填精補腦方對老年癡呆大鼠行為學及海馬膽堿能神經遞質的影響*

王愛梅

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填精補腦方對老年癡呆大鼠行為學及海馬膽堿能神經遞質的影響*

王愛梅

目的觀察填精補腦方對老年癡呆大鼠行為學及海馬膽堿能神經遞質的影響。方法健康成年SD大鼠隨機分為對照組、模型組、腦復康組、填精補腦方組，每組10只。雙側海馬注射Aβ25-35構建老年癡呆大鼠模型，各組給予相應藥物灌胃治療20 d。用藥結束后，測定大鼠的學習記憶能力及海馬ChAT、AChE的酶學活性。結果與模型組相比，用藥組達標所需訓練次數(shù)、錯誤反應次數(shù)明顯減少(P<0.01)；ChAT活性升高，AChE活性降低(P<0.01)。結論填精補腦方可以改善老年癡呆模型大鼠學習記憶功能，其機制可能與改善海馬中膽堿能神經遞質的代謝有關。

填精補腦方；老年癡呆；學習記憶；ChAT；AChE

老年性癡呆又稱阿爾茨海默病 (Alzheimer，s disease, AD)，是一種以記憶力減退、認知功能障礙為主要特征的中樞神經系統(tǒng)變性疾病。隨著老齡化社會步伐的加快，探索AD的發(fā)病機制，尋找新的治療藥物已成為廣大科研和臨床工作者的關注重點，中醫(yī)藥在老年癡呆病的預防、治療、保健康復等方面有顯著的優(yōu)勢。膽堿能神經遞質是腦內的重要神經遞質，主要參與運動、情感和認知等眾多生理過程，與大腦的學習記憶能力和認知能力之間有密切關系[1,2]。本實驗以雙側海馬注射Aβ25-35方法構建老年癡呆大鼠模型，通過觀察填精補腦方對模型大鼠學習記憶能力及海馬中膽堿能神經遞質含量的影響，進而探討其作用機制，為臨床治療老年癡呆提供一定的理論依據。

1　材料與方法

1.1實驗動物健康成年SD大鼠40只，SPF級，體質量(220±20)g，雌雄各半，由河南省實驗動物中心提供 (許可證號：SCXK(豫)2010-0002)。

1.2主要儀器與試劑腦立體定位儀，成都儀器廠；MG-3Y迷宮刺激器，成都泰盟科技有限公司產品；V-1200型可見分光光度計，上海棱譜儀器儀表有限公司；FSH-Ⅱ型高速電動勻漿機，江蘇金運市環(huán)宇科學儀器廠；Aβ25-35，美國Sigma試劑公司，批號A4559；填精補腦方藥物，河南省南陽市醫(yī)藥公司；腦復康(吡拉西坦片)，湖北華中藥業(yè)有限公司，批號20130922；膽堿乙酰轉移酶試劑盒和乙酰膽堿酯酶試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號分別為20130920，20130911。

1.3填精補腦方的制備取熟地黃20 g，黃精20 g，三七參10 g，川芎15 g，鹿茸10 g，山萸肉20 g，靈芝15 g，天麻15 g，制何首烏15 g，加入6倍量水煎煮2次，合并水煎液，配制成2 g/ml的藥液，高壓滅菌，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4模型制備及給藥實驗動物在標準環(huán)境適應性飼養(yǎng)1周后，隨機分為對照組、模型組、腦復康組、填精補腦方組，每組10只。各組大鼠經腹腔注射10% 水合氯醛 (0.3 ml/100 g) 麻醉后，固定于腦立體定位儀上，參照Paxinos大鼠腦立體定位圖譜[3]，由Bergam點向后3.2 mm，中線旁2.2 mm，用骨鉆鉆透雙側顱骨，在腦立體定位儀引導下，微量注射器垂直進針4 mm，模型組及給藥組緩慢注入雙側海馬組織內4 μl的Aβ25-35溶液緩慢(每側2 μl)，對照組注入等體積無菌生理鹽水。術后次日腦復康組、填精補腦方組分別給予腦復康(40 mg/ml)及填精補腦方(2 g/ml)灌胃，各組動物按1 ml/100 g給藥，對照組和模型組每天給予1 ml/100 g的生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)20 d。各組動物每周記錄一次體質量，調整注射劑量。

1.5大鼠學習記憶能力測定(Y 迷宮法)參照楊偉文章[4]記錄大鼠達標所需的訓練次數(shù)，作為大鼠學習能力的觀測指標。學習能力測試24 h后，觀察大鼠在 30 次測試反應中的錯誤次數(shù)，將其作為記憶能力檢測的指標。

1.6海馬ChAT、AChE的檢測最后一次Y 迷宮實驗結束之后，斷頭處死大鼠，取大鼠海馬組織，按照試劑盒要求進行ChAT、AChE的檢測。

2　結果

2.1各組大鼠學習記憶能力的比較與對照組比較，模型組達標所需訓練次數(shù)、錯誤反應次數(shù)明顯增多(P<0.01)；與模型組比較，腦復康組、填精補腦方組達標所需訓練次數(shù)、錯誤反應次數(shù)明顯減少(P<0.01)，兩組之間差異不明顯(P>0.05，表1)。表明填精補腦方可以改善老年癡呆大鼠的學習記憶能力。

2.2填精補腦方對老年癡呆大鼠海馬ChAT、AChE活性的影響與對照組相比，模型組大鼠海馬中ChAT活性明顯下降，AChE活性明顯增加(P<0.01)。與模型組相比，用藥物組大鼠海馬中ChAT活性明顯升高，AChE活性明顯降低(P<0.01)。腦復康組、填精補腦方組之間上述指標沒有明顯改變(P>0.05)，見表1。

表1　各組大鼠Y迷宮及海馬ChAT、AChE活性檢測結果

注：與對照組比較1)P<0.01；與模型組比較2)P<0.01

3　討論

中醫(yī)理論認為，AD的發(fā)病機制是由于腎精虧損，腦髓失養(yǎng)、瘀血阻絡所致。填精補腦方藥物以補血滋陰，益精填髓，健脾益腎，活血祛瘀為主，符合AD的治療理論。AD因腦萎縮導致認知功能下降、記憶力嚴重減退，智力下降、注意力無法集中等臨床表現(xiàn)，因此在AD的診斷和治療評價中，學習記憶水平是最重要的指標[5]。本實驗Y迷宮實驗結果發(fā)現(xiàn)，模型組達標所需訓練次數(shù)、錯誤反應次數(shù)明顯增多；腦復康組、填精補腦方組達標所需訓練次數(shù)、錯誤反應次數(shù)明顯減少，表明填精補腦方可以改善老年癡呆大鼠的學習記憶能力。

膽堿功能低下假說認為[6,7]：中樞膽堿能神經系統(tǒng)與學習記憶之間有重要聯(lián)系，膽堿能神經元缺失導致腦內與學習記憶密切相關的神經遞質ACh的減少，是AD學習記憶障礙的重要機制。AD患者中樞神經系統(tǒng)中膽堿能神經功能明顯下降，且下降程度和AD的臨床癥狀嚴重程度密切相關。ChAT是合成ACh的關鍵酶，AChE是降解ACh的關鍵酶。ChAT和AChE的活性與腦內ACh的含量密切相關，兩者共同維持了ACh含量的動態(tài)平衡。本實驗結果發(fā)現(xiàn)：與對照組相比，模型組大鼠海馬中ChAT活性明顯下降，AChE活性明顯增加。與模型組相比，用藥物組大鼠海馬中ChAT活性明顯升高，AChE活性明顯降低。這表明填精補腦方可以提高老年癡呆模型大鼠海馬中ChAT活性，抑制AChE活性，從而增加海馬中ACh的含量，在改善學習記憶功能方面發(fā)揮一定的作用。

綜上所述，填精補腦方對老年癡呆模型大鼠學習記憶功能具有改善作用，其機制可能與改善海馬中膽堿能神經遞質的代謝有關。

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河南省重點科技攻關項目(132102310263)

河南南陽醫(yī)學高等專科學校(南陽 473061)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.13.021

1003-8914(2016)-13-1882-02

(本文校對：李弋2015-12-02)