human colorectal cancers〔J〕.Int J Cancer，2001，95(5)：290-294.

[10]Yamamoto H，hoh F，Iku S，et al.Expression of matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in human pancreatic adenocarcinomas：dinicopathologic and prognostic significance of matrilysin expression〔J〕.J Clin Oncol，2001，19(4)：1118-1127.

(編輯：甘艷)

Correlation between Molecular Pathologic Features and Prognosis of Cervical Carcinoma

FANXiaoqiong.

AffiliatedHospitalofHubeiInstituteforNationalities,Enshi,445000

ObjectiveTo study the correlation between molecular and pathological factors of cervical cancer in Enshi area.Methods59 cases of cervical cancer patients were selected as the research object,the p27,CD44v6,survivin,MMP-2,TIMP-2 protein expression and prognosis were compared.ResultsThe overall 5-year survival rate of patients was 84.7%.The expression levels of survivin,MMP-2,CD44v6 were negatively correlated with the prognosis(P<0.05).The expression of TIMP-2 in patients with mRNA was positively correlated with the prognosis(P<0.05);the expression of p27 was not correlated with the prognosis(P>0.05).ConclusionThe prognosis of cervical cancer patients in Enshi region is good,and the main molecular pathological features of cervical cancer patients are survivin,TIMP-2,MMP-2 and CD44v6.

Cervical cancer;Molecular pathological features;Prognosis

445000 湖北民族學院附屬民大醫院

R737.33

A

1001-5930(2016)07-1081-03

2015-09-07

2016-05-05)