西藏首例IVF-ET患者成功妊娠報道

孟祥黔，耿麗紅#，李君，劉鋒，何靜，唐剛，全雄杰，羅萍，王斌*，鐘影

(1. 四川省成都市錦江區婦幼保健院生殖醫學中心，成都　610016；2. 西藏阜康婦產兒童醫院生殖醫學中心，拉薩　850000)

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西藏首例IVF-ET患者成功妊娠報道

孟祥黔1，2，耿麗紅1，2#，李君2，劉鋒1，2，何靜2，唐剛2，全雄杰2，羅萍2，王斌2*，鐘影1*

(1. 四川省成都市錦江區婦幼保健院生殖醫學中心，成都610016；2. 西藏阜康婦產兒童醫院生殖醫學中心，拉薩850000)

本文報道1例體外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者在地處海拔3 650米的西藏阜康婦產兒童醫院生殖醫學中心成功妊娠的案例，探討高海拔地區的生殖醫學中心開展人類輔助生殖技術的可行性。

高海拔；西藏；首例；體外受精-胚胎移植

患者女，漢族，29歲，男方為藏族，33歲。2012年開始未避孕至今未孕，2013年在西藏阜康婦產兒童醫院生殖醫學中心行輸卵管造影提示“雙側輸卵管暢通”。于2015年行自然周期卵泡監測，卵泡生長慢，16 mm左右排卵。男方2015年8月精液檢查未見異常，精液體積為4.8 ml，密度為61×106/ml，活率為79%，精子正常形態率為2%。2015年7～8月給予克羅米芬促排卵2個周期，均有優勢卵泡和排卵，指導性同房未孕，9月在我院行宮腔內人工授精(IUI)1個周期未孕，10月在成都西囡婦科醫院再次行IUI 1個周期未孕。2015年11月要求試管助孕治療。患者基礎FSH、LH、E2水平分別為8.36 U/L、9.81 U/L、183.5 pmol/L，超聲檢查顯示子宮形態正常，雙側卵巢卵泡18～22個。臨床診斷：不明原因不孕。

促排卵：患者使用常規長方案促排卵[1]：黃體中期給予促性腺激素釋放激素激動劑(GnRH-a，達必佳，Ferring，瑞士)0.1 mg肌肉注射，14 d后予以重組卵泡刺激素(rFSH，果納芬，Merck Serono，德國)150 U啟動超促排卵，B超監測卵泡生長情況，6 d后卵泡生長較慢，增加促排卵藥物劑量至175 U，繼續促排4 d，Gn總劑量1 600 U。3個目標卵泡直徑>18 mm后，給予重組人絨毛膜促性腺激素(rHCG，艾澤，Merck Serono，德國)250 mg肌肉注射，36 h后在B超引導下經陰道穿刺取卵。

胚胎實驗室情況：2015年12月27日患者獲卵11枚，短時受精4 h后脫顆粒細胞能觀察到第二極體者8枚，第1天(D1)正常受精6枚，2枚未見原核(PN)；D2卵裂8枚，D3優質胚胎3枚，D3移植2枚優質胚胎(評分：830、840)，剩余胚胎進行囊胚培養；D5形成囊胚3枚(評分：4BC、4CC、4CC)均進行玻璃化冷凍，D6形成囊胚1枚(評分：4CC)也進行玻璃化冷凍。

胚胎培養及質量評估：卵母細胞體外授精4 h后進行脫顆粒細胞，隨后轉入序貫培養液(COOK)中培養。本實驗室采用常規評分法對胚胎進行評分，D3胚胎采用WIH評分法[2]，囊胚采用Gardner評分法[3]。

胚胎移植與妊娠結果判斷：D3選擇優質胚胎2個在B超引導下進行胚胎移植，移植后4周超聲檢查顯示子宮腔內單孕囊，可見胎心搏動，確定為臨床妊娠，至本文撰寫時妊娠進展順利。

討論高原地區胚胎實驗室培養環境是高原地區行輔助生殖技術(ART)助孕患者成功的關鍵，截至目前尚未見海拔3 650米及以上地區關于人類胚胎培養的相關報道。隨著科學技術的發展，研究者不斷地完善胚胎體外培養環境，但仍未能完全模擬體內胚胎發育所需的環境。影響胚胎體外培養的主要因素有溫度、培養液PH值、培養液滲透壓等。培養液溫度維持在37℃主要是為了不破壞胚胎內外的許多蛋白和酶的三維結構，溫度的升高和降低都會影響胚胎的發育，因此，我們在高原地區進行胚胎培養時的溫度也設定為37℃[4]。目前培養液大部分利用碳酸氫鹽-二氧化碳緩沖體系來維持生理性PH值(正常PH值在7.2～7.4之間)，培養液的PH水平可以調節氧化代謝和糖酵解過程中酶通路和反應、細胞分裂和分化、細胞骨架運輸等[5-7]。由于胚胎具有特殊的膜轉運系統，因此胚胎可以適應一定范圍內PH波動的培養液，恰好胚胎在發育過程中的不同階段所需PH也不盡相同[8-10]。為了維持這個特定的PH水平，往往要求培養箱提供較穩定的CO2濃度[11-13]。商品化培養液因公司的不同，其產品使用時的PH要求也各不相同，比如COOK要求7.2～7.5、Quinn’s Advantage要求7.1～7.3、HTF要求7.3～7.5、Global要求7.25～7.30、Vitrolife要求7.2～7.4等。另外，各個培養液廠商也會對不同海拔高度要求不同CO2濃度，從而維持所需的培養液PH。由此可見，高原地區培養液PH值的摸索尤為重要。

綜上所述，西藏地區開展ART時，胚胎實驗室使用COOK培養液對CO2濃度要求與廠商提供的參考值有所出入，后續我們將進行更為深入的實驗研究，進一步闡述高海拔地區胚胎培養環境的具體要求，旨在為今后高海拔地區開展人類ART提供參考，同時也填補了海拔3 600米以上地區開展人類ART相關數據的空白。

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[編輯：辛玲]

2016-03-31；

2016-04-13

四川省醫學科研青年創新課題(Q15056)；四川省科技廳基礎醫學研究項目(2014JY0110)

孟祥黔，男，四川成都人，助理研究員，生理學專業.(#共同第一作者；*

，Email：yzhong08@126.com；xzfkyy2012@163.com)

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.08.015